植物原生質(zhì)體的分離實(shí)驗(yàn)(更新版)
【正文】 制。二、低滲溶液取試管一支，加入10ml蒸餾水，再加入1ml稀釋羊血，注意觀察溶液顏色的變化，有不透明的紅色逐漸澄清，說(shuō)明紅細(xì)胞發(fā)生破裂造成100%紅細(xì)胞溶血，使光線比較容易透過(guò)溶液。2．.充液前應(yīng)充分混勻血細(xì)胞懸液，充液要連續(xù)、適量，充液后應(yīng)待血細(xì)胞下沉后再計(jì)數(shù)?？捎糜诔湟河?jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果討論六．課堂小結(jié)：根據(jù)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行總結(jié)。6．用1mL注射器向離心管底部緩緩注入20%的蔗糖溶液1ml，出現(xiàn)下部蔗糖液， min，在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶，便是純凈的原生質(zhì)體。圓片扣壓于 。 細(xì)胞計(jì)數(shù)一般用血細(xì)胞計(jì)數(shù)極，按白細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)。其中,酶解法分離原生質(zhì)體是一個(gè)常用的技術(shù),其原理是植物細(xì)胞壁主要由纖維 素、半纖維素和果膠質(zhì)組成,因而使用纖維素 酶、半纖維素酶和果膠酶能降解細(xì)胞壁成分,除 去細(xì)胞壁,即可得到原生質(zhì)體。掌握細(xì)胞活性的檢測(cè)方法。掌握細(xì)胞活性的檢測(cè)方法。將原生質(zhì)體接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞壁再生，細(xì)胞分裂和再生植株。所以，為了制備健康的原生質(zhì)體，一般選用根尖、莖尖、嫩葉及對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的愈傷組織為材料，一旦細(xì)胞具有木質(zhì)化或次生加厚的外壁，則不能被酶降解。3．28~30℃保溫酶解2~6h（放培養(yǎng)箱中）；鏡檢葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體。8．加MS培養(yǎng)液液1ml洗滌，輕輕混勻，600 rpm 離心5min，使原生質(zhì)體沉降。在低倍顯微鏡下可見(jiàn)計(jì)數(shù)室被雙線劃分成９個(gè)邊長(zhǎng)為１毫米的大方格。靜置２min后計(jì)數(shù)，先用低倍鏡觀察，不均勻則拋棄。 實(shí) 驗(yàn) 原 理 將紅細(xì)胞放入數(shù)種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞對(duì)各種溶質(zhì)的透性不同，有的溶質(zhì)可以滲入，有的不能滲入，滲入的溶質(zhì)能夠提高紅細(xì)胞的滲透壓，所以促使水分進(jìn)入細(xì)胞，引起溶血，由于溶質(zhì)透入速度互不相同，因此溶血時(shí)間也不相同。實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較和分析。玻璃滴管，載玻片 五、實(shí)驗(yàn)步驟 約1cm2大小若干片)，置于50mL燒杯中，加 ，使其下沉； ，用1％Triton X—100 處理20min。實(shí)驗(yàn)四、線粒體和液泡系的超活染色與觀察活體染色是能使生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織特異性著色但對(duì)活樣品又沒(méi)有毒害作用的一種活體染色方法，其目的是顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡。詹納斯綠B(Janus green B)和中性紅(neutral red)兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對(duì)于線粒體和液泡系的染色分別具有專一性。 實(shí) 驗(yàn) 用 品器材 顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤、剪刀、鑷子、雙面刀片、解剖盤．載玻片、凹面載玻片、蓋玻片、表面皿、吸管、牙簽、吸水紙。 ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 蓋上蓋玻片進(jìn)行鏡檢(鑷子輕輕地下壓蓋玻片，使根尖壓扁，利于觀察) 實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果 在高倍鏡下，先觀察根尖部分的生長(zhǎng)點(diǎn)的細(xì)胞，可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)中散在很多大小不等的染成玫瑰紅色的圓形小泡，這是初生的幼小液泡。一個(gè)顆粒在離心場(chǎng)中的沉降速率取決于顆粒的大小、形狀和密度，也同離心力以及懸浮介質(zhì)的粘度有關(guān)。因此在熒光觀察時(shí)應(yīng)抓緊時(shí)間, 有必要時(shí)立即拍照。 3. 將勻漿用6層紗布過(guò)濾于500ml燒杯中。 (3)在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的間接熒光：取葉綠體懸液一滴滴在無(wú)熒光載片上，%吖啶橙熒光染料, 加蓋片后即可在熒光顯微鏡下觀察。 二、菠菜葉手切片觀察 1. 在普通光鏡下可以看到三種細(xì)胞 (1)表皮細(xì)胞: 為邊緣呈鋸齒形的鱗
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