生物大分子分離純ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 13:16本頁面
【正文】 漿器 過濾 勻漿液 為減低研磨或勻漿過程中發(fā)熱，所用器皿和溶液需要預(yù)冷 蛋白質(zhì)的粗提 原 理 中性鹽類能破壞溶液中蛋白分子表面的雙電層和水膜，從而使蛋白質(zhì)從溶液中凝聚沉淀析出。（但沉淀不同的蛋白質(zhì)所需鹽類的濃度不同。例如， 50％飽和的硫酸銨能使血清中的球蛋白沉淀，而33％飽和的硫酸銨則使 γ球蛋白沉淀。）因此，可根據(jù)所要分離的蛋白質(zhì)，選擇不同飽和度的硫酸銨溶液進(jìn)行鹽析。 加磷酸緩沖溶液、再加硫酸銨飽和溶液。要在攪拌下緩慢勻少量多次地加入盡量避免局部硫酸銨濃度過大而造成不應(yīng)有的蛋白質(zhì)沉淀。 在低濃度硫酸銨中鹽析可采用離心分離 。 勻漿液 +藥品混勻 轉(zhuǎn)移 離心 粗蛋白 等電點(diǎn)沉淀技術(shù) 許多蛋白質(zhì)在其等電點(diǎn)（ pI）處凈電荷為零，溶解 度最低，可以沉淀出來。故選用適當(dāng)?shù)木彌_液，調(diào)節(jié) pH，可將目的物以沉淀狀態(tài)分離，再重新溶于適當(dāng)?shù)木彌_液，以供進(jìn)一步純 可嘗試調(diào)配 pi= ，沉淀所需蛋白。 蛋白的純化 ? 層析： ? 離子交換層析：定相是具有固定電荷的離子交換劑，動(dòng)相是具有不同 PH值和離子強(qiáng)度的溶液 ? 凝膠層析：又稱凝膠過濾、分子篩層析、凝膠滲透層析等。主要是根據(jù)多孔凝膠對不同大小分子的排阻效應(yīng)不同而進(jìn)行分離的。 ? 吸附層析：主要根據(jù)物質(zhì)對活性固體表面吸附親和力的差異來分離。 ? 分配層析：是根據(jù)素質(zhì)在定相中溶解度的差異或在定相和動(dòng)相中溶解度的差異來進(jìn)行分離的 ? 親和層析：是根據(jù)生物大分子的生物特異性吸附來進(jìn)行分離的。 粗蛋白 純化蛋白 活性的檢驗(yàn) ? 根據(jù)不同的蛋白酶的不同結(jié)構(gòu)，有相對的藥品進(jìn)行檢驗(yàn)，造成顏色反應(yīng)等。 ? 如谷丙轉(zhuǎn)氨酶加丙氨酸和 a酮戊二酸，生成丙酮酸和谷氨酸，再加顯色劑 2， 4二硝基苯肼生成丙酮酸二硝基苯肼，用比色法，可計(jì)算其活性。 純化蛋白 標(biāo)準(zhǔn)蛋白 SDS凝膠電泳 根據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)蛋白的比對鑒定出蛋白
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