【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 計(jì)算 ① 谷氨酸、 ② 精氨酸、 ③ 丙氨酸的等電點(diǎn)。 中性氨基酸： pI=(pK′α–COO－ +pK′α–NH3＋ )/2 酸性氨基酸： pI=(pK′α–COO－ +pK′R–COO－ )/2 ＋＋堿性氨基酸： pI=(pK′α–NH3+pK′R–NH3)/2 －－ ① 谷氨酸： pI=(pK′α–COO+pK′R–COO)/2＝ (＋ )∕2＝ ② 精氨酸： pI=(pK′α–NH3＋ +pK′R–NH3＋ )/2＝ (＋ )∕2＝ ③ 丙氨酸： pI=(pK′α–COO－ +pK′α–NH3＋ )/2＝ (＋ )∕2＝ 用強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂分離下述每對(duì)氨基酸，當(dāng)用 pH7． 0的緩沖液洗脫時(shí)，下述每對(duì)中先從柱上洗脫下來(lái)的是哪種氨基酸？ ① 天冬氨酸和賴氨酸： pH7． 0 天冬氨酸凈電荷－ 賴氨酸凈電荷＋ 1，天冬氨酸先洗脫。 ② 精氨酸和甲硫氨酸： pH7． 0精氨酸凈電荷＋ 甲硫氨酸凈電荷接近零，甲硫氨酸先洗脫。 ③ 谷氨酸和纈氨酸： pH7． 0谷氨酸凈電荷－ 纈氨酸凈電荷接近零，谷氨酸先洗脫。 ④ 甘氨酸和亮氨酸： pH7． 0 甘氨酸、亮氨酸凈電荷接近零，亮氨酸非極性大，甘氨酸先洗脫。 ⑤ 絲氨酸和 丙氨酸： pH7． 0絲氨酸、丙氨酸凈電荷接近零，絲氨酸非極性小，絲氨酸先洗脫。 下面的數(shù)據(jù)是從一個(gè)八肽降解和分析得到的，其組成是： Ala、 Gly Lys、Met、 Ser、 Thr、 Tyr。該八肽用 CNBr處理得到 ① Ala、 Gly、 Lys、 Thr； ② Gly、Met、 Ser、 Tyr。用胰蛋白酶處理得到 ① Ala、 Gly； ② Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr、Tyr。用糜蛋白酶處理得到 ① Gly、 Tyr； ② Ala、 Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr。與DNFB反應(yīng)可產(chǎn)生 DNPGly。與肼無(wú)水條件下加熱， Gly解離出來(lái)。請(qǐng)確定該肽的氨基酸順序。 CNBr 處理得到 ① Ala、 Gly、 Lys、 Thr； ② Gly、 Met、 Ser、 Tyr：（ Gly、 Ser、Tyr） –Met； ② 在 ① 前得（ Gly、 Ser、 Tyr） –Met–（ Ala、 Gly、 Lys、 Thr） 胰蛋白酶處理得到 ① Ala、 Gly； ② Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr：（ Gly、 Met、Ser、 Thr、 Tyr） –Lys； ② 在 ① 前得（ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys–（ Ala、Gly） 糜蛋白酶處理得到 ① Gly、 Tyr； ② Ala、 Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr： ① Gly–Tyr；① 在 ② 前得 Gly–Tyr–（ Ala、 Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr） DNFB反應(yīng)可產(chǎn)生 DNPGly： N–末端為 Gly 與肼無(wú)水條件下加熱， Gly解離出來(lái)： C–末端為 Gly Gly–Tyr與（ Gly、 Ser、 Tyr） –Met：（ Gly–Tyr–Ser） –Met （ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys與 Gly–Tyr–Ser–Met：（ Gly–Tyr–Ser–Met–Thr）–Lys （ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys–（ Ala、 Gly）： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–（ Ala、 Gly） C–末端為 Gly： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–（ Ala–Gly） 該肽的氨基酸順序： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–Ala–Gly 酶化學(xué)習(xí)題 一 .