【正文】 表 1— 1 常見有機(jī)液體的易燃性 名 稱 沸 點(diǎn) /℃ 閃 點(diǎn) ※ /℃ 自燃點(diǎn) ※※ /℃ 乙 醚 － 40 180 丙 酮 56 － 17 538 二硫化碳 46 － 30 100 苯 80 － 11 乙醇（ 95％） 78 12 400 ※ 閃點(diǎn)：液體表面的蒸汽和空氣的混合物在遇明火或火花時(shí)著火的最低溫度。 由上表可以看出：乙醚、二硫化碳、丙酮、和苯的閃點(diǎn)都很低，因此不得存于可能會(huì)產(chǎn)生電火花的普通冰箱內(nèi)。 預(yù)防火災(zāi)必須嚴(yán)格遵守以下操作規(guī)程： ⑴嚴(yán)禁在開口容器和密閉體系中用明火加熱有機(jī)溶劑，只能使用加熱套或水浴加熱。量少時(shí)用水稀釋后排入下水道。 ⑷在有明火的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上不允許放置開口的有機(jī)溶劑或傾倒有機(jī)溶劑。 ⑴容器中的易燃物著火時(shí)，用滅火毯蓋滅。 ⑵乙醇、丙酮等可溶于水的有機(jī)溶劑著火時(shí)可以用水滅火。 ⑶導(dǎo)線、電器和儀器著火時(shí)不能用水和二氧化碳滅火器滅火，應(yīng)先切斷電源，然后用 1211 滅火器（內(nèi)裝二氟一氯一溴甲烷）滅火。 爆炸 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室防止爆炸事故是極為重要的，因?yàn)橐坏┍ㄆ錃牧O大，后果將十分嚴(yán)重。 加熱時(shí)會(huì)發(fā)生爆炸的混合物有：有機(jī)化合物～氧化 銅、 濃硫酸～高錳酸鉀、 三氯甲烷～丙酮等。 ②在密閉的體系中進(jìn)行蒸餾、回流等加熱操作。 ④易燃易爆氣體大量逸入室內(nèi)。 表 1— 2 易燃物質(zhì)蒸汽在空氣中的爆炸極限 名 稱 爆炸極限（體積 百分?jǐn)?shù)） 名 稱 爆炸極限（體積百分?jǐn)?shù)） 乙醚 ～ 丙酮 ～ 13 甲醇 ～ 乙醇 ～ 19 氫氣 ～ 乙炔 ～ 82 中毒 生化實(shí)驗(yàn)室常見的化學(xué)致癌物有：石棉、砷化物、鉻酸鹽、溴乙錠等。 中毒的原因主要是由于不慎吸入、誤食或由皮膚滲入。 ②取用毒品時(shí)必須配戴橡皮手套。 ④不要用乙醇等有機(jī)溶劑擦洗濺灑在皮膚上的藥品。 ②吸入了毒氣，立即轉(zhuǎn)移室外，解開衣領(lǐng)，休克者應(yīng)施以人工呼吸，但不要用口對口法。 外傷 ⑴ 化學(xué)灼傷： ①眼睛灼傷或掉進(jìn)異物：眼內(nèi)若濺入任何化學(xué)藥品，應(yīng)立即用大量水沖洗十五分鐘，不可用稀酸或稀堿沖洗。若有木屑、塵粒等異物進(jìn)入，可由他人翻開眼瞼，用消毒棉簽輕輕取出或任其流淚，待異物排出后再滴幾滴魚肝油。 (b)堿灼傷：先用大量水沖洗，再用１％硼酸或２％醋酸浸洗，最后再用水洗。 ⑵燙傷：使用火焰、蒸汽、紅熱的玻璃和金屬時(shí)易發(fā)生燙傷，應(yīng)立即用大量水沖洗和浸泡，若起水泡不可挑破，包上紗布后就醫(yī)，輕度燙傷可涂抹魚肝油和燙傷膏等。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)準(zhǔn)備一個(gè)完備的小藥箱，專供急救時(shí)使用。 觸 電： 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室要使用大量的儀器 、烘箱和電爐等，因此每位實(shí)驗(yàn)人員都必須能熟練地安全用電，避免發(fā)生一切用電事故，當(dāng) 50HZ 的電流通過人體 25mA 電流時(shí)呼吸會(huì)發(fā)生困難，通過了 100mA 以上電流時(shí)則會(huì)致死。②電源裸露部分都應(yīng)絕緣。