植物原生質(zhì)體的分離實驗(編輯修改稿)
2025-05-14 04:15 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 染色后，用光學顯微鏡觀察，可以見到一種網(wǎng)狀 結(jié)構(gòu)，即是細胞骨架結(jié)構(gòu)。三、材料洋蔥鱗葉四、試劑1)2％考馬斯亮藍R250染色液：稱考馬 斯亮藍R2501g，溶于250ml無水乙醇中，加 . (2)磷酸緩沖液(pH 6．8)：6．0mmol／L 磷酸緩沖液， (3)M緩沖液(pH 7．2)50mmol／L咪唑， 50mmol/L)氯化鉀、0．5mmol／L氯化鎂、 1mmol/L 乙二醇(a氨基乙基)醚四乙酸； 1mmol／L巰基乙醇，調(diào)至pH 7．2。 (4)1%Trion X100：用M緩沖液配制。 (5)3%戊二醛：用磷酸緩沖液配制； (6)中性樹膠。 儀器(請參看儀器圖庫)：顯微鏡，燒杯，鑷子。玻璃滴管，載玻片 五、實驗步驟 約1cm2大小若干片)，置于50mL燒杯中，加 ，使其下沉； ，用1％Triton X—100 處理20min。 X—100，用M緩沖液洗3 次,每次5min。 ％戊二醛固定30min。 (pH 6．8)洗3次，每次5min。%考馬斯亮藍R250染色10min。 ，然后將樣品置于載玻片上,加蓋玻片，于普通光學顯微鏡下觀察。 ，則可依次用50％乙 醇、70%乙醇,95％乙醇、正丁醇、二甲苯處理 樣品,各5min,然后將樣品平展于載玻片上，加 一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片封片，制成永久切片。六、實驗報告描繪所觀察到的洋蔥鱗葉細胞骨架圖。實驗四、線粒體和液泡系的超活染色與觀察活體染色是能使生活有機體的細胞或組織特異性著色但對活樣品又沒有毒害作用的一種活體染色方法，其目的是顯示生活細胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細胞的生命活動和產(chǎn)生任何物理、化學變化以致引起細胞的死亡?；铙w染色技術(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。 通常把活體染色分為體內(nèi)活體染色與體外活體染色兩類。體外活體染色又稱超活染色，它是由活的動、植物分離出部分細胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色?；铙w染料之所以能固定、堆積在細胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是靠染料的“電化學”特性。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活體染色，理論上應(yīng)選擇那些對細胞無毒性或毒性極小的染料，且使用時需要配成稀淡的溶液。一般說來，最為適用的是堿性染料，這可能是因為它具有溶解在類脂質(zhì)(如卵磷脂、膽固醇等)的特性，易于被細胞吸收。詹納斯綠B(Janus green B)和中性紅(neutral red)兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和液泡系的染色分別具有專一性。 實 驗 目 的觀察動、植物活細胞內(nèi)線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布； 學習一些細胞器的超活染色技術(shù)。實 驗 原 理 線粒體是細胞內(nèi)一種重要細胞器，是細胞進行呼吸作用的場所。細胞的各項活動所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的。活體染色是應(yīng)用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細胞生命活動的一種染色方法。詹納斯綠 B是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))呈藍綠色，而在周圍的細胞質(zhì)中染料被還原，成為無色狀態(tài)。中性紅為弱堿性染料，對液泡系(即高爾基體)的染色有專一性，只將活細胞中的液泡系染成紅色，細胞核與細胞質(zhì)完全不著色，這可能是與液泡中某些蛋白質(zhì)有關(guān)。 實 驗 用 品
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