【正文】 Lys、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr：（ Gly、 Met、Ser、 Thr、 Tyr） –Lys； ② 在 ① 前得（ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys–（ Ala、Gly） 糜蛋白酶處理得到 ① Gly、 Tyr； ② Ala、 Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr： ① Gly–Tyr；① 在 ② 前得 Gly–Tyr–（ Ala、 Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr） DNFB反應(yīng)可產(chǎn)生 DNPGly： N–末端為 Gly 與肼無水條件下加熱， Gly解離出來： C–末端為 Gly Gly–Tyr與（ Gly、 Ser、 Tyr） –Met：（ Gly–Tyr–Ser） –Met （ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys與 Gly–Tyr–Ser–Met：（ Gly–Tyr–Ser–Met–Thr）–Lys （ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys–（ Ala、 Gly）： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–（ Ala、 Gly） C–末端為 Gly： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–（ Ala–Gly） 該肽的氨基酸順序： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–Ala–Gly 酶化學(xué)習(xí)題 一 .名詞解釋 酶：生物活細(xì)胞產(chǎn)生的、具有催化能力的以蛋白質(zhì)為主要成分的生物催化劑 全酶：脫輔酶蛋白與輔因子金屬離子或有機(jī)小分子化合物結(jié)合形成的結(jié)合酶 輔酶：與酶蛋白以非共價(jià)鍵疏松結(jié)合 ,容易被透析或超濾法除去輔因子如 TPP、NAD 等。 ⑤ 絲氨酸和 丙氨酸： pH7． 0絲氨酸、丙氨酸凈電荷接近零，絲氨酸非極性小，絲氨酸先洗脫。 水份：水參加水解、酶解、水合和加合，加速氧化、聚合、離解和霉變。吸附、萃取、沉淀法（熱變性、鹽析、有機(jī)溶劑沉淀等）、離子交換（批量吸附、胖柱交換）、親和層析等； ? 晚期分離純化 :細(xì)分級(jí)，分辨力高。 ? 主要影響因素： 離子強(qiáng)度： ～ ～ ； pH值：避免過酸、過堿，一般 pH6～ 8，蛋白質(zhì)和酶穩(wěn)定的范圍內(nèi)，常偏離等電點(diǎn)的兩側(cè)； 溫度： 0℃ ～ 5℃ ，溫度耐受力強(qiáng)的蛋白質(zhì)和酶，可提高溫度使雜蛋白變性。 ? 20種氨基酸 遠(yuǎn)紫外區(qū) (220nm)：均有光吸收 近紫外區(qū) (220300nm)：酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸含共軛雙鍵苯環(huán)，在 280nm處有最大吸收峰。 ? 穩(wěn)定蛋白質(zhì)膠體系統(tǒng)的因素：分子表面的親水基團(tuán)與周圍水分子結(jié)合形成水化層 (水膜 )；分子表面的親水基團(tuán)可 結(jié)合或釋放 H+,帶一定電荷，水溶液中蛋白質(zhì)顆粒帶相同電荷。 不規(guī)則卷曲 (randomcoil)：沒有確定規(guī)律性的松散肽鏈結(jié)構(gòu)。 平行 (Parallel)： φ＝－ 119176。 堿水解法： 6mol/LNaOH煮沸 6h,完全水解，消旋， Ser、 Thr、 Arg、 Lys和 Cys破壞。 凱氏定氮法： 100g樣品中蛋白質(zhì)含量 (g%)=每克樣品含氮克數(shù) 100 20種基本氨基酸的名稱 、結(jié)構(gòu)及縮寫。 