生物大分子分離純ppt課件(參考版)
2025-05-04 13:16本頁面
【正文】 ? 如谷丙轉(zhuǎn)氨酶加丙氨酸和 a酮戊二酸，生成丙酮酸和谷氨酸，再加顯色劑 2， 4二硝基苯肼生成丙酮酸二硝基苯肼，用比色法，可計算其活性。 ? 分配層析：是根據(jù)素質(zhì)在定相中溶解度的差異或在定相和動相中溶解度的差異來進(jìn)行分離的 ? 親和層析：是根據(jù)生物大分子的生物特異性吸附來進(jìn)行分離的。主要是根據(jù)多孔凝膠對不同大小分子的排阻效應(yīng)不同而進(jìn)行分離的。故選用適當(dāng)?shù)木彌_液，調(diào)節(jié) pH，可將目的物以沉淀狀態(tài)分離，再重新溶于適當(dāng)?shù)木彌_液，以供進(jìn)一步純 可嘗試調(diào)配 pi= ，沉淀所需蛋白。 在低濃度硫酸銨中鹽析可采用離心分離 。 加磷酸緩沖溶液、再加硫酸銨飽和溶液。例如， 50％飽和的硫酸銨能使血清中的球蛋白沉淀，而33％飽和的硫酸銨則使 γ球蛋白沉淀。 制作組織漿液 取新鮮動物肝臟剪碎冰放進(jìn)培養(yǎng)皿中 移入勻漿器 過濾 勻漿液 為減低研磨或勻漿過程中發(fā)熱，所用器皿和溶液需要預(yù)冷 蛋白質(zhì)的粗提 原 理 中性鹽類能破壞溶液中蛋白分子表面的雙電層和水膜，從而使蛋白質(zhì)從溶液中凝聚沉淀析出。 取動物肝臟組織 制作組織漿液 所需蛋白的粗提 蛋白的純化 活性的檢驗 凝膠電泳鑒定提取純度 實驗主要流程 取動物肝臟組織 ? 材料選擇。 ? 保存 ? 保存應(yīng)在低溫避光環(huán)境下，有時還需加入防腐劑或穩(wěn)定劑，防止生物大分子變性失活。分離提純各種生物大分子，主要根據(jù)各種物質(zhì)的分子大小、溶解度、帶電性、親和力大小等差異，選用有機(jī)溶劑沉淀，等電點沉淀，鹽析，層析，電泳，超離心，吸附，結(jié)晶等方法 。 分離純化 ? 剛提取得到的大分子物質(zhì)，往往是粗制品，含有許多雜質(zhì)，必須進(jìn)一步分離純化。稀鹽溶液和緩沖液對蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性好，溶解度大，是提取蛋白質(zhì)和酶最常用的溶劑。 提取時所選擇的條件應(yīng)有利于目的產(chǎn)物溶解度的增加和保持其生物活性。 影響提取的因素主要有： 目的產(chǎn)物在提取的溶劑中溶解度的
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