【正文】 生化作用：都有氧化還原的特征，可以傳遞 H+或 e。原核生物中，位于細(xì)胞膜上。是指營養(yǎng)物在生物體內(nèi)氧化分解成水和 CO2并釋放能量的過程。 總的看來，分解代謝只生成三種主要的終產(chǎn)物： CO H2O和 NH3。生成二碳化合物乙酰 CoA，釋出約總能量的 1/3，部分以 ATP貯存。 二 .簡答題 、多糖、脂等徹底分解的基本代謝過程。 ? 參與羥化反應(yīng) (脯氨酸羥化酶的輔酶。 ?在代謝中有什么作用 ? 葉酸的 8 位置，在 NADPH2 存在下，被還原成四氫葉酸（ FH4 或THFA）。巰基乙胺巰基。 ?這類輔酶有什么功能 ?其功能基團(tuán)是什么 ? 不需氧脫氫酶輔酶 NAD+或 NADP+。噻唑環(huán)的 C2。 分類：依據(jù)溶解性分為水溶性維生素 —維生素 B族和維生素 C等；脂溶性維生素 —維生素 A、 D、 E、 K等。 1977年， Sanger末端終止法 原理： ① DNA 鏈的酶促聚合反應(yīng) ——模板鏈，引物鏈，底物（四種 dNTP），DNA聚合酶 ② 終止化合物 ——ddNTP：末端為 ddNMP的 DNA鏈 步驟： ① 反應(yīng)分四組（ dNTP標(biāo)記）； ② 每組加入相應(yīng)一種 ddNTP； ③ 每組產(chǎn)生一組長短不同的以該組 ddNMP為 3′末端（ H） DNA片段； ④ 凝膠電泳 ⑤ 放射自顯影 ⑥ 讀序：自下而上合成鏈 5′3′堿基順序；模板鏈順序。 （ 3） tRNA的三級結(jié)構(gòu)：三葉草型二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，突環(huán)上未配對的堿基由于整個(gè)分子的扭曲而配成對，為倒 L字母型。 ② 3′末端都具有 CpCpAOH的結(jié)構(gòu)。 ⑤ 氫鍵、堿基堆積力、離子鍵及范德華力穩(wěn)定 DNA 雙螺旋。 ② 螺旋外側(cè)磷酸和脫氧核糖基以 3′5′磷酸二酯鍵連接，形成 DNA分子的骨架，糖基環(huán)平面與螺旋軸平行；螺旋內(nèi)側(cè)，嘌呤與嘧啶堿基環(huán)平面與螺旋軸垂直。 核酸雜交： DNA單鏈與互補(bǔ)的異源 DNA單鏈或 RNA鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。 融解溫度 (Tm)：熔解溫度或 DNA的熔點(diǎn)， DNA的變性達(dá)到 50%時(shí)，即增色效應(yīng)達(dá)到一半時(shí)的溫度。 DNA超螺旋： DNA三級結(jié)構(gòu)的一種類型，是 DNA雙螺旋的螺旋。 2）別構(gòu)激活：正變構(gòu)劑與酶的別構(gòu)部位結(jié)合而引起酶活性增加。 ② 酶的可逆共價(jià)修飾 例：肌肉中糖原磷酸解為１－磷酸葡萄糖磷酸化酶在蛋白激酶催化下使無活性的磷酸化酶 b磷酸化形成有活性磷酸化酶 a，磷酸酶催化下使有活性的磷酸化酶a去磷酸化形成無活性磷酸化酶 b。 。 5）抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響：使酶活性降低或喪失。 ② 偏離最適 pH，酶活性降低，過酸、過堿酶變性失活。 求法： ① 根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)作 v與 [S]的關(guān)系曲線直接求得：先測定不同底物 濃度的反應(yīng)初速度（ v），從 v與 [S]的關(guān)系曲線求得 Vm，然后再從 1/2Vm求得相應(yīng)的 [S]即為 km（近似值）。 ? 特定條件 下，酶原被水解一個(gè)或幾個(gè)特定肽段致使酶分子構(gòu)象發(fā)生重塑，表現(xiàn)出酶活性的過程。氧陰離子洞，氧陰離子與 Ser195， Gly193酰胺 H形成氫鍵使轉(zhuǎn)換態(tài)穩(wěn)定 ④ His57作為酸催化劑為敏感鍵Ｎ提供 質(zhì)子，肽鍵斷裂，第一個(gè)產(chǎn)物胺釋放，生成?