xxxx年分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(1)(編輯修改稿)
2025-02-14 00:19 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 （ 24:1），顛倒混勻，12023 g離心 10 min； 3．吸取上清 200μl ，加 3M NaAc 15μl 和無(wú)水乙醇 4 00μl ， 20℃ 放置 15分鐘以上； 4． 13000rpm 離心 10分鐘； 5．倒去上清，用 75％乙醇浸洗沉淀，風(fēng)干后外源 DNA溶于 10μl ddH 2O（ ml tube中）， pET28aegfp溶于 10μl ddH 2O（ ml tube中）； 6．連接反應(yīng)（ 15μl 體系）： 試劑 加樣量 CHY 10 μl pET28aegfp μl 10 buffer μl T4 Ligase 1 μl 25℃ 30min 1只滅菌的 EP離心管， a. 每管加入感受態(tài)懸液 50 ul及連接產(chǎn)物或質(zhì)粒 50100ng 15ul （無(wú)菌操作）； b. 混勻（不可以振蕩），冰浴 30 min； c. 取出放入 42?C水浴中熱休克 90秒，不要搖動(dòng)試管，迅速放入冰中，冰浴 5min。 d. 向每管中加入無(wú)抗生素的 LB液體培養(yǎng)基 400ul，該溶液稱(chēng)為轉(zhuǎn)化反應(yīng)液。混勻后，于 37?C（ 100～ 150rpm）溫和搖振培養(yǎng) 60min，使細(xì)胞恢復(fù)正常生長(zhǎng)狀態(tài)，并表達(dá)質(zhì)粒編碼的抗生素抗性基因（ kanar）。 LB培養(yǎng)基平板。 ： a. 取轉(zhuǎn)化反應(yīng)液 200 ?l，均勻涂布于含有 Amp抗性的 LB培
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1