分子生物學(xué)試題(編輯修改稿)
2024-08-31 14:16 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 速合成分解乳糖的三種酶。協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制，互相協(xié)調(diào)、互相制約。（三）、真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制？答：真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要是通過反式作用因子、順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用來完成的，主要是反式作用因子結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程。 轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成：真核生物RNA聚合酶識(shí)別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成的蛋白質(zhì)DNA復(fù)合物，只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上，形成有功能的啟動(dòng)子，才能被RNA聚合酶所識(shí)別并結(jié)合。轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程為：TFⅡD結(jié)合TATA盒；RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合TFⅡDDNA復(fù)合物形成一個(gè)閉合的復(fù)合物；其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié)合形成一個(gè)開放復(fù)合物。在這個(gè)過程中，反式作用因子的作用是：促進(jìn)或抑制TFⅡD與TATA盒結(jié)合；促進(jìn)或抑制RNA聚合酶與TFⅡDDNA復(fù)合物的結(jié)合；促進(jìn)或抑制轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成。 反式作用因子：一般具有三個(gè)功能域（DNA識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域和結(jié)合其他蛋白結(jié)合域）；能識(shí)別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的順式作用元件；對(duì)基因的表達(dá)有正性或負(fù)性調(diào)控作用。 轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控：⑴反式作用因子的活性調(diào)節(jié)：①表達(dá)式調(diào)節(jié)——反式作用因子合成出來就具有活性；②共價(jià)修飾——磷酸化和去磷酸化，糖基化；③配體結(jié)合——許多激素受體是反式作用因子；④蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用——蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)復(fù)合物的解離與形成。⑵反式作用因子與順式作用元件的結(jié)合：反式作用因子被激活后，即可識(shí)別并結(jié)合上游啟動(dòng)子元件和增強(qiáng)子中的保守性序列，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用。⑶反式作用因子的作用方式——成環(huán)、扭曲、滑動(dòng)、Oozing。⑷反式作用因子的組合式調(diào)控作用：每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用，但反式作用因子對(duì)基因調(diào)控不是由單一因子完成的而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。（四）、真核生物轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控機(jī)制？答：（1）、5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化的調(diào)控意義：5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化是保持mRNA穩(wěn)定的一個(gè)重要因素，它至少保證mRNA在轉(zhuǎn)錄過程中不被降解。（2）、mRNA選擇性剪接對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的作用（3）、mRNA運(yùn)輸?shù)目刂疲ㄎ澹?、受體的特點(diǎn)？答：高度專一性；高度親和性；可逆性；可飽和性；特定的作用模式（六）、表皮生長因子介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑？答：表皮生長因子受體是一個(gè)典型的蛋白酪氨酸激酶受體，這個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的主要步驟是： 受體二聚化的形成及其磷酸化：表皮生長因子與受體的結(jié)合使受體發(fā)生二聚化，從而改變受體構(gòu)象，使蛋白酪氨酸激酶活性增強(qiáng)，受體自身的幾個(gè)蛋白酪氨酸殘基在激酶的作用下發(fā)生磷酸化。 募集接頭蛋白Grb2：表皮生長因子受體自身被磷酸化后，不僅其激酶活性增強(qiáng)，而且其構(gòu)象發(fā)生變化，從而適合與含SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白分子相結(jié)合。Grb2是作為接頭蛋白結(jié)合到受體上。 調(diào)控分子SOS的活化：SOS含有可與SH3結(jié)構(gòu)域相結(jié)合的富含脯氨酸基序，當(dāng)Grb2結(jié)合到磷酸化的表皮生長因子受體后，它的兩個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域即可結(jié)合SOS，使之活化。 低分子量G蛋白R(shí)as的活化：SOS可促進(jìn)Ras釋放GDP，結(jié)合GTP的反應(yīng)，使Ras激活?；罨腞as作用其下游分子Raf，使之活化。Raf是MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)的第一個(gè)分子，由此啟動(dòng)了MAPK的三級(jí)激活過程。 MAPK的級(jí)聯(lián)激活：Raf是一種MAPKKK，它作用于MEK，使之磷酸化而激活，活化的MEK在作用于MAPK家族的ERK1，使之磷酸化激活由此完成了三級(jí)激活。 轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用：活化的ERK可以轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi)，使某些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子發(fā)生磷酸化，從而影響基因的轉(zhuǎn)錄。（七）、cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑？答：組成：胞外信息分子（主要是胰高血糖素、腎上腺素和促腎上腺皮質(zhì)激素），受體，G蛋白，AC，cAMP , PKA。途徑：? 信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化? 受體活化G蛋白? 活化后的G蛋白激活腺苷酸環(huán)化酶（AC）? AC催化ATP生成cAMP? cAMP活化PKA，PKA使目標(biāo)蛋白磷酸化，調(diào)節(jié)代謝酶的活性或調(diào)節(jié)基因的表達(dá)（八）、IP3Ca2+信號(hào)途徑：? 信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化? 受體活化G蛋白? 活化后的G蛋白激活PLC? PLC水解PIP2生成IP3 和DG? IP3 使鈣通道打開，細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高? Ca2+與CaM結(jié)合，激活Ca2+CaM依賴的蛋白激酶? Ca2+CaM依賴的蛋白激酶使目標(biāo)蛋白磷酸化。（九）、分子克隆中常用的工具酶及良好載體的條件？答：（1）、常用的工具酶 限制性核酸內(nèi)切酶：是細(xì)菌產(chǎn)生的一類能識(shí)別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿基順序的核酸水解酶。 DNA連接酶：將兩段DNA分子拼接起來的酶。 DNA聚合酶：催化單核苷酸鏈延伸。 逆轉(zhuǎn)錄酶：依賴于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，產(chǎn)物DNA又稱互補(bǔ)DNA。 末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶：將脫氧核糖核酸加到DNA的3末端。 堿性磷酸酶：催化去除DNA、RNA等的5磷酸基團(tuán)。 依賴DNA的RNA聚合酶：識(shí)別特異性啟動(dòng)子，RNA轉(zhuǎn)錄。（2）、良好載體的條件必須有自身的復(fù)制子；載體分子上必須有限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，即多克隆位點(diǎn)，以供外源DNA插入；載體應(yīng)具有可供選擇的遺傳標(biāo)志，以區(qū)別陽性重組子和陰性重組子；載體分子必須有足夠的容量；可通過特定的方法導(dǎo)入細(xì)胞；對(duì)于表達(dá)載體還應(yīng)具備與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動(dòng)子、
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