分子生物學(xué)實驗五ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-08 06:23 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 將冷卻至 65℃ 左右的瓊脂糖凝膠液，小心地倒在有機(jī)玻璃內(nèi)槽上，控制灌膠速度和量，使膠液緩慢地展開，直到在整個有機(jī)玻璃板表面形成均勻的膠層。 室溫下靜置 30min左右，待凝固完全后，輕輕拔出梳子，在膠板上即形成相互隔開的上樣孔。制好膠后將鋪膠的有機(jī)玻璃內(nèi)槽放在含有 TAE（ Tris乙酸） 或 TBE（ Tris硼酸）工作液的電泳槽中使用。 4）加樣 用微量加樣器將上述樣品分別加入膠板的樣品孔內(nèi)。每加完一個樣品，換一個加樣頭。加樣時應(yīng)防止碰壞樣品孔周圍的凝膠面以及穿透凝膠底部，本實驗樣品孔容量約 15～ 20 ?l。 ? 1 kb DNA ladder（ marker） : 在第一個上樣孔或最后一個上樣孔內(nèi)加入 6?l 的 1 kb DNA ladder（ 10ng/?l ）。 5）電泳（帶上手套操作） ? 加完樣后的凝膠板即可通電進(jìn)行電泳； ? 建議在 80～ 100V的電壓下電泳； ? 當(dāng)溴酚蘭移動到距離膠板下沿約 1cm處停止電泳； ? 將凝膠放入溴化乙啶（ EB〕 工作液（ ?g/ml左右）中染色約20min。 為了獲得電泳分離 DNA片段的最大分辨率，電場強(qiáng)度不應(yīng)高于5V/cm（兩電極間的距離）。電泳溫度視需要而定，對大分子的分離，以低溫較好，也可在室溫下進(jìn)行。在瓊脂糖凝膠濃度低于%時，由于膠太稀，最好在 4℃ 進(jìn)行電泳以增加凝膠硬度。 6）觀察與拍照 在紫外燈 (310nm波長 )下觀察染色后的凝膠。 DNA存在處顯示出紅色的熒光條帶。紫外光激發(fā) 30s左右，肉眼可觀察到清晰的條帶。在紫外燈下觀察時，應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡或
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