【正文】 由不同的 α氨基酸按一定的序列通過肽鍵縮合而成的，具有較穩(wěn)定的構(gòu)象并具有一定生物功能的大分子。 多肽：多于 25個(gè)氨基酸殘基形成的肽。可用于 N端分析。用于氨基酸定性 、定量分析。 包括 Thr、 Lys、 Phe、 Met、 Trp、 Leu、 Ile、 Val八種。如功能基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、藥物基因組學(xué)等研究。 準(zhǔn)備和醞釀階段（ 18c中期 20c初）：研究生物體的化學(xué)組成。 研究?jī)?nèi)容： 靜態(tài)生物化學(xué)：構(gòu)成生物體的基本物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。 動(dòng)態(tài)生物化學(xué)：構(gòu)成生物體的基本化學(xué)成分在生命活動(dòng)過程中的變化規(guī)律（物質(zhì)代謝和能量代謝）。如脂類、糖類和氨基酸性質(zhì)的系統(tǒng)研究； 發(fā)現(xiàn)可溶性催化劑 (酶 ) 建立與發(fā)展階段 (20c 初 20c 中葉 )：重要分子的發(fā)現(xiàn)和物質(zhì)代謝途徑的確定。 蛋白質(zhì)化學(xué)習(xí)題 一 .名詞解釋 氨基酸：含有氨基的羧酸，是肽和蛋白質(zhì)的構(gòu)件分子。 非蛋白質(zhì)氨基酸：不構(gòu)成蛋白質(zhì)氨基酸； 150 多種，多為標(biāo)準(zhǔn) AA 衍生物，還有 β， γ， δ氨基酸， D型氨基酸。 Edman反應(yīng)：堿性條件下氨基酸 αNH2 的 H原子被異硫氰酸苯酯（ PITC）烴基苯氨基硫甲酰基取代生成苯氨基硫甲酰氨基酸（ PTC氨基酸），無水 HF 中生成苯乙內(nèi)酰硫脲衍生物（ PTH氨基酸：無色）的烴基化反應(yīng)。 肽鍵：一個(gè)氨基酸的 α羧基與另一氨基酸的 α氨基脫水縮合形成的鍵。 N端：多肽鏈具游離的氨基的一端。 結(jié)合蛋白質(zhì)：由單純蛋白質(zhì)和非蛋白輔基 ——核酸、糖、脂、磷、金屬和色素等結(jié)合構(gòu)成。 二面角 (φ， ψ)：決定了相鄰肽平面的相對(duì)空間位置的 NCa 鍵在（－ 180176。）旋轉(zhuǎn)的旋轉(zhuǎn)角度 ψ角。 蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)：多肽鏈上的所有原子（包括主鏈和側(cè)鏈）在三維空間的分布。 別構(gòu)效應(yīng)：別 構(gòu)劑與蛋白質(zhì)別構(gòu)部位結(jié)合而引起其亞基和整個(gè)分子構(gòu)象、性質(zhì)和功能發(fā)生改變。 球蛋白：分子形狀似球形，較易溶于水一類活性蛋白，如肌紅蛋白、血紅蛋白和胰島素等。 但聚集沉淀析出。 層析：利用混合物中各組分物理化學(xué)性質(zhì)差異，使各組分以不同程度分布在兩相中（固定相，流過此固定相的流動(dòng)相 )，并使各組分以不同速度移動(dòng)，從而分離的方法。 親和層析：利用共價(jià)連接有特異配體的層析介質(zhì)，分離蛋白質(zhì)混合物中能特異結(jié)合配體的目的蛋白或其他分子的層析技術(shù)。 二 .簡(jiǎn)答題 ? 生物學(xué)功能：生物催化 (酶 )；代謝調(diào)節(jié) (多肽激素等 )；免疫保護(hù) (免疫球蛋白 ,補(bǔ)體等 )；物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和貯存 (離子通道 ,轉(zhuǎn)運(yùn)載體等 )；運(yùn)動(dòng)與支持 (肌蛋白 )；生長(zhǎng)、繁殖、遺傳和變異；生物膜的功能和受體等。 ？ 一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定步驟： ? 純化樣品， N端或 C端末端分析，測(cè)定由幾條肽鏈組成。 ? 氨基酸組成分析：水解樣品，氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定。 ? 測(cè)定每條小肽片段中的氨基酸排列順序（通常用 Edman降解法） ? 