植物原生質(zhì)體的分離實(shí)驗(yàn)(編輯修改稿)
2025-05-14 04:15 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 染色后，用光學(xué)顯微鏡觀察，可以見到一種網(wǎng)狀 結(jié)構(gòu)，即是細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。三、材料洋蔥鱗葉四、試劑1)2％考馬斯亮藍(lán)R250染色液：稱考馬 斯亮藍(lán)R2501g，溶于250ml無水乙醇中，加 . (2)磷酸緩沖液(pH 6．8)：6．0mmol／L 磷酸緩沖液， (3)M緩沖液(pH 7．2)50mmol／L咪唑， 50mmol/L)氯化鉀、0．5mmol／L氯化鎂、 1mmol/L 乙二醇(a氨基乙基)醚四乙酸； 1mmol／L巰基乙醇，調(diào)至pH 7．2。 (4)1%Trion X100：用M緩沖液配制。 (5)3%戊二醛：用磷酸緩沖液配制； (6)中性樹膠。 儀器(請(qǐng)參看儀器圖庫(kù))：顯微鏡，燒杯，鑷子。玻璃滴管，載玻片 五、實(shí)驗(yàn)步驟 約1cm2大小若干片)，置于50mL燒杯中，加 ，使其下沉； ，用1％Triton X—100 處理20min。 X—100，用M緩沖液洗3 次,每次5min。 ％戊二醛固定30min。 (pH 6．8)洗3次，每次5min。%考馬斯亮藍(lán)R250染色10min。 ，然后將樣品置于載玻片上,加蓋玻片，于普通光學(xué)顯微鏡下觀察。 ，則可依次用50％乙 醇、70%乙醇,95％乙醇、正丁醇、二甲苯處理 樣品,各5min,然后將樣品平展于載玻片上，加 一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片封片，制成永久切片。六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告描繪所觀察到的洋蔥鱗葉細(xì)胞骨架圖。實(shí)驗(yàn)四、線粒體和液泡系的超活染色與觀察活體染色是能使生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織特異性著色但對(duì)活樣品又沒有毒害作用的一種活體染色方法，其目的是顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡?；铙w染色技術(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。 通常把活體染色分為體內(nèi)活體染色與體外活體染色兩類。體外活體染色又稱超活染色，它是由活的動(dòng)、植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色?；铙w染料之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是靠染料的“電化學(xué)”特性。堿性染料的膠粒表面帶陽(yáng)離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽(yáng)離子，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活體染色，理論上應(yīng)選擇那些對(duì)細(xì)胞無毒性或毒性極小的染料，且使用時(shí)需要配成稀淡的溶液。一般說來，最為適用的是堿性染料，這可能是因?yàn)樗哂腥芙庠陬愔|(zhì)(如卵磷脂、膽固醇等)的特性，易于被細(xì)胞吸收。詹納斯綠B(Janus green B)和中性紅(neutral red)兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對(duì)于線粒體和液泡系的染色分別具有專一性。 實(shí) 驗(yàn) 目 的觀察動(dòng)、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布； 學(xué)習(xí)一些細(xì)胞器的超活染色技術(shù)。實(shí) 驗(yàn) 原 理 線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場(chǎng)所。細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的?；铙w染色是應(yīng)用無毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法。詹納斯綠 B是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))呈藍(lán)綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無色狀態(tài)。中性紅為弱堿性染料，對(duì)液泡系(即高爾基體)的染色有專一性，只將活細(xì)胞中的液泡系染成紅色，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)完全不著色，這可能是與液泡中某些蛋白質(zhì)有關(guān)。 實(shí) 驗(yàn) 用 品
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