緒論及第二章蛋白質(zhì)化學(xué)(編輯修改稿)
2025-02-12 21:45 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 脯氨酸的 NH2參與形成的肽鍵外，其余的肽平面上，兩個(gè) Cα都是處于更穩(wěn)定的反式構(gòu)象。 肽和蛋白質(zhì)特有的顏色反應(yīng)：雙縮脲反應(yīng) （紫色和藍(lán)紫色的復(fù)合物） 蛋白質(zhì)樣品 (純度 97％） 蛋白質(zhì)中多肽鏈的數(shù)目 變性劑 氧化劑 還原劑 斷開(kāi)多肽鏈內(nèi)的二硫鍵 ＝ 1 水解后分析氨基酸的組成 確定 N末端和 C末端氨基酸種類(lèi) 用多種方法裂解多肽鏈成小片段并測(cè)定其氨基酸序列 用重疊法重建完整多肽的氨基酸順序，確定二硫鍵位置 斷裂二硫鍵的方式 水解后氨基酸組成的分析 確定 N末端的方法 ： １ . 2,4二硝基氟苯法（ DNFB法）和丹磺酰氯法（ DNS法） ２ . Edman降解法（苯異硫氰酸酯法） 確定 C末端的方法： １ . 肼解法 苯甲醛 （二亞芐衍生物，不溶于水） 苯甲醛 溶于水 ２． 羧肽酶法 羧肽酶 A ： 能釋放除 Pro、 Arg、 Lys之外的所用 C末端氨基酸； 羧肽酶 B： 只能釋放 Lys和 Arg形成的 C末端； 裂解多肽鏈成小片斷的方法： １． 溴化氰（ CNBr） 裂解法： R1 = Met 2. 羥氨裂解法 R1 = Asn, R2 = Gly 3．酶裂解法 胰 蛋 白 酶： R1 = Lys、 Arg, R2 ≠ Pro 糜 蛋 白 酶： R1 = Phe、 Tyr 、 Trp, R2 ≠ Pro （ 胰凝乳蛋白酶） 胃 蛋 白 酶： R1和 R2＝ Phe、 Leu、 Trp、 Met 葡萄球菌蛋白酶： R1＝ Glu, Asp 羧狀芽孢桿菌蛋白酶： R1 = Arg 二硫鍵位置的確定：對(duì)角線(xiàn)電泳 胃蛋白酶水解 第一相對(duì)角線(xiàn)電泳 肽段 pH＝ 暴露在過(guò)甲酸蒸汽中 第二相電泳 取下偏離對(duì)角線(xiàn)的肽段測(cè)序 推斷出二硫鍵的位置 蛋白質(zhì)樣品 （ 相同條件下 旋轉(zhuǎn)90186。 ） 借助重疊肽確定肽段在原多肽鏈中的次序 N末端殘基： H C末端殘基： S 第一套肽段： OUS PS EOVE RLA HOWT 第二套肽段： SEO WTOU VERL APS HO 蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)主鏈折疊產(chǎn)生的由氫鍵維系的有規(guī)則的空間構(gòu)象，稱(chēng)為二級(jí)結(jié)構(gòu)。即 多肽鏈的主鏈骨架中若干肽單位，各自沿一定的軸盤(pán)旋或折疊，形成的規(guī)則的氫鍵結(jié)構(gòu)的構(gòu)象。 由于肽鍵是一個(gè)剛性平面，所以羰基碳原子與氮原子之間的 C’ － N鍵是不能自由旋轉(zhuǎn)的。但圍繞α 碳原子的 C α － C’ 鍵以及 C α － N鍵是可以自由旋轉(zhuǎn)的。這兩個(gè)鍵所形成的相對(duì)角度確定了蛋白質(zhì)主鏈的特定構(gòu)象。 當(dāng) φ、 ψ均為 180176。時(shí)完全伸展的主鏈構(gòu)象 二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要類(lèi)型： α螺旋 (α helix) β折疊 (β pleated sheet) β轉(zhuǎn)角 (β turn) 1. α螺旋 (α helix) ⑴ 螺旋的方向?yàn)橛沂致菪?，?， 螺距為 ， 每個(gè)氨基酸殘基的高度為 ， 肽鍵平面與螺旋長(zhǎng)軸平行； ⑵ 氫鍵 是 α 螺旋穩(wěn)定的次級(jí)鍵，相鄰的螺旋間形 成鏈內(nèi)氫鍵，即從 N端開(kāi)始，每個(gè)氨基酸殘基上的 C=O與它后面第四個(gè)殘基的 NH上的 H形成氫鍵； ⑶ α 螺旋中，氨基酸殘基的側(cè)鏈分布在螺旋
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