④先接好線路再插接電源，反之先關(guān)電源再拆線路。⑥如遇有人觸電要先切斷電源再救人。②三條相線要平均用電。 ④電爐、烘箱等電熱設(shè)備不可過夜使用。⑥電器、電線著火不可用泡沫滅火器滅火。 ⑴ 每位同學(xué)必須準(zhǔn)備一個(gè)實(shí)驗(yàn)記錄本，實(shí)驗(yàn)前認(rèn)真預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)，看懂實(shí)驗(yàn)原理和操作方法，在記錄本上寫好實(shí)驗(yàn)預(yù) ８ 習(xí)報(bào)告， 包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)操作步驟 (可以用流程圖 表示 )和數(shù)據(jù)記錄表格等。不得用鉛筆記錄，只能用鋼筆和園珠筆。同組的兩位同學(xué)合做同一實(shí)驗(yàn)時(shí)，兩人必須都有相同、完整的記錄。實(shí)驗(yàn)記錄必須公正客觀，不可夾雜主觀因素。 ⑸ 實(shí)驗(yàn)記錄要注意有效數(shù)字，如吸光度值應(yīng)為“ ”，而不能記成“ ”。 ⑹ 實(shí)驗(yàn)中要詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)條件，如使用的儀器型號、編號、生產(chǎn)廠等；生物材料的來源、形態(tài)特征、健康狀況、選用的組織及其重量等；試劑的規(guī)格、化學(xué)式、分子量、試劑的濃度等，都應(yīng)記錄清楚。 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)報(bào)告是實(shí)驗(yàn)的總結(jié)和匯報(bào)，通過實(shí)驗(yàn)報(bào)告的寫作可以 分析總結(jié)實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)和問題，學(xué)會(huì)處理各種實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的方法，加深對有關(guān)生物化學(xué)與分子生物學(xué)原理和實(shí)驗(yàn)技術(shù)的理解和掌握，同時(shí)也是學(xué)習(xí)撰寫科學(xué)研究論文的過程。 每個(gè)實(shí)驗(yàn)報(bào)告都要按照上述要求來寫，實(shí)驗(yàn)報(bào)告的寫作水平也是衡量學(xué)生實(shí)驗(yàn)成績的一個(gè)重要方面。寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告要用實(shí)驗(yàn)報(bào)告專用紙，以便教師批閱，不要用練習(xí)本和其他片頁紙。 實(shí)驗(yàn)報(bào)告使用的語言要簡明清楚，抓住關(guān)鍵，各種實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都要盡可能整理成表格并作圖表示之，以便比較，一目了然。實(shí)驗(yàn)點(diǎn)要使用專門設(shè)計(jì)的符號，如：○、●、□、■、?、?等，符號的大小要與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的誤差相符?！毙@點(diǎn)。通常橫軸是自變量，往往知道的很準(zhǔn)確，縱軸是應(yīng)變量，是測量的數(shù)據(jù)。兩條以上的曲線和符號應(yīng)有說明。 