推斷蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序（重疊肽拼湊） ? 確定二硫鍵和酰胺基的位置。上升 ；第 N個(gè)氨基酸殘基的羰基氧與第 N＋ 4個(gè)氨基酸殘基的氨基氫形成氫鍵，走向平行于螺旋軸； R側(cè)鏈基團(tuán)伸向螺旋的外側(cè)，其大小、形狀及電荷等影響此結(jié)構(gòu)形成。；重復(fù)單位 。 β轉(zhuǎn)角 :多肽鏈 180。 ? 維持蛋白質(zhì)構(gòu)象的作用力：氫鍵、鹽鍵、疏水鍵、范德華力、二硫鍵 ? 一級(jí)結(jié)構(gòu)決定空間結(jié)構(gòu) ,空間結(jié)構(gòu)是功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，功能是空間結(jié)構(gòu)的外在表現(xiàn)，空間結(jié)構(gòu)尤其活性中心構(gòu)象變化，功能變化。 原膠原蛋白： 3 條左手螺旋多肽鏈相互纏繞形成右手超螺旋分子，長(zhǎng) 300nm，直徑為 ；靠鏈間氫鍵以及螺旋和超螺旋的反向盤繞維持超螺旋結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。 變性特征 : 1）生物活性喪失（主要標(biāo)志）。 ③ 球狀蛋白質(zhì)的不對(duì)稱性增加、粘度增加、擴(kuò)散系數(shù)降低 ,某些蛋白質(zhì)結(jié) 晶能力喪失。 ② 掌握目的產(chǎn)物的物理 化學(xué)性質(zhì)（文獻(xiàn)調(diào)研和預(yù)備性實(shí)驗(yàn)） ③ 建立相應(yīng)的可靠的分析測(cè)定方法。 ⑦ 產(chǎn)物的濃縮，干燥和保存。 攪拌與氧化：溫和 攪拌，加入少量巰基乙醇或半胱氨酸防止巰基氧化。 以電荷差異為依據(jù) ：電泳、電滲析、等電點(diǎn)沉淀、吸附層析和離子交換層析等。 ? 含量測(cè)定方法：凱氏定氮法、 Lowry法、紫外吸收法、染料結(jié)合法、膠體金法 純度鑒定方法：電泳、離心沉降、 HPLC和溶解度分析等。 ? 空氣：潮解、微生物污染和自動(dòng)氧化。 pH：保存液態(tài)樣品時(shí)注意其穩(wěn)定 pH范圍 時(shí)間：生化和分子生物學(xué)樣品不可能永久存活。 ③ 谷氨酸和纈氨酸： pH7． 0谷氨酸凈電荷－ 纈氨酸凈電荷接近零，谷氨酸先洗脫。該八肽用 CNBr處理得到 ① Ala、 Gly、 Lys、 Thr； ② Gly、Met、 Ser、 Tyr。與肼無水條件下加熱， Gly解離出來。 活性部位（ activesite）：酶分子中直接與底物結(jié)合，并和酶催化作用直接有關(guān)的部位。不是酶的特征常數(shù)，會(huì)受到酶的濃度、底物以及緩沖液的種類等因素的影響。如有機(jī)磷 化合物使羥基酶磷?；Щ?。 Vmax不變，表觀 Km增大。 Vmax和表觀 Km都減小。 單體酶：一條肽鏈或幾條肽鏈共價(jià)締合蛋白質(zhì)酶。 酶的轉(zhuǎn)換數(shù)：每秒鐘每個(gè)酶分子能催化的發(fā)生變化的底物微摩爾數(shù)，用 kcat表示（ mmol/S）。酶只作用于某一種或某一類特定的底物；反應(yīng)條件溫和：常溫、常壓和接近中性酸堿度水溶液中進(jìn)行；酶易失活：使蛋白質(zhì)變性的因素（如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿高溫等）能使酶變性失去活性；酶活力可調(diào)節(jié)控制：酶 和代謝物的區(qū)域化分布；變構(gòu)調(diào)節(jié)、共價(jià)修飾調(diào)節(jié)和酶原激活；酶含量的調(diào)節(jié)（誘導(dǎo)、阻遏和降解）；激素調(diào)節(jié)等；某些酶催化活力與輔酶、輔基及金屬離子有關(guān)；酶促反應(yīng)無副反應(yīng)。 ? 國(guó)際系統(tǒng)分類法： 1961 年國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)（ EnzymeCommittee,EC）根據(jù)酶所催化的反應(yīng)類型和機(jī)理，分成 6大類： 氧化 還原酶類（ Oxidoreductases）：催化氧化 還原反應(yīng)，主要是氫的轉(zhuǎn)移或電子傳遞的反應(yīng)。 