名詞解釋 酶：生物活細(xì)胞產(chǎn)生的、具有催化能力的以蛋白質(zhì)為主要成分的生物催化劑 全酶：脫輔酶蛋白與輔因子金屬離子或有機(jī)小分子化合物結(jié)合形成的結(jié)合酶 輔酶：與酶蛋白以非共價(jià)鍵疏松結(jié)合 ,容易被透析或超濾法除去輔因子如 TPP、NAD 等。 輔基：與酶蛋白以共價(jià)緊密結(jié)合 ,不容易被透析或超濾法除去，如黃素和生物素等。 活性部位（ activesite）：酶分子中直接與底物結(jié)合，并和酶催化作用直接有關(guān)的部位。 誘導(dǎo)契合學(xué)說(shuō)： 1958， Koshland，酶活性中心結(jié)構(gòu)是柔性的，當(dāng)?shù)孜铮せ顒┗蛞种苿┡c酶分子結(jié)合時(shí)，底物分子誘導(dǎo)酶蛋白構(gòu)象發(fā)生有利于與底物結(jié)合的變化，使反應(yīng)所需催化基團(tuán)和結(jié)合基團(tuán)正確排列和定向，轉(zhuǎn)入有效的作用位置，使酶與底物完全吻合，契合形成中間產(chǎn)物酶－底物復(fù)合物。 同功酶：催化相同化學(xué)反應(yīng)，但在蛋白質(zhì)分子的 結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和免疫性能等方面都存在明顯差異的一組酶 可逆共價(jià)修飾：酶的催化下，酶分子上特定基團(tuán)與某種化學(xué)基團(tuán)發(fā)生可逆性共價(jià)結(jié)合，從而改變酶的活性。 酶的最適 pH：表現(xiàn)出酶最大活性的 pH值。不是酶的特征常數(shù)，會(huì)受到酶的濃度、底物以及緩沖液的種類等因素的影響。 酶的最適溫度：酶活性最高時(shí)的溫度 ,也即酶促反應(yīng)速度最大時(shí)的溫度。 不是酶的特征常數(shù)，會(huì)受到酶的濃度、底物以及緩沖液的種類等因素的影響。 不可逆抑制：與酶的必需基團(tuán)共價(jià)結(jié)合 ,使酶喪失活性 ,不能用透析超濾等物理方法除去抑制劑使酶恢復(fù)活性。如有機(jī)磷 化合物使羥基酶磷?；Щ?。 可逆抑制：與酶以非共價(jià)鍵疏松結(jié)合使酶活性降低或喪失 ,能夠通過(guò)透析、超濾等物理方法除去抑制劑使酶恢復(fù)活性。如磺胺藥抑菌。 競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用：抑制劑結(jié)構(gòu)與底物結(jié)構(gòu)相似，與底物競(jìng)爭(zhēng)同一種酶的活性中心，從而影響 E與 S的結(jié)合，使酶活性降低。 Vmax不變，表觀 Km增大。 非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用：抑制劑與酶分子活性中心以外的其它部位結(jié)合而抑制酶活性， I和 S與酶結(jié)合不存在競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。 Vmax減小，表觀 Km不變。 反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用：抑制劑（ I）僅與酶 —底物中間復(fù)合物（ ES）結(jié)合而抑制酶活性。 Vmax和表觀 Km都減小。 酶原：在細(xì)胞內(nèi)合成或初分泌時(shí)無(wú)活性的酶的前體。 別構(gòu)調(diào)節(jié)劑：能與別構(gòu)蛋白的別構(gòu)部位結(jié)合使蛋白產(chǎn)生別構(gòu)效應(yīng)的物質(zhì)。 共價(jià)調(diào)節(jié)酶：能通過(guò)可逆共價(jià)修飾調(diào)節(jié)活性的酶。 單體酶：一條肽鏈或幾條肽鏈共價(jià)締合蛋白質(zhì)酶。 寡聚酶：兩個(gè)或兩個(gè)以上亞基以非共價(jià)鍵結(jié)合蛋白質(zhì)酶。 