植物原生質(zhì)體的分離實(shí)驗(yàn)-免費(fèi)閱讀
【正文】 表皮細(xì)胞內(nèi)的葉綠體數(shù)量要比葉肉細(xì)胞少。 (3) 觀察其間接熒光：向所制手切片上滴加1~%吖啶橙染液，染色1min，洗去余液, 加蓋片后即可在熒光顯微鏡下觀察其間接熒光。棄去上清液，沉淀即不葉綠體(混有部分細(xì)胞核)。 二、材料 新鮮菠菜。將勻漿液1000r/min的條件下離心2min, 以去除其中的組織殘?jiān)臀幢黄扑榈耐暾?xì)胞。葉綠體是植物細(xì)胞中較大的一種細(xì)胞器，利用低速離心即可分離集中進(jìn)行各種研究。取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液裝入瓶中備用?；铙w染色是應(yīng)用無毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法?；铙w染料之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是靠染料的“電化學(xué)”特性。%考馬斯亮藍(lán)R250染色10min。三、材料洋蔥鱗葉四、試劑1)2％考馬斯亮藍(lán)R250染色液：稱考馬 斯亮藍(lán)R2501g，溶于250ml無水乙醇中，加 . (2)磷酸緩沖液(pH 6．8)：6．0mmol／L 磷酸緩沖液， (3)M緩沖液(pH 7．2)50mmol／L咪唑， 50mmol/L)氯化鉀、0．5mmol／L氯化鎂、 1mmol/L 乙二醇(a氨基乙基)醚四乙酸； 1mmol／L巰基乙醇，調(diào)至pH 7．2。 實(shí) 驗(yàn) 方 法 一、羊血細(xì)胞懸液取50ml小燒杯一個(gè)，形成一種不透明的紅色液體，此即稀釋的羊血。注意事項(xiàng)1．計(jì)數(shù)板、蓋玻片和測(cè)定管用清水沖洗，再用綢布或細(xì)布沾干。細(xì)胞計(jì)數(shù)先用試管稀釋法制備禽類血細(xì)胞懸液：將禽類紅細(xì)胞稀釋液Ⅰ、Ⅱ分別置水浴鍋中預(yù)熱到４１～４２℃，?、褚海眒L于試管中，用吸血管加入新鮮雞血(或肝素抗凝血)２０霯，再加入Ⅱ液１mL混勻，置該水浴鍋中保溫５０s左右，置室溫，即為待檢的血細(xì)胞懸液。觀察細(xì)胞壁的再生和細(xì)胞分裂。5． mol/L ，輕輕吹打均勻。（2人一組）2．撕去葉片背面的表皮，用2ml離心管的蓋打下1圓片。它不能自由出入原 生質(zhì)膜,因此有活力的細(xì)胞能產(chǎn)生熒光,無活力 的原生質(zhì)體不能分解FAD無熒光產(chǎn)生。五．教學(xué)內(nèi)容:實(shí)驗(yàn)原理植物原生質(zhì)體(protoplast)是除去細(xì)胞壁后 為原生質(zhì)所包圍的“裸露細(xì)胞”,是開展基礎(chǔ)研 究的理想材料。掌握分離和培養(yǎng)原生質(zhì)體的技術(shù)、方法和原理。掌握細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法。測(cè)定原生質(zhì)體的活性有多種方法。因此，取材成為實(shí)驗(yàn)成功與否的首要問題。用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。吸除上面的溶液。四角的大方格又各分為１６個(gè)中方格，這是用來計(jì)數(shù)白細(xì)胞的。計(jì)數(shù)時(shí)用虹彩、集光器、反光鏡等調(diào)節(jié)入射光角度和強(qiáng)度，認(rèn)清 計(jì)數(shù)室位置。 實(shí) 驗(yàn) 用 品 一、器材 50ml燒杯, 試管（1～10cm）, 10ml移液管, 試管架。實(shí)驗(yàn)三 細(xì)胞骨架的觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆沼霉鈱W(xué)顯微鏡觀察植物細(xì)胞骨架的原理 及方法，觀察光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞骨架的網(wǎng)狀 結(jié)構(gòu)。 X—100，用M緩沖液洗3 次,每次5min?；铙w染色技術(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。 實(shí) 驗(yàn) 目 的觀察動(dòng)、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布； 學(xué)習(xí)一些細(xì)胞器的超活染色技術(shù)。 試劑（1）Ringer溶液： 氯化鈉 () 氯化鉀 氯化鉀 氯化鈣 蒸餾水 100ml （2）10%、1/3000中性紅溶液： Ringer液，稍加熱 (30~40℃)使之很快溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶于暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染
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