醫(yī)學分子生物學考試重點(編輯修改稿)
2025-07-06 23:31 本頁面
【文章內容簡介】 載體的一般特性以及常用載體的種類載體特性：①分子量小，以容納較大的外源DNA ；②有多種限制酶單一識別序列，有助于外源DNA片段插入；③載體DNA被切割并插入外源DNA后，不影響其復制能力；④ 有標記基因，有利于篩選重組體；⑤克隆載體上要有復制起點，表達載體上還要有啟動子。載體種類：①克隆較小片段DNA的載體：質粒；②克隆中等大小片段DNA的載體： λ噬菌體，粘粒載體；③克隆大片段DNA的載體：細菌人工染色體(BAC)載體，噬菌體P1載體；④克隆巨大片段DNA的載體：酵母人工染色體(YAC)。8. PCR及PCRDHPLC的基本原理PCR原理：以合成的兩條已知序列的寡核苷酸為引物，在DNA聚合酶作用下，將位于兩引物之間的特定DNA片段進行復制。通過變性，退火，延伸一個循環(huán)，每一個循環(huán)的產(chǎn)物作為下一個循環(huán)的模板，反復進行n次循環(huán)，就可以得到2n倍DNA。PCRDHPLC原理：PCR擴增后的DNA片斷通過一個DNA分離柱進行分離，經(jīng)流動相洗脫的核酸片段通過紫外或熒光檢測器檢測轉換成數(shù)字信號儲存于計算機中，然后進行分析。9. 核酸雜交（Southern）的基本原理、步驟及應用原理：是指DNADNA雜交,以標記的DNA探針檢測靶DNA,應用于DNA分子的檢測、分析。應用：①克隆基因的酶切圖譜分析；②基因的定性及定量分析；③基因突變分析:缺失、插入,影響到酶切位點的點突變；④RFLP連鎖分析；步驟：①DNA提取提取組織或細胞的基因組DNA②DNA分離限制酶消化DNA ，凝膠電泳分，離大小不同的DNA片段③DNA變性：凝膠中的DNA在堿性溶液中變性④轉膜：將變性的DNA片段從凝膠原位轉移印跡在硝酸纖維素膜或尼龍膜上⑤雜交：將標記的探針變性，同固著的靶DNA片段雜交，與靶DNA中的互補DNA序列形成異源雙鏈⑥洗膜：未結合的多余DNA探針以及非特異性結合的DNA探針通過洗膜去除⑦放射自顯影：將雜交的膜進行放射自顯影10. 染色質免疫沉淀技術(CHIP)的原理基本原理：在活細胞狀態(tài)下固定蛋白質－DNA復合物，細胞內存在的許多DNA與蛋白質間的相互作用被保留下來。細胞裂解后,用超聲波或酶將染色質隨機切斷為一定長度范圍的小片段，然后通過免疫學方法沉淀目的蛋白質與DNA的復合體，特異性地富集與目的蛋白結合的DNA片段，通過對目的DNA片斷的純化與檢測，獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。11. 影響轉基因表達的因素影響因素：在一個轉基因動物中，轉基因的出現(xiàn)其自身并不足以能產(chǎn)生有功能的產(chǎn)物。獨立獲得的帶有相同轉基因構件的轉基因動物，其轉基因表達的水平或模式并不一定相同。①表達構件上的序列；②宿主基因組內因素。12. 何謂功能克??？以F8基因克隆為例簡述功能克隆過程。功能克?。菏抢靡阎誀顚幕虍a(chǎn)物，如蛋白質氨基酸序列的信息，進行基因定位，進而克隆該基因。功能克隆：基因功能的研究先于基因鑒定。 FⅧ蛋白 ↓胰蛋白酶消化 多 肽 ↓色譜法分離 多肽片段 ↓ 氨基酸測序 ↓ 合成寡核苷酸探針 ↓ 篩選基因組文庫 ↓ 基因組文庫步移法克隆全基因 .功能克隆過程：用該方法克隆基因，需要預先得知性狀對應的蛋白質序列。利用其mRNA反轉錄成cDNA，再用cDNA作探針從人類基因組中釣出基因本身。蛋白質→ RNA →DNA/GENE。以八因子為例：FⅧ蛋白—胰蛋白酶消化→多肽—色譜法分離→多肽片段→氨基酸測序→合成寡核苷酸探針→篩選基因組文庫→基因組文庫步移法克隆全基因。31﹒何謂定位克隆？以DMD基因克隆為例概述定位克隆過程。定位克?。菏窍壤眠B鎖分析進行基因定位作圖，然后進行基因克隆，進一步明確該基因的功能。定位克隆過程：染色體定位→ 縮小候選區(qū)域→鄰近克隆群中篩選出結構基因→經(jīng)篩查突變來確定疾病相關基因。以DMD為例：①染色體定位：通過連鎖分析把DMD基因定位于Xp21。②染色體分析：女性患者，其雙親正常、無家族史，經(jīng)染色體分析發(fā)現(xiàn)都有X染色體和常染色
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