分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告陳倩倩(編輯修改稿)
2025-04-19 05:28 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 。5，按量加入溶液Ⅲ,輕加輕搖，冰浴十分鐘。溶液Ⅲ為高鹽溶液，調(diào)節(jié)堿性溶液至中性，使變性的質(zhì)粒DNA可恢復(fù)原來的共價(jià)閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)而溶解于溶液中；但染色體DNA不能復(fù)性，而是與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。6,12000rpm離心15min，上清液輕輕轉(zhuǎn)入新管，再加入十分之一3mol/lNaAc，混勻。由于DNA帶負(fù)電荷，加入NaAc的作用就是是中和DNA所帶的負(fù)電荷，使DNA之間的排斥力減小，有助于DNA的沉淀7，加入兩倍體積冰無水乙醇，混勻。零下20度沉淀無水乙醇的作用是沉淀DNA,這是實(shí)驗(yàn)中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點(diǎn)是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng),對(duì)DNA很安全,因此是理想的沉淀劑8,12000rpm離心15min，棄上清加入3ml70%乙醇，不打散沉淀洗滌一遍70％乙醇的作用一方面是繼續(xù)沉淀DNA，另一方面可以除去上一步驟中溶解在溶液中的鹽離子 9,12000rpm離心5min﹙注意沉淀位置﹚棄上清，干燥，加入1mlTE溶解。用記號(hào)筆在沉淀周圍做好記號(hào)③ 質(zhì)粒純化加入RNaseA使其終濃度為50微克每毫升，平分為兩個(gè)小管。RNA酶分解掉RNA1， 加等體積的Tris飽和苯酚溶液混勻7000rmp離心15min，上清液轉(zhuǎn)入新管。苯酚具有強(qiáng)氧化性，在此步驟中是使蛋白質(zhì)變性，從而使蛋白質(zhì)沉淀下來2， 加等體積的苯酚：氯仿（1:1）混勻7000rmp離心15min，上清液轉(zhuǎn)入新管。其中是24：1的氯仿和異戊醇，異戊醇的作用
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