【文章內(nèi)容簡介】 然后用自來水和無離子水洗凈即可。 洗液的配制 因己確定鉻有致癌作用，因此 配制和使用洗液時要極為小心，常用兩種配制方法如下： ⑴ 取 100mL 工業(yè)濃硫酸置于燒杯內(nèi)，小心加熱，然后慢慢加入 5g 重鉻酸鉀粉末，邊加邊攪拌，待全部溶解并緩慢冷卻后，貯存在磨口玻璃塞的細口瓶內(nèi)。 ⑵ 稱取 5g 重鉻酸鉀粉末，置于 250mL 燒杯中，加 5mL 水使其溶解，然后慢慢加入 100mL 濃硫酸，溶液溫度將達 80℃，待其冷卻后貯存于磨口玻璃瓶內(nèi)。 其他洗滌液 １０ ⑴ 工業(yè)濃鹽酸：可洗去水垢或某些無機鹽沉淀。 ⑵ 5％草酸溶液：用數(shù)滴硫酸酸化，可洗去高錳酸鉀的痕跡 。 ⑶ 5％～ 10％磷酸三鈉（ Na3PO4 12H2O）溶液：可洗滌油污物。 ⑷ 30％硝酸溶液：洗滌二氧化碳測定儀及微量滴管。 ⑸ 5％～ 10％乙二胺四乙酸二鈉（ EDTANa2）溶液：加熱煮沸可洗脫玻璃儀器內(nèi)壁的白色沉淀物。 ⑹ 尿素洗滌液：為蛋白質(zhì)的良好溶劑，適用于洗滌盛過蛋白質(zhì)制劑及血樣的容器。 ⑺ 有機溶劑：如丙酮、乙醚、乙醇等可用于洗脫油脂、脂溶性染料污痕等，二甲苯可洗脫油漆的污垢。 ⑻ 氫氧化鉀的乙醇溶液和含有高錳酸鉀的氫氧化鈉溶液：這是兩種強堿 性的洗滌液，對玻璃儀器的侵蝕性很強，可清除容器內(nèi)壁污垢，洗滌時間不宜過長，使用時應小心慎重。 玻璃和塑料器皿的干燥 ： 生化實驗中用到的玻璃和塑料器皿經(jīng)常需要干燥，通常都是用烘箱或烘干機在 110℃～ 120℃進行干燥，而不要用丙酮蕩洗再吹干的方法來干燥，因為那樣會有殘留的有機物覆蓋在器皿的內(nèi)表面，從而干擾生物化學反應。硝酸纖維素的塑料離心管加熱時會發(fā)生爆炸，所以決不能放在烘箱中干燥，只能用冷風吹干。 移液 準確的分析方法對于生物化學實驗是極為重要的，在各種生物化學分析技術(shù) 中，首先要熟練掌握的就是準確的移液技術(shù)。為此要用到各種形式的移液管，其中有一些是學生們在化學實驗中未用過而在生化實驗中是常用的。下圖列出了一些生化實驗中常用的移液器具。 ⑴ 滴管（圖 1－ 1 中 (E)） 使用方便，可用于半定量移液，其移液量為 1mL— 5mL，常用 2mL，可換不同大小的滴頭（圖 1－ 1 中 (A)）。滴管有長、短兩種，新出一種帶刻度和緩沖泡的滴管，可以比普通滴管更準確地移液，并防止液體吸入滴頭。 ⑵ 移液管（吸管） 吸管使用前應洗至內(nèi)壁不掛水珠， 1mL 以上的吸管，用 吸管專用刷刷洗， 、 和 的吸管可用洗滌劑浸泡，必要時可以用超聲清洗器清洗。由于鉻酸洗液致癌，應盡量避免使用。若有大量成批的吸管洗后沖洗，可使用沖洗桶，將吸管尖端向上置于桶內(nèi)，用自來水多次沖洗后再用蒸餾水或無離子水沖洗。 吸管分為兩種，一種是無分度的，稱為胖肚吸管（圖 1－ 1 中 (F)），精確度較高，其相對誤差 A 級為 ％ ~ ％，B 級為 ％ ~ ％，液體自標線流至口端（留有殘液）， A 級等待 15s， B 級等待 3s。 另一種吸管為分度吸管（圖 1－ 1 中 (G)），管身為一粗細均勻的玻璃管，上面均勻刻有表示容積的分度線，其準確度低于胖肚吸管，相對誤差 A 級為 ％ ~ ％， B 級為 ％ — ％， A 級、 B 級在吸管管身上有 A、 B 字樣，有“快”字則為快流式，有“吹”字則為吹出式，無“吹”字的吸管不可將管尖的殘留液吹出。吸、放溶液前要用吸水紙擦拭管尖。 １１ 圖 1－ 1 生化實驗中常用的移液器具 圖 1－ 1 (H)為血清吸管，其刻度一直刻到管端出口處，由于沒有管尖，不會殘留液體 ，但需在液體流完后仃留 15～20 秒，常用于吸取血清等粘度大的液體。 