生物化學(xué)技術(shù)1生命大分子物質(zhì)的制備-資料下載頁(yè)
2025-01-16 06:49本頁(yè)面
【正文】 膠過(guò)濾等方法脫鹽等 二、吸附法 用干葡聚糖凝膠 G25（或吸水棒）加入抽提液中， 1∶ 5混合，利用凝膠的吸水性去除抽提液中的水分（ 注意：若凝膠對(duì)有效成分有吸附，則不宜用此法濃縮 ） 三、超 濾 法 將抽提液裝入超濾裝置，在氮?dú)饣蚩諝鈮毫Γ? 105Pa）下，使小分子物質(zhì)（包括水等）通過(guò)半透膜除去，而大分子物質(zhì)則留在膜內(nèi)，即起到濃縮的目的，又發(fā)揮純化的作用（如硝酸纖維素膜） 四、透 析 法 將裝有抽提液的透吸袋（半透膜袋）埋于 PEG或甘油中，利用其強(qiáng)親水性吸干抽提液中的水分 五、減壓蒸餾法 在減壓（真空）狀態(tài)下進(jìn)行蒸餾。當(dāng)真空度較高時(shí)，溶液沸點(diǎn)可控制在較低溫度（如 30℃ 以下） 適合于常溫（ 30℃ ）較穩(wěn)定的物質(zhì)的濃縮 六、冰凍干燥法 原理： 利用低溫真空升華原理；即是將冰凍的抽提液置抽真空的干燥器中（如 P2O硅膠等），水從固態(tài)升華為氣態(tài)并被干燥劑吸附，使抽提液濃縮 第六節(jié) 純化方案的設(shè)計(jì)與評(píng)價(jià) 純化方案的定義 指在純化某一物質(zhì)過(guò)程中，將幾種分離方法（如沉淀、離子交換、凝膠過(guò)濾等）有機(jī)地互補(bǔ)聯(lián)合形成的純化工藝流程 一、純化方案的設(shè)計(jì) 選擇 分離方法： 一般從抽提液中有效成分和雜質(zhì)之間理 化性質(zhì)的差異性考慮的 純化方案中各分離方法的排布原則 一般應(yīng)當(dāng)先選用粗放 、 快速 、 有利于縮小樣品 體積和后工序 + 處理的方法 ， 而精確 、 費(fèi)時(shí)和需樣品量少的方法 ， 則適宜后選用 ?選擇 依據(jù) ?沉淀法 ?離子交換層析 ?凝膠層析 ?親和層析 ?電泳 從粗到精，從簡(jiǎn)到繁 二、純化方案的評(píng)價(jià) ? 評(píng)價(jià)方法 ：對(duì)純化過(guò)程的每一步收集到的溶液都要進(jìn)行有效成分的含量測(cè) 定 ， 并將各自的比活力 (活力單位數(shù)／毫克蛋白 )、 純化倍數(shù) (每步的比活力／粗抽提液的比活力 ) 和收得率 ( 100%)計(jì)算出來(lái) 。 視純化倍數(shù)的大小 ， 收得率的高低 ， 就能初步確定每種分離方法的應(yīng)用價(jià)值 粗抽提液總活力每步的總活力 ?? 一般認(rèn)為 ：凡是在特定實(shí)驗(yàn)中能增大純化倍數(shù)和提高收得率的方法均屬有應(yīng)用價(jià)值的；反之 ， 則應(yīng)用價(jià)值不大 ?在實(shí)踐中 對(duì)純化倍數(shù)和收得率的要求 ， 要根據(jù)材料來(lái)源的難易而變化：若材料來(lái)源困難 ， 則希望提高收得率；反之 ， 則希望提高純化倍數(shù) 以從賽氏桿菌 (Serratia sp． )提取 L門冬酰胺酶 為例 ， 說(shuō)明純化方案與純化倍數(shù)和收得率的關(guān)系 第七節(jié) 有效成分純度和性質(zhì)的分析 ?鑒定生物制品純度的方法：電泳、免疫分析、薄層層析、薄膜層析等 ?定性定量方法：光譜法、色譜法等 ?分子量測(cè)定方法：凝膠過(guò)濾、電泳法等 測(cè)定了純度、定性、定量的純化制品，即可按成本的高低和用量的多少分別分裝并保存于 4℃ 或 20℃ 備用
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