離子交換層析： IEC，依據(jù)流動(dòng)相中的組分離子與離子交換劑（固定相）上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時(shí)的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。 血紅蛋白：由四個(gè)三級(jí)結(jié)構(gòu)幾乎與肌紅蛋白相同的亞基（ α2β2）和四個(gè)血紅素輔基組成的 能結(jié)合氧并使氧從肺轉(zhuǎn)運(yùn)到外周組織的球狀寡聚蛋白。 分子伴娘：幫助其他含多肽結(jié)構(gòu)的物質(zhì)在體內(nèi)進(jìn)行正確的非共價(jià)的組裝的蛋白質(zhì)。）旋轉(zhuǎn)的旋轉(zhuǎn)角度 φ角和 CaC 鍵在（－ 180176。 二硫鍵：兩個(gè)半胱氨酸側(cè)鏈巰基脫氫氧化形成的共價(jià)鍵，是維持某些蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的重要因素。 Sanger 反應(yīng)：堿性條件下氨基酸 αNH2 的 H 原子被 2,4二硝基氟苯的烴基二硝基苯基取代生成二硝基苯基氨基酸（黃色）的烴基化反應(yīng)。 必需氨基酸：人體自身不能合成或合成的量不足 ,必須通過食物供應(yīng)的氨基酸。 2．生物化學(xué)經(jīng)歷了哪幾個(gè)發(fā)展階段？各個(gè)時(shí)期研究的主要內(nèi)容是什么？試舉各時(shí)期一二例重大成就。 信息生物化學(xué)：包括核酸的生物合成，蛋白質(zhì)的生物合成，物質(zhì)代謝與基因表達(dá)的調(diào)控等。 蛋白質(zhì)的稀有氨基酸：非編碼 氨基酸，標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的衍生物?？芍貜?fù)測(cè)定多肽鏈 N端氨基酸排列順序，是氨基酸自動(dòng)測(cè)序的基礎(chǔ)。 C端：多肽鏈具游離的羧基的一端?！?80176。 蛋白質(zhì)四級(jí)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)分子內(nèi)非共價(jià)鍵連接的各自具有獨(dú)立三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽亞基的種類、數(shù)量以及各個(gè)亞基在蛋白質(zhì)分子內(nèi)的空間排布和相互作用。 肌紅蛋白：由一條多肽鏈（ 153 個(gè)氨基酸殘基）和一個(gè)血紅素輔基（ hemeprostheticgroup）組成的能結(jié)合氧并使氧在肌肉內(nèi)迅速擴(kuò)散的球狀蛋白質(zhì)。 超濾：利用 壓力或離心力使小分子溶質(zhì)通過半透膜而蛋白質(zhì)被截留在膜上而分離的一種技術(shù)。 ?什么是凱氏定氮法？ 元素組成特點(diǎn)：由 CHONSPISe 等元素組成 :C（ 50~55%）、 H（ 6~8%）、 O（ 20~23%）、 N（ 15~18%）、 S（ 0~4%）、 ?；氮元素含量平均約 16%。 酸水解法： 6mol/LHCl110℃ 加熱回流 16~24h,完全水解， Trp 被破壞， Gln,Asn酰胺基水解變成 Glu,Asp(Glx,Asx)近年來用甲基磺酸代替鹽酸。 β折疊片層：肽鍵平面遇 Cα發(fā)生折疊 ,形成鋸齒狀結(jié)構(gòu)， R 側(cè)鏈交錯(cuò)位于折疊片的上面和下面，兩個(gè)殘基形成一個(gè)重復(fù)單位；兩條 或多條肽鏈片段順向平行（平行）或反向平行（反平行）排列，形成片層結(jié)構(gòu)；相鄰肽鏈上所有的羰基氧和氨基氫形成鏈間氫鍵。的回折形成發(fā)夾形狀；一般四個(gè)氨基酸組成，常見氨基酸： Pro,Gly,Asp,Asn,Trp；第 1個(gè)氨基酸殘基的 C=O與第 4個(gè)殘基的 NH之間形成氫鍵。膠原鏈：每一圈螺旋含 3 個(gè)氨基酸殘基，每一個(gè)氨基酸殘基軸向距離為，螺距為 ；常重復(fù)出現(xiàn)三聯(lián)體序列 GlyProHyp。 ?有什么生理意義 ? 可解離的基團(tuán)： N端氨基、 C端羧基、側(cè)鏈氨基、羧基、羥基、巰基、咪唑基、胍基等。 ? 破碎細(xì)胞方法： ① 機(jī)械法：研磨、組織搗碎器 ② 物理法：反復(fù)凍融法、超聲波、壓 榨法、冷熱交替法 ③ 化學(xué)與生物化學(xué)方法：自溶法、溶脹法、酶解法、有機(jī)溶劑處理法。 以生物學(xué)功能專一性為依據(jù)：親和層析等 ，早期和晚期的分離純化方法有何不同 ? 分離純化流程中，早期和晚期分離純化方法的不同： ? 早期分離純化 :粗提取液（物質(zhì)成份復(fù)雜，物理化學(xué)性質(zhì)相近的物質(zhì)很多，目的產(chǎn)物濃度很?。?，所選方法要求快速、粗放；能較大地縮小體積；分辨力不必太高；負(fù)荷能力要大。 溫度：每種生物大分子都有其穩(wěn)定的溫度范圍，低溫抑制氧化、水解等化學(xué)反應(yīng)和微生物。 ④ 甘氨酸和亮氨酸： pH7． 0 甘氨酸、亮氨酸凈電荷接近零，亮氨酸非極性大，甘氨酸先洗脫。請(qǐng)確定該肽的氨基酸順序。 酶的最適溫度：酶活性最高時(shí)的溫度 ,也即酶促反應(yīng)速度最大時(shí)的溫度。 非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用：抑制劑與酶分子活性中心以外的其它部位結(jié)合而抑制酶活性， I和 S與酶結(jié)合不存在競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。 寡聚酶：兩個(gè)或兩個(gè)以上亞基以非共價(jià)鍵結(jié)合蛋白質(zhì)酶。 ? 習(xí)慣命名法：根據(jù)催化底物（蛋白酶；淀粉酶）、催化反應(yīng)的性質(zhì)（水解酶；轉(zhuǎn)氨酶；裂解酶等）、結(jié)合上述兩個(gè)原則（琥珀酸脫氫酶）在這些命名基礎(chǔ)上加上酶的來源或其它特點(diǎn)的命名法。主要包括醛縮酶、水化酶（脫水酶）及脫氨酶等。例如：脲酶、麥芽糖酶、淀粉酶等 相對(duì)專一性：作用于一類化合物或一類化學(xué)鍵族 (group)專一性：對(duì)鍵兩端的基團(tuán)要求的程度不同，只對(duì)其中一個(gè)基團(tuán)要求嚴(yán)格。 ―張力 ‖與 ―形變 ‖效應(yīng)：酶與底物結(jié)合，底物分子也會(huì)發(fā)生扭曲變形，使底物分子的某些鍵的鍵能減弱，產(chǎn)生鍵扭曲，降低了反應(yīng)活化能，激活形成過渡態(tài)。 。 ?如何求 ?。 酶活性與 pH的關(guān)系曲線 :一般鐘形 最適 pH：酶活性最高時(shí)的 pH,也即酶促反應(yīng)速度最大時(shí)的 pH。這是通過不可逆的共價(jià)鍵的斷裂使無活性的胰蛋白酶原被激活為有活性的胰蛋白酶。 核酸化學(xué)習(xí)題 一 .名詞解釋 核苷酸：由核苷的羥基與磷酸脫水縮 合而成核苷的磷酸酯。C之間 增色效應(yīng)： DNA變性后， A260值增加。 ④ 螺旋橫截面直徑約 2nm，每條鏈相鄰兩個(gè)堿基平面之間距離 ，夾角36176。 ③ 分子中含有較多的修飾成分，稀有堿基比例 10％左右。 維生素化學(xué) 一 .名詞解釋 維生素 (vitamin)：維持正常生命活動(dòng)所必需的一類小分子有機(jī)化合物。參與遞氫， 參與生物氧化作用。氨基酸轉(zhuǎn)氨酶、氨基酸脫羧酶和絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶的輔酶 ,在氨基酸代謝中起重要作用。 細(xì)胞能量循環(huán)：即 ATP 循環(huán)， ATP 水解成 ADP，釋出自由能，驅(qū)動(dòng)需要自由能的吸能反應(yīng)， ADP 與 Pi又可利用營(yíng)養(yǎng)物經(jīng)生物氧化時(shí)產(chǎn)生的能量重新磷酸化為 ATP。 Ⅲ 階段：乙酰 CoA進(jìn)入檸檬酸循環(huán)，乙?；谎趸?CO2和 H2O。即：遞氫體和遞電子體按一定順序排列所組成的鎖鏈。 黃素脫氫酶類（黃素蛋