植物原生質(zhì)體的分離實驗-全文預(yù)覽
【正文】 。詹納斯綠 B是線垃體的專一性活體染色劑。 實 驗 目 的觀察動、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布； 學(xué)習(xí)一些細(xì)胞器的超活染色技術(shù)。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用?；铙w染色技術(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。 ，然后將樣品置于載玻片上,加蓋玻片，于普通光學(xué)顯微鏡下觀察。 X—100，用M緩沖液洗3 次,每次5min。 (4)1%Trion X100：用M緩沖液配制。實驗三 細(xì)胞骨架的觀察一、實驗?zāi)康恼莆沼霉鈱W(xué)顯微鏡觀察植物細(xì)胞骨架的原理 及方法，觀察光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞骨架的網(wǎng)狀 結(jié)構(gòu)。二、低滲溶液取試管一支，加入10ml蒸餾水，再加入1ml稀釋羊血，注意觀察溶液顏色的變化，有不透明的紅色逐漸澄清，說明紅細(xì)胞發(fā)生破裂造成100%紅細(xì)胞溶血，使光線比較容易透過溶液。 實 驗 用 品 一、器材 50ml燒杯, 試管（1～10cm）, 10ml移液管, 試管架。2．.充液前應(yīng)充分混勻血細(xì)胞懸液，充液要連續(xù)、適量，充液后應(yīng)待血細(xì)胞下沉后再計數(shù)。計數(shù)時用虹彩、集光器、反光鏡等調(diào)節(jié)入射光角度和強度，認(rèn)清 計數(shù)室位置?？捎糜诔湟河嫈?shù)。四角的大方格又各分為１６個中方格，這是用來計數(shù)白細(xì)胞的。實驗結(jié)果結(jié)果討論六．課堂小結(jié)：根據(jù)學(xué)生的實驗結(jié)果進(jìn)行總結(jié)。吸除上面的溶液。6．用1mL注射器向離心管底部緩緩注入20%的蔗糖溶液1ml，出現(xiàn)下部蔗糖液， min，在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶，便是純凈的原生質(zhì)體。用血球計數(shù)板計數(shù)。圓片扣壓于 。因此，取材成為實驗成功與否的首要問題。 細(xì)胞計數(shù)一般用血細(xì)胞計數(shù)極，按白細(xì)胞計數(shù)法進(jìn)行計數(shù)。測定原生質(zhì)體的活性有多種方法。其中,酶解法分離原生質(zhì)體是一個常用的技術(shù),其原理是植物細(xì)胞壁主要由纖維 素、半纖維素和果膠質(zhì)組成,因而使用纖維素 酶、半纖維素酶和果膠酶能降解細(xì)胞壁成分,除 去細(xì)胞壁,即可得到原生質(zhì)體。掌握細(xì)胞計數(shù)的原理和方法。掌握細(xì)胞活性的檢測方法。掌握分離和培養(yǎng)原生質(zhì)體的技術(shù)、方法和原理。掌握細(xì)胞活性的檢測方法。五．教學(xué)內(nèi)容:實驗原理植物原生質(zhì)體(protoplast)是除去細(xì)胞壁后 為原生質(zhì)所包圍的“裸露細(xì)胞”,是開展基礎(chǔ)研 究的理想材料。將原生質(zhì)體接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞壁再生，細(xì)胞分裂和再生植株。它不能自由出入原 生質(zhì)膜,因此有活力的細(xì)胞能產(chǎn)生熒光,無活力 的原生質(zhì)體不能分解FAD無熒光產(chǎn)生。所以，為了制備健康的原生質(zhì)體，一般選用根尖、莖尖、嫩葉及對數(shù)生長期的愈傷組織為材料，一旦細(xì)胞具有木質(zhì)化或次生加厚的外壁，則不能被酶降解。（2人一組）2．撕去葉片背面的表皮，用2ml離心管的蓋打下1圓片。3．28~30℃保溫酶解2~6h（放培養(yǎng)箱中）；鏡檢葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體。5． mol/L ，輕輕吹打均勻。8．加MS培養(yǎng)液液1ml洗滌，輕輕混勻，600 rpm 離心5min，使原生質(zhì)體沉降。觀察細(xì)胞壁的再生和細(xì)胞分裂。在低倍顯微鏡下可見計數(shù)室被雙線劃分成９個邊長為１毫米的大方格。細(xì)胞計數(shù)先用試管稀釋法制備禽類血細(xì)胞懸液：將禽類紅細(xì)胞稀釋液Ⅰ、Ⅱ分別置水浴鍋中預(yù)熱到４１～４２℃，取Ⅰ液１mL于試管中，用吸血管加入新鮮雞血(或肝素抗凝血)２０霯，再加入Ⅱ液１mL混勻，置該水浴鍋中保溫５０s左右，置室溫，即為待檢的血細(xì)胞懸液。靜置２min后計數(shù)，先用低倍
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