分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)(編輯修改稿)
2025-02-09 07:55 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 在原位。這樣原有的細(xì)胞內(nèi)單拷貝或低拷貝的特定 DNA或RNA序列在原位以呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)增，擴(kuò)增的產(chǎn)物就可以被原位雜交技術(shù)檢測(cè)出來(lái)。 重疊延伸 PCR技術(shù)由于使用了具有 互補(bǔ)末端 的引物 ， 使PCR 產(chǎn)物形成了 重疊鏈 ， 從而在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過(guò)重疊鏈的延伸 ， 將不同來(lái)源的擴(kuò)增片段 重疊拼接 起來(lái) 。 可簡(jiǎn)單迅速的將兩個(gè) DNA片段連在一起 ， 用于 嵌合基因 的構(gòu)建 重疊延伸 PCR原理 二、基因組學(xué)研究 ? 標(biāo)記性示蹤物 ——放射性和非放射性 ? 基因活性和功能研究：基因表達(dá)系列分析，DNA微陣列和微芯片，體內(nèi)帶白紙積累的檢測(cè)，基因敲除， RNA干涉 三、 DNA蛋白互作技術(shù) ? 過(guò)濾結(jié)合 ? 染色質(zhì)免疫沉淀法 ? 凝膠阻滯分析 ? DNA酶足跡 ? DNase足跡法， DMS足跡法 酵母單雜交 ? 將已知順式作用元件構(gòu)建到最基本啟動(dòng)的上游，把報(bào)告基因連接到啟動(dòng)子下游，將編碼待測(cè)轉(zhuǎn)錄因子 cDNA與已知酵母轉(zhuǎn)錄 激活結(jié)構(gòu)域（ AD） 融合表達(dá)載體導(dǎo)入酵母細(xì)胞 ，該基因產(chǎn)物如果能與順式作用元件結(jié)合，就能激活啟動(dòng)子使 報(bào)告基因 得到表達(dá)。 酵母雙雜交 ? 真核生物的轉(zhuǎn)錄因子大多是由兩個(gè)結(jié)構(gòu)上分開(kāi)、功能上獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域組成的，即 DNA結(jié)合域（ BD)和轉(zhuǎn)錄激活域（ AD) ? 單獨(dú)的 BD與特定基因的啟動(dòng)區(qū)結(jié)合，但不能激活基因的轉(zhuǎn)錄，而由不同轉(zhuǎn)錄因子的 BD和 AD所形成的雜合蛋白卻能形式激活轉(zhuǎn)錄的功能。 凝膠阻滯 ? 在凝膠電泳中，如果 DNA與某種蛋白質(zhì)相結(jié)合，由于分子量增大，它在凝膠中的遷移作用便會(huì)受到阻滯，在電泳中移動(dòng)的距離變小，表現(xiàn)為相對(duì)滯后。 DNaseI足跡 ? 蛋白質(zhì)與 DNA特定區(qū)段相結(jié)合，從而使該區(qū)段DNA免受 DNase的降解，在電泳凝膠的放射自顯影圖片上，相應(yīng)于蛋白質(zhì)結(jié)合的部位不產(chǎn)生放射性標(biāo)記條帶。 染色質(zhì)免疫共沉淀（ ChiP） ? 在活細(xì)胞狀態(tài)下固
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