圖 1－ 1 (I)是微量λ吸管，用于 1～ 500?l （ 1λ = 1?l）的移液，用吸水紙蘸出多吸的液體。 圖 1－ 1 (J)是毛細微量吸管，用于 1～ 20?l 的移液，常用于薄層層析和紙層析。 吸管吸取溶液最常用的是洗耳球（圖 1 中 (B)）。此外，為便于移液，還可以使用新式的吸液球（圖 1－ 1 中 (C)），球上有 A、 B、 C 三個玻璃珠閥門，吸液之前，先用拇指和食指按捏 A 閥，用其他手指擠壓球體，由 A 閥排氣，使球內(nèi)形成負壓，插入吸管吸 液時，用拇指和食指按捏 B 閥，將溶液吸至所需刻度，放液時按捏 C 閥，直至溶液流盡，若需吹出管尖殘液時，可在按捏 C 閥的同時，用中指擠壓 C 閥前面的小球泡，即可吹出管尖殘液。 還有一種“吸管泵”（圖 1－ 1 中 (D)）使用更為方便，插入吸管后，用拇指轉(zhuǎn)動上部的小輪，即可使園柱形泵內(nèi)的柱塞上下移動，將溶液吸入或排出吸管，尤其是在移取 10mL 以上的溶液時，用“吸管泵”最為方便。 ⑶ 微量進樣器 微量進樣器常用作氣相和液相色譜儀的進樣器，在生化實驗中主要是用作電泳實驗的加樣器，通?？煞譃闊o存液和有存 液兩種。 1) ?L ～ 5?L 無存液微量進樣器： 進樣器的不銹鋼芯子直接通到針尖端處，不會出現(xiàn)存液，所以可用于 5?L以下的極微量液體進樣。 2) 10?L～ 100?L 有存液微量進樣器： 不銹鋼的針尖管部分是空管，進樣器的柱塞不能到達，因而管內(nèi)會存有空氣或液體，其使用注意事項是：① 不可吸取濃堿溶液，以免腐蝕玻璃和不銹鋼零件。 ② 因為有存液，所以吸液時要來回多拉幾次，將針尖管內(nèi)的氣泡全部排盡。 ③ 針尖管內(nèi)孔極小，使用后，尤其是吸取過蛋白質(zhì)溶液后，必須立即 １２清洗針尖管，防止堵塞。若 遇針尖管堵塞，不可用火燒，只能用φ 的不銹鋼絲耐心串通。 ④ 進樣器未潤濕時不可來回干拉芯子，以免磨損而漏氣。 ⑤ 若進樣器內(nèi)發(fā)黑，有不銹鋼氧化物，可用芯子蘸少量肥皂水，來回拉幾次即可除之。 ⑷ 自動取液器 這種取液器在生化實驗中大量地使用，它們主要用于多次重復的快速定量移液，可以只用一只手操作，十分方便。移液的準確度（即容量誤差）為 177。 (％～ ％ )，移液的精密度（即重復性誤差）更小些，為 ≤ ％。 取液器可分為二種：一種是固定容量的，常用的有 100?l 、 200?L 和 1000?L 等幾種；另一種是可調(diào)容量的取液器，常用的有 200?L、 1000?L 和 5000?L 等多種規(guī)格。每種取液器都有其專用的聚丙烯塑料吸頭，吸頭通常是一次性使用，當然也可以超聲清洗后重復使用，而且此種吸頭還可以進行 120℃高壓滅菌。 可調(diào)式自動取液器的操作方法是用拇指和食指旋轉(zhuǎn)取液器上部的旋鈕，使數(shù)字窗口出現(xiàn)所需容量體積的數(shù)字，在取液器下端插上一個塑料吸頭，并旋緊以保證氣密，然后四指并攏握住取液器上部，用拇指按住柱塞桿頂端的按鈕，向下按到第一停點，將取液器的吸頭插入待取的溶液中，緩慢松開按 鈕，吸上液體，并停留 1～ 2 秒鐘（粘性大的溶液可加長停留時間），將吸頭沿器壁滑出容器，用吸水紙擦去吸頭表面可能附著的液體，排液時吸頭接觸傾斜的器壁，先將按鈕按到第一停點，停留一秒鐘（粘性大的液體要加長停留時間），再按壓到第二停點，吹出吸頭尖部的剩余溶液，如果不便于用手取下吸頭，可按下除吸頭推桿，將吸頭推入廢物缸。 自動取液器的使用注意事項是： ① 吸取液體時一定要緩慢平穩(wěn)地松開拇指，絕不允許突然松開，以防將溶液吸入過快而沖入取液器內(nèi)腐蝕柱塞而造成漏氣。 ② 為獲得較高的精度，吸頭需予先吸取一次樣品溶液 ，然后再正式移液，因為吸取血清蛋白質(zhì)溶液或有機溶劑時，吸頭內(nèi)壁會殘留一層“液膜”，造成排液量偏小而產(chǎn)生誤差。