分子生物學實驗技術(編輯修改稿)
2025-02-09 07:55 本頁面
【文章內容簡介】 在原位。這樣原有的細胞內單拷貝或低拷貝的特定 DNA或RNA序列在原位以呈指數(shù)級擴增，擴增的產物就可以被原位雜交技術檢測出來。 重疊延伸 PCR技術由于使用了具有 互補末端 的引物 ， 使PCR 產物形成了 重疊鏈 ， 從而在隨后的擴增反應中通過重疊鏈的延伸 ， 將不同來源的擴增片段 重疊拼接 起來 。 可簡單迅速的將兩個 DNA片段連在一起 ， 用于 嵌合基因 的構建 重疊延伸 PCR原理 二、基因組學研究 ? 標記性示蹤物 ——放射性和非放射性 ? 基因活性和功能研究：基因表達系列分析，DNA微陣列和微芯片，體內帶白紙積累的檢測，基因敲除， RNA干涉 三、 DNA蛋白互作技術 ? 過濾結合 ? 染色質免疫沉淀法 ? 凝膠阻滯分析 ? DNA酶足跡 ? DNase足跡法， DMS足跡法 酵母單雜交 ? 將已知順式作用元件構建到最基本啟動的上游，把報告基因連接到啟動子下游，將編碼待測轉錄因子 cDNA與已知酵母轉錄 激活結構域（ AD） 融合表達載體導入酵母細胞 ，該基因產物如果能與順式作用元件結合，就能激活啟動子使 報告基因 得到表達。 酵母雙雜交 ? 真核生物的轉錄因子大多是由兩個結構上分開、功能上獨立的結構域組成的，即 DNA結合域（ BD)和轉錄激活域（ AD) ? 單獨的 BD與特定基因的啟動區(qū)結合，但不能激活基因的轉錄，而由不同轉錄因子的 BD和 AD所形成的雜合蛋白卻能形式激活轉錄的功能。 凝膠阻滯 ? 在凝膠電泳中，如果 DNA與某種蛋白質相結合，由于分子量增大，它在凝膠中的遷移作用便會受到阻滯，在電泳中移動的距離變小，表現(xiàn)為相對滯后。 DNaseI足跡 ? 蛋白質與 DNA特定區(qū)段相結合，從而使該區(qū)段DNA免受 DNase的降解，在電泳凝膠的放射自顯影圖片上，相應于蛋白質結合的部位不產生放射性標記條帶。 染色質免疫共沉淀（ ChiP） ? 在活細胞狀態(tài)下固
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