福建農(nóng)林大學(xué)分子生物學(xué)(1)(編輯修改稿)
2025-02-12 20:13 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 DNA的破壞，而是對 DNA 復(fù)制的抑制 質(zhì)粒消除常自發(fā)地發(fā)生 生物學(xué)方法：原生質(zhì)體形成和再生 理化因子對高度穩(wěn)定的質(zhì)粒消除不易奏效 用溶菌酶處理等形成原生質(zhì)體，再生后菌株便以很高的頻率 (94%)消除了質(zhì)粒，如葡萄球菌、枯草桿菌、鏈霉菌、沙門氏菌等。 消除機(jī)制尚不清楚，有人認(rèn)為去壁形成原生質(zhì)體時(shí)導(dǎo)致了質(zhì)粒消除 , 另有認(rèn)為質(zhì)粒在原生質(zhì)體再生過程中丟失的。 結(jié)構(gòu)特性 DNA結(jié)構(gòu)和物理學(xué)特征： 質(zhì)粒與染色體不同 a. 離心 : 密度不同 b. agarose電泳 : 分子量大小 c. 電鏡觀察 : 1μm dsDNA=3000bp d. 再轉(zhuǎn)化 質(zhì)粒的拷貝數(shù) 質(zhì)粒 拷貝數(shù) 一般與其分子量成反比關(guān)系： 質(zhì)?？截悢?shù) =質(zhì)粒 DNA量 /染色體 DNA量 MWc/MWp 質(zhì)粒的不相容性 （ inpatibility） 在沒有選擇壓力的條件下，兩種不同質(zhì)粒不能共存于同一宿主細(xì)胞內(nèi)的現(xiàn)象。 不相容質(zhì)粒攜帶復(fù)制子基本相似，復(fù)制系統(tǒng)也相同，在復(fù)制和分配到子細(xì)胞的過程中相互競爭。 plasmid vectors 是一獨(dú)立的復(fù)制子； 有篩選標(biāo)記； 具有酶切位點(diǎn)或多克隆位點(diǎn)； 分子量小，拷貝數(shù)高。 質(zhì)粒載體的設(shè)計(jì) ? 雙抗生素 ? 藍(lán)白斑篩選 ? 多克隆位點(diǎn) ? 表達(dá)載體 構(gòu)建質(zhì)粒載體 (1)分子量盡量小。＞ 15kb 時(shí)轉(zhuǎn)化效率低。 小質(zhì)粒優(yōu)點(diǎn) :① 容易提取； ②較為抵抗機(jī)械 (超聲波 )切割； ③多拷貝，給克隆基因提供了劑量效應(yīng)； ④對內(nèi)切酶提供多切點(diǎn)的機(jī)會大為減少。 (2)了解載體上基因位置 /限制酶作用位點(diǎn)。 (3)包含可供選擇的標(biāo)記性狀 (基因 ) (4)應(yīng)有另一個(gè)遺傳標(biāo)記基因（抗生素常用）， (5)最大
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