植物原生質(zhì)體的分離實驗(更新版)
【正文】 制。二、低滲溶液取試管一支，加入10ml蒸餾水，再加入1ml稀釋羊血，注意觀察溶液顏色的變化，有不透明的紅色逐漸澄清，說明紅細胞發(fā)生破裂造成100%紅細胞溶血，使光線比較容易透過溶液。2．.充液前應(yīng)充分混勻血細胞懸液，充液要連續(xù)、適量，充液后應(yīng)待血細胞下沉后再計數(shù)。可用于充液計數(shù)。實驗結(jié)果結(jié)果討論六．課堂小結(jié)：根據(jù)學(xué)生的實驗結(jié)果進行總結(jié)。6．用1mL注射器向離心管底部緩緩注入20%的蔗糖溶液1ml，出現(xiàn)下部蔗糖液， min，在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶，便是純凈的原生質(zhì)體。圓片扣壓于 。 細胞計數(shù)一般用血細胞計數(shù)極，按白細胞計數(shù)法進行計數(shù)。其中,酶解法分離原生質(zhì)體是一個常用的技術(shù),其原理是植物細胞壁主要由纖維 素、半纖維素和果膠質(zhì)組成,因而使用纖維素 酶、半纖維素酶和果膠酶能降解細胞壁成分,除 去細胞壁,即可得到原生質(zhì)體。掌握細胞活性的檢測方法。掌握細胞活性的檢測方法。將原生質(zhì)體接種在培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，細胞壁再生，細胞分裂和再生植株。所以，為了制備健康的原生質(zhì)體，一般選用根尖、莖尖、嫩葉及對數(shù)生長期的愈傷組織為材料，一旦細胞具有木質(zhì)化或次生加厚的外壁，則不能被酶降解。3．28~30℃保溫酶解2~6h（放培養(yǎng)箱中）；鏡檢葉肉細胞原生質(zhì)體。8．加MS培養(yǎng)液液1ml洗滌，輕輕混勻，600 rpm 離心5min，使原生質(zhì)體沉降。在低倍顯微鏡下可見計數(shù)室被雙線劃分成９個邊長為１毫米的大方格。靜置２min后計數(shù)，先用低倍鏡觀察，不均勻則拋棄。 實 驗 原 理 將紅細胞放入數(shù)種等滲溶液中，由于紅細胞對各種溶質(zhì)的透性不同，有的溶質(zhì)可以滲入，有的不能滲入，滲入的溶質(zhì)能夠提高紅細胞的滲透壓，所以促使水分進入細胞，引起溶血，由于溶質(zhì)透入速度互不相同，因此溶血時間也不相同。實 驗 結(jié) 果并對實驗結(jié)果進行比較和分析。玻璃滴管，載玻片 五、實驗步驟 約1cm2大小若干片)，置于50mL燒杯中，加 ，使其下沉； ，用1％Triton X—100 處理20min。實驗四、線粒體和液泡系的超活染色與觀察活體染色是能使生活有機體的細胞或組織特異性著色但對活樣品又沒有毒害作用的一種活體染色方法，其目的是顯示生活細胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細胞的生命活動和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細胞的死亡。詹納斯綠B(Janus green B)和中性紅(neutral red)兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和液泡系的染色分別具有專一性。 實 驗 用 品器材 顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤、剪刀、鑷子、雙面刀片、解剖盤．載玻片、凹面載玻片、蓋玻片、表面皿、吸管、牙簽、吸水紙。 ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 蓋上蓋玻片進行鏡檢(鑷子輕輕地下壓蓋玻片，使根尖壓扁，利于觀察) 實 驗 結(jié) 果 在高倍鏡下，先觀察根尖部分的生長點的細胞，可見細胞質(zhì)中散在很多大小不等的染成玫瑰紅色的圓形小泡，這是初生的幼小液泡。一個顆粒在離心場中的沉降速率取決于顆粒的大小、形狀和密度，也同離心力以及懸浮介質(zhì)的粘度有關(guān)。因此在熒光觀察時應(yīng)抓緊時間, 有必要時立即拍照。 3. 將勻漿用6層紗布過濾于500ml燒杯中。 (3)在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的間接熒光：取葉綠體懸液一滴滴在無熒光載片上，%吖啶橙熒光染料, 加蓋片后即可在熒光顯微鏡下觀察。 二、菠菜葉手切片觀察 1. 在普通光鏡下可以看到三種細胞 (1)表皮細胞: 為邊緣呈鋸齒形的鱗
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