實(shí)驗(yàn)室基本操作 玻璃儀器的清洗 實(shí)驗(yàn)中所用的玻璃儀器清潔與否，直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，往往由於儀器的不清潔或被污染而造成較大的實(shí)驗(yàn)誤差，有時(shí)甚至?xí)?dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗。這是因?yàn)椋孩偕锘?學(xué)實(shí)驗(yàn)中蛋白質(zhì)、酶、核酸等往往都是以“毫克”和“微克”計(jì)的，稍有雜質(zhì)，影響就很大。 ⑴ 初用玻璃儀器的清洗 新購買的玻璃儀器表面常附著有游離的堿性物質(zhì)，可先用 ％的去污劑洗刷，再用自來水洗凈，然后浸泡在 1％～2％鹽酸溶液中過夜（不可少于四小時(shí)），再用自來水沖洗，最后用無離子水沖洗兩次，在 100℃～ 120℃烘箱內(nèi)烘干備用。清洗后器皿內(nèi)外不可掛有水珠，否則重洗，若重洗后仍掛有水珠，則需用洗液浸泡數(shù)小時(shí)后（或用去污粉擦洗），重新清洗。只能用洗液或 1％ ～ 2％的去污劑浸泡，然后用自來水沖洗，這時(shí)使用一支綢布包裹的小棒或棉花 球棒刷洗，效果會(huì)更好，清洗干凈的比色皿也應(yīng)內(nèi)外壁不掛水珠。第一次使用塑料器皿時(shí)，可先用 8mol/L尿素（用濃鹽酸調(diào) pH = 1）清洗，接著依次用無離子水、 1 mol/L KOH 和無離子水清洗，然后用 10— 3 mol/L EDTA 除去金屬離子的污染，最后用無離子水徹底清洗，以后每次使用時(shí)，可只用 ％的去污劑清洗，然后用自來水和無離子水洗凈即可。 ⑵ 稱取 5g 重鉻酸鉀粉末，置于 250mL 燒杯中，加 5mL 水使其溶解，然后慢慢加入 100mL 濃硫酸，溶液溫度將達(dá) 80℃，待其冷卻后貯存于磨口玻璃瓶內(nèi)。 ⑵ 5％草酸溶液：用數(shù)滴硫酸酸化，可洗去高錳酸鉀的痕跡 。 12H2O）溶液：可洗滌油污物。 ⑸ 5％～ 10％乙二胺四乙酸二鈉（ EDTANa2）溶液：加熱煮沸可洗脫玻璃儀器內(nèi)壁的白色沉淀物。 ⑺ 有機(jī)溶劑：如丙酮、乙醚、乙醇等可用于洗脫油脂、脂溶性染料污痕等，二甲苯可洗脫油漆的污垢。 玻璃和塑料器皿的干燥 ： 生化實(shí)驗(yàn)中用到的玻璃和塑料器皿經(jīng)常需要干燥，通常都是用烘箱或烘干機(jī)在 110℃～ 120℃進(jìn)行干燥，而不要用丙酮蕩洗再吹干的方法來干燥，因?yàn)槟菢訒?huì)有殘留的有機(jī)物覆蓋在器皿的內(nèi)表面，從而干擾生物化學(xué)反應(yīng)。 移液 準(zhǔn)確的分析方法對于生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)是極為重要的，在各種生物化學(xué)分析技術(shù) 中，首先要熟練掌握的就是準(zhǔn)確的移液技術(shù)。下圖列出了一些生化實(shí)驗(yàn)中常用的移液器具。滴管有長、短兩種，新出一種帶刻度和緩沖泡的滴管，可以比普通滴管更準(zhǔn)確地移液，并防止液體吸入滴頭。由于鉻酸洗液致癌，應(yīng)盡量避免使用。 吸管分為兩種，一種是無分度的，稱為胖肚吸管（圖 1－ 1 中 (F)），精確度較高，其相對誤差 A 級為 ％ ~ ％，B 級為 ％ ~ ％，液體自標(biāo)線流至口端（留有殘液）， A 級等待 15s， B 級等待 3s。吸、放溶液前要用吸水紙擦拭管尖。 圖 1－ 1 (I)是微量λ吸管，用于 1～ 500?l （ 1λ = 1?l）的移液，用吸水紙蘸出多吸的液體。 吸管吸取溶液最常用的是洗耳球（圖 1 中 (B)）。 還有一種“吸管泵”（圖 1－ 1 中 (D)）使用更為方便，插入吸管后，用拇指轉(zhuǎn)動(dòng)上部的小輪，即可使園柱形泵內(nèi)的柱塞上下移動(dòng)，將溶液吸入或排出吸管，尤其是在移取 10mL 以上的溶液時(shí)，用“吸管泵”最為方便。 