；钢虚g物。 表面效應(yīng) (surfaceeffect)：疏水性 ―口袋 ‖效應(yīng)酶活動(dòng)中心微環(huán)境是疏水性的，有利于多種催化方式的進(jìn)行。功能基團(tuán)有氨基、羧基、咪唑基、巰基和酚基等。 ? 酶活性中心與底物通過誘導(dǎo)契合（ inducedfit）模式迅速可逆的、非共價(jià)的結(jié)合形成酶－底物復(fù)合物 ES，促進(jìn)底物形成過渡態(tài)且穩(wěn)定底物的過渡態(tài)，酶與底物的過渡態(tài)互補(bǔ)，親合力最強(qiáng)，釋放出結(jié)合能，使 ES的過渡態(tài)能級降低，有利于底物分子跨越能壘，加速酶促反應(yīng)速度。 ② 立體化學(xué)（異構(gòu)）專一性： 旋光異構(gòu)專一性：選擇性催化旋光異構(gòu)體的一種。酶只作用于某一種或某一類特定的底物。常見的有消旋和變旋、醛酮異構(gòu)、順反異構(gòu)和變位酶類。 水解酶類（ hydrolases）：催化底物的加水分解反應(yīng)。水解反應(yīng)的底物水和反應(yīng)類型可省去。 區(qū)別：高效性：顯著降低化學(xué)反應(yīng)的活化能，提高反應(yīng)速度 10７ —101３倍（非酶催化劑）或 108—1020 倍（非催化反應(yīng)）；專一性：酶對底物嚴(yán)格的選擇性。 多酶復(fù)合體：功能相關(guān)，不同種類的酶非共價(jià)彼此鑲嵌形成的復(fù)合體 酶的回收率：（每次總活力 ∕第一次總活力） 100 酶的提純倍數(shù)： 每次比活力 ∕第一次比活力 比活力：每毫克蛋白所含有的酶活力單位數(shù)。 共價(jià)調(diào)節(jié)酶：能通過可逆共價(jià)修飾調(diào)節(jié)活性的酶。 反競爭性抑制作用：抑制劑（ I）僅與酶 —底物中間復(fù)合物（ ES）結(jié)合而抑制酶活性。 競爭性抑制作用：抑制劑結(jié)構(gòu)與底物結(jié)構(gòu)相似，與底物競爭同一種酶的活性中心，從而影響 E與 S的結(jié)合，使酶活性降低。 不可逆抑制：與酶的必需基團(tuán)共價(jià)結(jié)合 ,使酶喪失活性 ,不能用透析超濾等物理方法除去抑制劑使酶恢復(fù)活性。 酶的最適 pH：表現(xiàn)出酶最大活性的 pH值。 輔基：與酶蛋白以共價(jià)緊密結(jié)合 ,不容易被透析或超濾法除去，如黃素和生物素等。與DNFB反應(yīng)可產(chǎn)生 DNPGly。 下面的數(shù)據(jù)是從一個(gè)八肽降解和分析得到的，其組成是： Ala、 Gly Lys、Met、 Ser、 Thr、 Tyr。 ② 精氨酸和甲硫氨酸： pH7． 0精氨酸凈電荷＋ 甲硫氨酸凈電荷接近零，甲硫氨酸先洗脫。 光線：光化作用 ——受光催化發(fā)生變色、氧化和分解等；吸收光，分子活化不利于保存，紫外線能量大，對制品影響最大。 核酸通常采用：瓊脂糖凝膠電泳和聚丙 烯酰胺凝膠電泳，最方便是紫外吸收法。吸附層析、 鹽析、凝膠過濾、離子交換層析、親和層析、等電聚焦制備電泳、制備 HPLC等。 以溶解度的差異為依據(jù)：鹽析、萃取、分配層析、選擇性沉淀和結(jié)晶等。 防止蛋白酶或核酸酶的降解：加入抑制劑或調(diào)節(jié)提取液 pH、離子強(qiáng)度或極性，使水解酶失活。 ⑥ 生物大分子制備物的純度鑒定：要求達(dá)到一維電泳一條帶，二維電泳一個(gè)點(diǎn)，或 HPLC和毛細(xì)管電泳都是一個(gè)峰。 14制備生物大分子的基本步驟是什么 ? 基本步驟 ① 確定制備生物大分子的目的和要求（科研、開發(fā)、發(fā)現(xiàn)新物質(zhì)）。但若溶液 pH與蛋白質(zhì)的 pI差別較大 ,蛋白質(zhì)仍不易沉淀。 ?變性蛋白質(zhì)的性質(zhì)有哪些變化 ? 