分子生物學(xué)重點匯總(編輯修改稿)
2025-05-08 22:35 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 的增加，細(xì)胞DNA分子的端粒DNA也會隨之減小，所以就端粒DNA而言，越幼嫩的組織他的分子量越大。（見于課本116頁，老教材）1試證明一個基因中只有一條 DNA鏈作為模扳被轉(zhuǎn)錄。答：若基因兩條鏈均被轉(zhuǎn)錄，而RNA聚合酶只能以5’ →3’方向合成，所以兩條DNA鏈會以相反方向轉(zhuǎn)錄。兩信使攜帶著彼此互補的反向核苷酸序列，編碼不同的多肽。雖然某些DNA順序能被雙方向轉(zhuǎn)錄，但這不是常見現(xiàn)象。最早的明確證據(jù)是通過研究噬菌體SP8感染枯草桿菌得到的。 SP8的DNA很特別：一條鏈(重鏈)富含嘌呤，另一鏈(輕鏈)則富含嘧啶。若把雙鏈DNA溫和加熱，兩條鏈分離(即DNA變性)，可用密度梯度離心分離兩條鏈。 1963年，Julius Marmur和Paul Doty用SP8感染枯草桿菌細(xì)胞后提取RNA，發(fā)現(xiàn)它只能與噬菌體DNA的“重”鏈雜交(即互補配對形成DNARNA雜合分子)。而不會與輕鏈雜交。顯而易見，信使只可以與一條DNA鏈(重鏈)互補，因而DNA雙鏈中只有一條鏈作為轉(zhuǎn)錄的模板()。 Marmur和Doty很幸運地選用SP8做實驗，因為它的全部基因都是同一條DNA鏈中轉(zhuǎn)錄而來。而另一些噬菌體，包括T4和λ噬菌體，部分基因由一條鏈轉(zhuǎn)錄而其他基因則由另一條鏈轉(zhuǎn)錄；因此若用這些噬菌體而不是SP8做實驗，則不能成功地說明問題。（答案自己根據(jù)所給的資料總結(jié)，）１５、某一質(zhì)粒載體具有Tetr和 Kanr的表型，在 Kanr抗性基因內(nèi)有一Bgl Ⅰ的切點?，F(xiàn)用Bgl Ⅰ切割該載體進行基因克隆，問：(1)轉(zhuǎn)化后涂皿時應(yīng)加什么樣的抗生素?(2)培養(yǎng)后長出的菌落具有什么樣的抗性基因型?(3)如何利用抗變化篩選到含有插人片段的重組體?答：(1)Te t（四環(huán)素）；(2)TetrKans和TetrKanr；(3)重新接種在含Tet、Kan和只加Tet的平板上，選擇只在Tet平板上生長的菌落，即為所需的重組體。１６、概括典型原核生物啟動子的結(jié)構(gòu)和功能，并解釋什么是保守序列。答：原核生物啟動子包括10區(qū)和35區(qū)，由核心啟動子和上游控制元件組成，35區(qū)為RNA聚合酶的結(jié)合位點，控制轉(zhuǎn)錄起始和轉(zhuǎn)錄效率，10區(qū)為RNA緊密結(jié)合的結(jié)合位點，選擇正確的起始位點，保證精確起始。保守序列即指DNA分子中的或則蛋白質(zhì)中的氨基酸片段，他們在進化過程中基本保持變。１７、簡述原核生物RNA聚合酶全酶的組成以及各個亞基的功能答：原核生物RNA聚合酶全酶是由兩個α亞基和一個β亞基、一個β’亞基、一個σ亞基組成的。α亞基是全酶的組建因子，可促進DNA兩條鏈的解旋和結(jié)合；β亞基是聚合NTP，合成RNA鏈的主要亞基，保證RNA鏈的延伸；β’亞基是促使RNA聚合酶與非模板鏈結(jié)合；σ亞基：促使RNA聚合酶與模板鏈上游轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，識別啟動子，特別是啟動子上的R位點。１８、闡述原核生物的轉(zhuǎn)錄終止。 (1)轉(zhuǎn)錄終止的兩種主要的機制是什么?答：依賴于ｐ因子的的終止和不依賴于ｐ因子的終止。 (2)為什么在細(xì)菌轉(zhuǎn)錄終止中很少涉及到Pho因子?答：細(xì)菌的轉(zhuǎn)錄與翻譯不存在時間與空間的間隔，是同步進行的。 (3)怎樣能阻止轉(zhuǎn)錄的終止?答：提供抗終止蛋白。１９、原核生物與真核生物的mRNA的各有什么特點?⑴原核生物①原核生物mRNA 的半衰期短。 ②許多原核生物mRNA以多順反子形式存在 ③其5’端無帽子結(jié)構(gòu)，3’端沒有或只有較短的poly(A)。 ④原核細(xì)胞mRNA（包括病毒）有時可以編碼幾個多肽。 ⑤原核生物常以AUG（有時GUG，甚至UUG）作為起始密碼子⑵真核生物：①其5’端存在帽子結(jié)構(gòu)。 ②絕大多數(shù)真核生物mRNA具有poly(A)尾巴。③其RNA最多只能編碼一個多肽。 ④真核生物幾乎永遠(yuǎn)以AUG為起始密碼子。２０、β地中海貧血癥患者不能合成β球蛋白。將患者與正常人β球蛋白基因的DNA序列進行比較分析發(fā)現(xiàn)，除第一個intron中有一個堿基發(fā)生了改變外，所有序列相同，但其mRNA分子比正常人多出約100多個核苷酸。根據(jù)這一結(jié)果，說明患者缺失β球蛋白的原因。答：在第一個內(nèi)含子中3’端受點上游的PyPuPyPyＵＡＰｙ中的Ａ 堿基發(fā)生突變，導(dǎo)致第一個內(nèi)含子無法形成套索結(jié)構(gòu)，無法被剪切。２１、說明研究兩個已知蛋白質(zhì)間相互作用關(guān)系的酵母雙雜交技術(shù)的分子生物學(xué)原理。２２、舉三例RNA的研究成就并說明其在推動分子生物學(xué)發(fā)展中的重要意義。２３、說明constitutive splicing與alternative splicing, cissplicing與transsplicing之間在概念及機制上的區(qū)別。自己總結(jié)，在課本的169頁（老教材）２４、簡述前體mRNA經(jīng)過剪接形成mRNA的過程。答：真核細(xì)胞細(xì)胞核ｍＲＮＡ前體的剪接：利用套索結(jié)構(gòu)的中間結(jié)構(gòu)進行ＲＮＡ剪接，在剪接過程中，要先剪接成特殊的剪接體。①在內(nèi)含子的５’切斷，通過５’、２’鍵將內(nèi)含子５’Ｇ與分支點Ａ殘基的２’連接成套索結(jié)構(gòu)。 ?、谠趦?nèi)含子的３’端剪接位點，外顯子１與外顯子２連接，內(nèi)含子以套索結(jié)構(gòu)被釋放。在原核生物中：在轉(zhuǎn)錄出多順反子ｍRNA前體后，需通過ＲＮａｓｅ三將核糖體蛋白與聚合酶亞基的ｍＲＮＡ切開，各自產(chǎn)生兩個成熟的ＲＮＡ之后再各自進行翻譯。（原核生物不需要掌握）２５、哪三個序列對原核生物mRNA的精確轉(zhuǎn)錄是必不可少的?答：35序列（RNA 聚合酶識別位點），10序列（RNA 聚合酶緊密結(jié)合位點）和終止子。2說明真核生物前體 RNA加工的類別及機理。答：真核生物前體 RNA加工的類別包括5`末端加帽、3`末端加尾、剪接、修飾和編輯。2什么是可變剪接？它是怎樣造成： (1)在不同的組織中基因活性不同？(2)單個基因翻譯產(chǎn)生兩個不同的多肽？答：可變剪接是剪接的一種形式，它能從一個mRNA前體剪接產(chǎn)生兩個以上的成熟mRNA。（1）在不同的組織中產(chǎn)生的mRNA具有不同的起始序列，因為起始序列與翻譯的起始有關(guān)，所以兩個不同的mRNA分子以不同的效率被翻譯，在不同的組織中表達(dá)的活性不同。（2）在這種情況下，一個基因編碼序列內(nèi)切除一些相關(guān)的序列，從而產(chǎn)生一個蛋白質(zhì)不同的形式甚至是功能完全不同的兩個蛋白質(zhì)。（第二個可以從順式剪接和反式剪接來回答）2什么是增強子?它們與其他調(diào)控序列有何不同?增強子具有哪些特點?答：增強子是真核生物中定距離的正調(diào)控點，增強子的作用具有位置和方向的獨立性，以成為“突環(huán)”的模式起作用，具有組織和細(xì)胞的特異性，其表達(dá)需要特異的蛋白因子的作用，作用方式與其他序列的不同之處在于①沒有方向性，兩個方向都能起作用 ?、跊]有位置效應(yīng) ③具有組織和細(xì)胞類型的特異性 ?、芩c受調(diào)控的基因位于同一ＤＮＡ中但可位于任意一條鏈上 ?、萃ㄟ^兩個以上的增強子和他們相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子的作用可影響聚合酶效應(yīng)。２９、 在DNA分離過程中，酚通常與氯仿聯(lián)合使用，即使不聯(lián)合使用也要在苯酚抽提后用氯仿再抽提一次，為什么?答：原因是酚和水有一定程度的互溶，所以單獨使用酚抽提DNA，最終不能去除酚，殘留的酚會使起切割
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