1) ?L ～ 5?L 無存液微量進(jìn)樣器： 進(jìn)樣器的不銹鋼芯子直接通到針尖端處，不會(huì)出現(xiàn)存液，所以可用于 5?L以下的極微量液體進(jìn)樣。 ② 因?yàn)橛写嬉?，所以吸液時(shí)要來回多拉幾次，將針尖管內(nèi)的氣泡全部排盡。若 遇針尖管堵塞，不可用火燒，只能用φ 的不銹鋼絲耐心串通。 ⑤ 若進(jìn)樣器內(nèi)發(fā)黑，有不銹鋼氧化物，可用芯子蘸少量肥皂水，來回拉幾次即可除之。移液的準(zhǔn)確度（即容量誤差）為 177。 取液器可分為二種：一種是固定容量的，常用的有 100?l 、 200?L 和 1000?L 等幾種；另一種是可調(diào)容量的取液器，常用的有 200?L、 1000?L 和 5000?L 等多種規(guī)格。 可調(diào)式自動(dòng)取液器的操作方法是用拇指和食指旋轉(zhuǎn)取液器上部的旋鈕，使數(shù)字窗口出現(xiàn)所需容量體積的數(shù)字，在取液器下端插上一個(gè)塑料吸頭，并旋緊以保證氣密，然后四指并攏握住取液器上部，用拇指按住柱塞桿頂端的按鈕，向下按到第一停點(diǎn)，將取液器的吸頭插入待取的溶液中，緩慢松開按 鈕，吸上液體，并停留 1～ 2 秒鐘（粘性大的溶液可加長停留時(shí)間），將吸頭沿器壁滑出容器，用吸水紙擦去吸頭表面可能附著的液體，排液時(shí)吸頭接觸傾斜的器壁，先將按鈕按到第一停點(diǎn)，停留一秒鐘（粘性大的液體要加長停留時(shí)間），再按壓到第二停點(diǎn)，吹出吸頭尖部的剩余溶液，如果不便于用手取下吸頭，可按下除吸頭推桿，將吸頭推入廢物缸。 ② 為獲得較高的精度，吸頭需予先吸取一次樣品溶液 ，然后再正式移液，因?yàn)槲⊙宓鞍踪|(zhì)溶液或有機(jī)溶劑時(shí)，吸頭內(nèi)壁會(huì)殘留一層“液膜”，造成排液量偏小而產(chǎn)生誤差。④ 可用分析天平稱量所取純水的重量并進(jìn)行計(jì)算的方法，來校正取液器， 1mL 蒸餾水 20℃時(shí)重 。該溶液的這種抗 pH 變化的作用稱為緩沖作用。 緩沖溶液的正確配制和 pH 值的準(zhǔn)確測定，在生物化學(xué)的研究工作中有著極為重要的意義，因?yàn)樵谏矬w內(nèi)進(jìn)行的各種生物化學(xué)過程都是在精確的 pH 值下進(jìn)行的，而且受到氫離子濃度的嚴(yán)格調(diào)控，能夠做到這一點(diǎn)是因?yàn)?生物體內(nèi)有完善的天然緩沖系統(tǒng)。為了在實(shí)驗(yàn)室條件下準(zhǔn)確地模擬生物體內(nèi)的天然環(huán)境，就必須保持體外生物化學(xué)反應(yīng)過程有體內(nèi)過程完全相同的 pH 值，此外，各種生化樣品的分離純化和分析鑒定，也必須選用合適的 pH 值，因此，在生物化學(xué)的各種研究工作中和生物技術(shù)的各種開發(fā)工作中，深刻地了解各種緩沖試劑的性質(zhì)，準(zhǔn)確恰當(dāng)?shù)剡x擇和配制各種緩沖溶液，精確地測定溶液的 pH 值，就是非常重要的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)工作。nstedLowry 酸堿理論（又稱酸堿質(zhì)子理論）。nstedLowry 酸堿理論。因此，一種酸釋放質(zhì)子后即成為堿，稱為該酸的共軛堿，同樣一種堿與質(zhì)子結(jié)合后，形成對應(yīng)的酸，稱為該堿的共軛酸。 如鹽酸在水中的解離： HCl Cl— ＋ H+ HCl 是酸， Cl— 是它的共軛堿。例如弱酸（ HA）及其鹽溶于水時(shí)，只有部分 HA 解離為 H+ 和 A— 離子，其平衡方程式如下： K1 HA A— ＋ H+ (11) K2 ][ ]][[ HAAHKa??? ∴ ][ ][][ ?? ? AHAKH a (12) (12)式兩邊取負(fù)對數(shù)：