醫(yī)院抗生素分離與純化docxdocx(編輯修改稿)
2025-08-13 22:20 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 超過它的溶解度時(shí)就有結(jié)晶析出。(3)過飽和冷卻結(jié)晶。使溶液冷卻降溫以維持一定過飽和度,不用除去溶劑,優(yōu)點(diǎn)是能耗小設(shè)各構(gòu)造及操作較簡(jiǎn)單,但生產(chǎn)速率和產(chǎn)率相應(yīng)較低,難以自動(dòng)控制。(4)鹽(溶)析結(jié)晶。加一種物質(zhì)于溶液中,以便溶質(zhì)的溶解度降低形成過飽和溶液而結(jié)晶。 色譜法色譜法是基于混合物各組分在兩相(固定相和流動(dòng)相)之間的不均勻分配進(jìn)行分離的一種方法。其基本原理是由于混合物中的各個(gè)單一組分對(duì)兩相不同的親和力和向兩相不均勻擴(kuò)散的可能性而導(dǎo)致在固定相和移動(dòng)相之間的不均勻分配,從而得到分離。色譜法有不同的分類根據(jù),下面主要介紹薄層色譜、硅膠吸附柱色譜、高效液相色譜等常見色譜方法。(Thin LayerChromatography) 薄層色譜常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡(jiǎn)單的色譜法,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。一方面適用于小量樣品(幾到幾十Lg,甚至0101Lg)的分離。另一方面若在制作薄層板時(shí),把吸附層加厚,將樣品點(diǎn)成一條線,則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此又可用來精制樣品。田黎、顧振芳等[12]采用硅膠G薄板(20cm@15cm@01025cm)分離海洋細(xì)菌B9987菌株產(chǎn)生的抗真菌物質(zhì),展開劑用甲苯B乙酸乙酯B90%甲酸(V/V/V)=6B3B1,得到兩種活性組分。李德順,蘇中銳等[13]真菌活性物質(zhì),采用硅膠G薄板以正丁醇B乙酸B水(V/V/V)=3B1B1為展層劑進(jìn)行操作,通過生物顯影技術(shù),確定分離的為單一組分的抗生素。21512 硅膠吸附柱色譜 硅膠吸附柱色譜的分離原理是根據(jù)物質(zhì)在硅膠上的吸附力不同而得到分離,一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸附,極性較弱的物質(zhì)不易被硅膠吸附,整個(gè)層析過程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸過程。由于硅膠既可用于非極性化合物,又可用于極性化合物的分離純化工作,因此,在抗生素的分離純化中硅膠柱色譜是最常用的方法之一。陳文君、吳劍波等[14]柱層析法大量純化農(nóng)用抗生素11371A復(fù)合組分,洗脫溶劑采用甲醇:二氯甲烷(6B1)和乙醇B氫氧化銨B水(8B1B1),分段收集洗脫液,濃縮后制品最高純度可達(dá)到85%左右。MotooKoitabashi等[15]吸附柱,以正己烷乙烷為流動(dòng)相,體積比100B1至30B1梯度洗脫,成功的從真菌菌株KyuW63發(fā)酵液濃縮物中分離出兩種脂溶性抗真菌組分PTF和PDF。硅膠柱色譜因其一次性獲得樣品的純度不高,雖然通過多次重復(fù)使用也可以得到更高純度的樣品,但在實(shí)際研究中更多的是作為高效液相色譜法等精制方法的前提步驟。(HPLC) 20世紀(jì)60年代以后,由于柱色譜填料的改進(jìn)及流動(dòng)相輸送和被分離物質(zhì)檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步,高效液相色譜技術(shù)迅速發(fā)展起來。它是建立在經(jīng)典液體柱色譜的基礎(chǔ)上,引入氣相色譜分析的理論和技術(shù),并加以改進(jìn)而建立起來的,HPLC已成為應(yīng)用最為廣泛的高精度色譜技術(shù),它對(duì)樣品的適用性廣,不受樣品的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性限制,有分離效果好、靈敏度高、分析速度快和操
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