裂合（裂解）酶類（ Lyase）：催化從底物分子中非水解性移去一個(gè)基團(tuán)或原子形成雙鍵的反應(yīng)及其逆反應(yīng)。 合成酶類（ LigasesorSynthetases）：連接酶，與 ATP分解反應(yīng)相偶聯(lián)催化 CC、CO、 CN以及 CS鍵的形成反應(yīng)。 ① 結(jié)構(gòu)專一性： 絕對(duì)專一性：只作用于一個(gè)特定的底物。 幾何異構(gòu) 專一性：選擇性催化幾何異構(gòu)體的一種構(gòu)型潛 (前 )手性專一性 ?什么是誘導(dǎo)契合學(xué)說 ?此學(xué)說說明了什么 ? 鎖鑰學(xué)說：酶和底物的關(guān)系就象鎖與鑰匙那樣的剛性關(guān)系，酶活性中心結(jié)構(gòu)與底物的結(jié)構(gòu)互相吻合，緊密結(jié)合成中間絡(luò)合物。 ? 實(shí)現(xiàn)高效率的重要因素： 鄰近定向效應(yīng)：酶與底物 結(jié)合成中間產(chǎn)物過程中，底物分子從稀溶液中密集到活性中心區(qū)，并使活性中心的催化基團(tuán)與底物的反應(yīng)基團(tuán)之間正確定向排列。 共價(jià)催化：酶分子上的活性基團(tuán)與底物以共價(jià)鍵結(jié)合，形成過渡態(tài)。 多個(gè)基元催化形式協(xié)同作用。 ⑤ 第二個(gè)底物水為 His57提供質(zhì)子，羥基Ｏ親核攻擊羰基Ｃ形成帶氧陰離子的四面體中間物。實(shí)質(zhì)：酶活性部位形成和暴露的過程。 ② 雙倒數(shù)作圖法：林 貝氏 (LineweaverBurk)作圖法（ 1934） 縱軸截距＝ 1∕Vmax，橫軸截距＝ 1/Km ？如何影響？ 影響因素： 1）底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 底物濃度與反應(yīng)速度關(guān)系曲線：矩形雙曲線一級(jí)反應(yīng)：當(dāng) [S]很低時(shí)， [S]↑與 v↑成比例；混合級(jí)反應(yīng)：當(dāng) [S]較高時(shí)， [S]↑與 v↑不成比例；零級(jí)反應(yīng)：當(dāng) [S]很高時(shí)， [S]↑， v不變，達(dá)到最大反應(yīng)速度 2）酶濃度對(duì)反應(yīng)速度的影響： 反應(yīng)速度與酶濃度成正比 v=k3[E][S]/Km+[S]，當(dāng) [S][E],式中 Km忽略不計(jì)， v=k3[E] 3）溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 兩種不同影響： ① 最適溫度前，溫度升高，活化分子數(shù)增多，反應(yīng)速度加快； ② 最適溫度后，溫度升高，熱變性速度加快。 ③ pH穩(wěn)定性：在一定的 pH范圍內(nèi)酶是穩(wěn)定的。 ① 不可逆抑制：與酶的必需基團(tuán)共價(jià)結(jié)合 ,使酶喪失活性 ,不能用透析超濾等物理方法除去抑制劑使酶恢復(fù)活性。 酶活性調(diào)節(jié)的方式： 共價(jià)調(diào)節(jié)： ① 酶原激活（不可逆共價(jià)調(diào)節(jié)） 例：胰蛋白酶原的激活過程：腸激酶啟動(dòng)胰蛋白酶原從 N–末端水解一個(gè)六肽致使酶分子構(gòu)象發(fā)生重塑，形成和暴露胰蛋白酶的活性部位，表現(xiàn)出胰蛋白酶的活性。這就是通過在其他酶的催化下，酶分子上特定基團(tuán)與某種化學(xué)基團(tuán)發(fā)生可逆性共價(jià)結(jié)合，從而改變酶的活性。 (變構(gòu)酶 )有何特點(diǎn) ? 特點(diǎn)： ① 一般是寡聚酶； ② 具有別構(gòu)效應(yīng)； ③ v對(duì) [S]不呈直角雙曲線，是 S形曲線。 核小體： DNA雙鏈 146bp以左手螺旋纏繞組蛋白八聚體 (H2A、 H2B、 H H4各 2個(gè) )核心 13∕4 圈形成。 DNA的 Tm值：一般在 7085176。 DNA復(fù)性：適當(dāng)條件下，變性 DNA的兩條彼此分開單鏈重新締合形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。 ③ 堿基嚴(yán)格配對(duì)： A