如何正確設(shè)計從生物樣品中分離純化生物大分子-全文預(yù)覽
【正文】 替代氯仿，結(jié)果表明二氯甲烷 /甲醇能夠取代氯仿 /甲醇，因此能夠避免氯仿帶來的健康、安全和管理問題。 II. 操作方法 ：按照 Folch method法 進行操作： ? 先配制 氯仿 /甲醇 =2/1（ v/v），取組織按 1： 20的量和 氯仿 /甲醇 一起組織均漿，分層后在室溫下在搖床中搖動 1520分鐘 。 ? 測定 ：一般選用 紫外分光光度法 或 溴乙錠熒光法 測定核酸的含量。常用方法如下： ? 鹽溶液沉淀 ：如 MgCl2； NaAc； KAc等。 ? 同類核酸的分離 ：（ 1） RNA混合物的分離：多應(yīng)用柱層析、梯度離心及逆流分溶等方法。 ? 防止核酸生物降解 ? DNA酶抑制劑 ：金屬離子螯合劑；陰離子型表面活性劑 ? RNA酶抑制劑 ：皂土； DEPC(二乙基焦碳酸鹽 )；肝素；復(fù)合硅酸鹽； RNase阻抑蛋白；氧釩核糖核苷復(fù)合物 ② 分離純化的 步驟 ： ? 取材 ：核酸在細胞內(nèi)部，所以需要破碎細胞才能取得核酸，常用方法如下：高速組織搗碎機搗碎；玻璃勻漿器勻漿；超聲波處理法；液氮研磨法；化學(xué)處理法 (SDS、 LDS，吐溫 80等）；生化法（溶菌酶、纖維素酶等） ? 除雜 ： ? 肝糖元、淀粉及粘多糖 ：取材前盡量減少組織中多糖的含量，如先使動物饑餓數(shù)天然后殺死；加入淀粉酶；在濃磷酸鹽存在下，以 2甲氧基乙醇抽提核酸提取液；以鈣鹽沉淀 DNA，再以草酸鉀處理，使之形成 DNA鉀鹽回收，然后用離子交換法吸附 DNA。 各種生物大分子進行分離提純的技術(shù)路線要點 的分離純化 ① 分離純化 原則 ： ? 保持核酸分子一級結(jié)構(gòu)的完整性 ? 意義：遺傳信息全部儲存在 一級結(jié)構(gòu) 之中，核酸的 — 級結(jié)構(gòu)還決定其高級結(jié)構(gòu)的形式以及和其他生物大分子結(jié)合的方式。 ? 固態(tài)時和凍干時的穩(wěn)定性。 、干燥與保存 常用的檢測方法 ? 物理、化學(xué)方法： 比色法、氣相 /液相色譜法、 光譜法（紫外／可見、紅外和熒光等分光光度法） 、 電泳法、以及核磁共振等。 同樣的一類物質(zhì)往往有很多種方案可以進行分離提純，但如何根據(jù)所需生物大分子的種類、它所處的生物環(huán)境、客觀因素等種種條件來選擇最好的一種分離純化方式，是整個實驗最為困難的步驟。 2. 建立相應(yīng)可靠的分析測定方法 分離提純最為重要的就是最終的 “ 純度 ” ，所以一套完善可靠地分析測定方法就是進行工作的前提條件。 ? 蛋白質(zhì)、核酸和多糖分子都有各具特征的 高級結(jié)構(gòu) ，正確的高級結(jié)構(gòu)是生物大分子執(zhí)行其生物功能的必要前提。實際上生物大分子的 特點 在于其表現(xiàn)出的 各種生物活性和在生物 新陳代謝 中的作用。常見的生物大分子包括 蛋白質(zhì) 、 核酸 、 脂類 、 糖類 。 ? 蛋白質(zhì)鏈（或稱肽鏈）、核酸鏈和糖鏈都有 方向性 ，盡管方向性的體現(xiàn)各不相同。
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