多酶體系：為催化一個(gè)連續(xù)反應(yīng)鏈的一系列順序反應(yīng)，功能相關(guān)，不同種類的酶彼此聚合而成體系。 多酶復(fù)合體：功能相關(guān)，不同種類的酶非共價(jià)彼此鑲嵌形成的復(fù)合體 酶的回收率：（每次總活力 ∕第一次總活力） 100 酶的提純倍數(shù)： 每次比活力 ∕第一次比活力 比活力：每毫克蛋白所含有的酶活力單位數(shù)。 酶的轉(zhuǎn)換數(shù)：每秒鐘每個(gè)酶分子能催化的發(fā)生變化的底物微摩爾數(shù)，用 kcat表示（ mmol/S）。 別構(gòu)效應(yīng)：變構(gòu)劑與酶的別構(gòu)部位結(jié)合，引起酶活性部位的構(gòu)象改變從而改變酶的活性。 二 .簡(jiǎn)答題 ?如何證明 ? 化學(xué)本質(zhì)： 大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)：酶水解的產(chǎn)物是氨基酸；使蛋白質(zhì)變性的因素也能使酶變性；酶具有兩性解離和等電點(diǎn)性質(zhì)；不能透過(guò)半透膜；和蛋白質(zhì)具有相同的顏色反應(yīng) Ribozyme（核酶）：有催化活性的天然 RNA ?有何區(qū)別 ? 共性：用量少而催化效率高；穩(wěn)定底物形成過(guò)渡態(tài)，降低反應(yīng)的活化能，加速反應(yīng)；改變化學(xué)反應(yīng)的速度，不改變化學(xué)反應(yīng)平衡；反應(yīng)前后酶本身不變化。 區(qū)別：高效性：顯著降低化學(xué)反應(yīng)的活化能，提高反應(yīng)速度 10７ —101３倍（非酶催化劑）或 108—1020 倍（非催化反應(yīng)）；專一性：酶對(duì)底物嚴(yán)格的選擇性。酶只作用于某一種或某一類特定的底物；反應(yīng)條件溫和：常溫、常壓和接近中性酸堿度水溶液中進(jìn)行；酶易失活：使蛋白質(zhì)變性的因素（如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿高溫等）能使酶變性失去活性；酶活力可調(diào)節(jié)控制：酶 和代謝物的區(qū)域化分布；變構(gòu)調(diào)節(jié)、共價(jià)修飾調(diào)節(jié)和酶原激活；酶含量的調(diào)節(jié)（誘導(dǎo)、阻遏和降解）；激素調(diào)節(jié)等；某些酶催化活力與輔酶、輔基及金屬離子有關(guān)；酶促反應(yīng)無(wú)副反應(yīng)。 ? 習(xí)慣命名法：根據(jù)催化底物（蛋白酶；淀粉酶）、催化反應(yīng)的性質(zhì)（水解酶；轉(zhuǎn)氨酶；裂解酶等）、結(jié)合上述兩個(gè)原則（琥珀酸脫氫酶）在這些命名基礎(chǔ)上加上酶的來(lái)源或其它特點(diǎn)的命名法。 系統(tǒng)命名法：底物名稱（底物全部列出，用冒號(hào) :分隔） +反應(yīng)性質(zhì) +酶的命名法。水解反應(yīng)的底物水和反應(yīng)類型可省去。 ? 國(guó)際系統(tǒng)分類法： 1961 年國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)（ EnzymeCommittee,EC）根據(jù)酶所催化的反應(yīng)類型和機(jī)理，分成 6大類： 氧化 還原酶類（ Oxidoreductases）：催化氧化 還原反應(yīng)，主要是氫的轉(zhuǎn)移或電子傳遞的反應(yīng)。 轉(zhuǎn)移 (移換 )酶類（ Transferases）：催化化合物中某些基團(tuán)的轉(zhuǎn)移。根據(jù)基團(tuán)分成 8個(gè)亞類：轉(zhuǎn)移碳基、酮基或醛基、?；?、糖基、烴基、含氮基、含磷基和含硫基的酶。 水解酶類（ hydrolases）：催化底物的加水分解反應(yīng)。 裂合（裂解）酶類（ Lyase）：催化從底物分子中非水解性移去一個(gè)基團(tuán)或原子形成雙鍵的反應(yīng)及其逆反應(yīng)。主要包括醛縮酶、水化酶（脫水酶）及脫氨酶等。 異構(gòu)酶類（ Isomerases）：催化各種同分異構(gòu)體的相互轉(zhuǎn)化。常見(jiàn)的有消旋和變旋、醛酮異構(gòu)、順?lè)串悩?gòu)和變位酶類。 合