③ 濃度和粘度大的液體，會產(chǎn)生誤差，為消除其誤差的補償量，可由試驗確定，補償量可用調(diào)節(jié)旋鈕改變讀數(shù)窗的讀數(shù)來進行設(shè)定。④ 可用分析天平稱量所取純水的重量并進行計算的方法，來校正取液器， 1mL 蒸餾水 20℃時重 。 １３ 圖 1－ 2 自動取液器示 意圖 緩沖溶液與 pH 測定 緩沖溶液是一類能夠抵制外界加入少量酸和堿的影響，仍能維持 pH 值基本不變的溶液。該溶液的這種抗 pH 變化的作用稱為緩沖作用。緩沖溶液通常是由一或兩種化合物溶于溶劑（即純水）所得的溶液，溶液內(nèi)所溶解的溶質(zhì)（化合物）稱之為緩沖劑，調(diào)節(jié)緩沖劑的配比即可制得不同 pH 的緩沖液。 緩沖溶液的正確配制和 pH 值的準確測定，在生物化學的研究工作中有著極為重要的意義，因為在生物體內(nèi)進行的各種生物化學過程都是在精確的 pH 值下進行的，而且受到氫離子濃度的嚴格調(diào)控，能夠做到這一點是因為 生物體內(nèi)有完善的天然緩沖系統(tǒng)。生物體內(nèi)細胞的生長和活動需要一定的 pH 值，體內(nèi) pH 環(huán)境的任何改變都將引起與代謝有關(guān)的酸堿電離平衡移動，從而影響生物體內(nèi)細胞的活性。為了在實驗室條件下準確地模擬生物體內(nèi)的天然環(huán)境，就必須保持體外生物化學反應過程有體內(nèi)過程完全相同的 pH 值，此外，各種生化樣品的分離純化和分析鑒定，也必須選用合適的 pH 值，因此，在生物化學的各種研究工作中和生物技術(shù)的各種開發(fā)工作中，深刻地了解各種緩沖試劑的性質(zhì)，準確恰當?shù)剡x擇和配制各種緩沖溶液，精確地測定溶液的 pH 值，就是非常重要的基礎(chǔ)實驗工作。下表列 出某些人體體液的pH 值： 表 1— 3 人體體液 pH 體 液 pH 體 液 pH 血 清 ～ 大腸液 ～ 成人胃液 ～ 淚 ～ 唾 液 ～ 尿 ～ 胰 液 ～ 腦脊液 ～ 基本概念 ⑴ Br246。nstedLowry 酸堿理論（又稱酸堿質(zhì)子理論）。 1923 年由丹麥化學家 和英國化學家 同時提出了酸堿質(zhì)子學說，發(fā)展了酸堿理論，被后人稱為酸堿質(zhì)子理論或 Br246。nstedLowry 酸堿理論。他們認為凡能釋 １４放質(zhì)子的分子或離子（如： H2O， HCl， NH4+， HSO4— 等）稱為酸，凡能接受質(zhì)子的分子或離子（如： H2O， NH3， Cl— 等）稱為堿。因此，一種酸釋放質(zhì)子后即成為堿，稱為該酸的共軛堿，同樣一種堿與質(zhì)子結(jié)合后，形成對應的酸，稱為該堿的共軛酸。 A— H ＋ B— A ＋ B— H 酸 1 堿 2 堿 1 酸 2 酸 1 是 堿 1 的共軛酸， 堿 2 是 酸 2 的共軛堿。 如鹽酸在水中的解離： HCl Cl— ＋ H+ HCl 是酸， Cl— 是它的共軛堿。 ⑵ 緩沖體系的設(shè)計： 強電解質(zhì)溶于水幾乎全部解 離為正負離子，弱電解質(zhì)溶于水時，則不完全解離，只有部分的分子解離出正負離子，其馀以分子形式存在于溶液中。例如弱酸（ HA）及其鹽溶于水時，只有部分 HA 解離為 H+ 和 A— 離子，其平衡方程式如下： K1 HA A— ＋ H+ (11) K2 ][ ]][[ HAAHKa??? ∴ ][ ][][ ?? ? AHAKH a (12) (12)式兩邊取負對數(shù)： ][ ][lglg]lg [ HAAKH a?? ? ＋－－ (13) (13)式中： [HA] — 為弱酸的濃度 [H+] — 為 HA 解離出的氫離子濃度