變性的因素：熱、紫外光、激烈的攪拌、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等。 ? 組成和構(gòu)象特點(diǎn)： 原 膠原蛋白分子頭尾相連，交錯(cuò)排列，分子間共價(jià)交連，形成特征性帶狀纖維束。 ? 特點(diǎn)：多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上高度折疊成緊密球形或橢球形結(jié)構(gòu)；大多數(shù)可離子化的親水的氨基酸殘基都位于分子表面（表面也含有疏水的氨基酸殘基），疏水氨基酸殘基大部分埋藏在分子內(nèi)部（特別是一些疏水性強(qiáng)的氨基酸，如纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸和蛋氨酸，通常水分子被排除在蛋白內(nèi)部）；三級結(jié)構(gòu)可將某些局部的二級結(jié)構(gòu)聚合在一起，形成特定的結(jié)構(gòu)區(qū)域，大多為口袋狀，核心多為疏水氨基酸，結(jié)合蛋白質(zhì)的輔基常位于其中，多為蛋白質(zhì)的活性中心；穩(wěn)定維系三級結(jié) 構(gòu)的作用力有：氫鍵、鹽鍵、疏水鍵、范德華力、二硫鍵和配位鍵。；重復(fù)單位 。 ψ＝＋ 113176。每個(gè)螺旋圈含 個(gè)氨基酸殘基，螺距 ，每個(gè)殘基沿軸旋轉(zhuǎn) 100176。 ? 多肽鏈部分 斷裂，蛋白質(zhì)分解為小片段，肽段分離（至少兩套） 酶水解法：內(nèi)肽酶（肽鏈內(nèi)切酶） 胰蛋白酶法：水解 Lys或 Arg的羧基形成的肽鍵 糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）法：水解 Phe、 Trp和 Tyr等疏水氨基酸的羧基形成的肽鍵 胃蛋白酶法：被斷裂鍵兩側(cè)的殘基都是疏水性氨基酸如： PhePhe 化學(xué)法 ——CNBr法：裂解由 Met羧基形成的肽鍵。 還原法（含巰基 化合物使 S—S還原產(chǎn)生兩個(gè)半胱氨酸殘基（ CysSH） ,烷化劑（如碘乙酸）修飾 SH，阻止二硫鍵再生成）； 氧化法（過甲酸使 S—S氧化斷裂，生成半胱氨磺酸）。它們在結(jié)構(gòu)上有什么共同特點(diǎn) ? 結(jié)構(gòu)上共同特點(diǎn)： Cα 結(jié)合（ NH3）（ Pro 除外）、（ COOH）、 H 原子和各種側(cè)鏈（ R）； Cα是不對稱 C，具有手性（ Gly除外），蛋白質(zhì)氨基酸都是 L型。 雙向電泳：先按照等電點(diǎn)進(jìn)行等電聚焦電泳，然后在垂直方向按照分子大小再進(jìn)行 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，經(jīng)染色得到的電泳圖是二維分布的蛋白質(zhì)圖。 凝膠過濾層析：一種利用帶孔凝膠珠作基質(zhì)，按照分子大小分離蛋白質(zhì)或其他分子混合物的層析技術(shù)。 透析：通過小分子能透過半透膜擴(kuò)散到水或緩沖液的原理，將小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術(shù)。 鹽析：高濃度中性鹽破壞蛋白質(zhì)分子水膜、中和其電荷 ,蛋白質(zhì)不變性。 纖維蛋白：分子形狀似纖維，難溶于水、韌性大的一 類結(jié)構(gòu)蛋白，如角蛋白和膠原蛋白。 同源蛋白質(zhì)：在不同生物體中行使相同或相似功能且具有明顯的氨基酸序列相似性的蛋白質(zhì)。 結(jié)構(gòu)域：球狀蛋白質(zhì) 的折疊單位，多肽鏈上某些模體或模序相互聯(lián)系，進(jìn)一步形成可明顯區(qū)分空間結(jié)構(gòu)區(qū)域 ,并具有特定的生物學(xué)功能的緊密的近似球形的結(jié)構(gòu)。—＋ 180176。 肽單位：與肽鍵相關(guān)的 6個(gè)原子形成的一個(gè)剛性平面。 蛋白質(zhì)：