【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 crystallin）。 系統(tǒng)進(jìn)化樹分析 利用 Blastp工具對(duì)杧果 （ KJ459857）蛋白序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示：杧果與可可 （ Theobroma cacao ）相似性最高，為 82%，與紫花苜蓿（ Medicago sativa ）、棉花（ Gossypium hirsutum ）、 毛果楊（ Populus trichocarpa ）相似性為 80%，與擬南芥（ Arabidopsis thaliana ）相似性為 74%。進(jìn) 一步通過(guò) DNAman軟件將 GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已經(jīng)登錄的 17個(gè)物種的 HSP氨基酸序 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果顯示，杧果 （ KJ459857）與棉花親緣關(guān)系最近，與擬南芥最遠(yuǎn)（圖 3）。 圖 3 杧果 （ KJ459857）與其它物種 HSP蛋白的同源樹 Fig. 3 Homology tree analysis of （ KJ459857） proteins with other species 的組織表達(dá)特性分析 在杧果不同組織器官以及不同發(fā)育時(shí)期的果實(shí)中均有表達(dá)。在不同組織器官中， 在花和嫩葉中表達(dá)水平較高（圖 4）。 圖 4 在杧果不同組織的表達(dá) Fig. 4 Expression of in different ans of mango 2388 園 藝 學(xué) 報(bào) 41卷 在不同發(fā)育時(shí)期的果實(shí)中， 的表達(dá)水平在謝花后 10 d下降，在 20 d時(shí)表達(dá)水平最低， 而后開始逐漸上升，在謝花后 60 d時(shí)達(dá)到表達(dá)高峰，是謝花后 10 d的 ，其后又有所下降（圖 5）。 圖 5 在杧果不同發(fā)育時(shí)期果實(shí)中的表達(dá) Fig. 5 Expression of at different fruit developmental stages in mango 在逆境脅迫下的表達(dá)分析 為了探討杧果 在不同逆境脅迫下的表達(dá)水平，采用實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)對(duì) 在高溫脅迫、低溫脅迫、鹽脅迫和干早脅迫下的表達(dá)水平進(jìn)行分析。結(jié)果表明，高溫脅迫、低溫脅 迫、鹽脅迫和干早脅迫均誘導(dǎo)其表達(dá)，但表達(dá)水平存在差異（圖 6）。 44 ℃ 高溫處理，葉片中， 的表達(dá)水 平在處理后 2 h時(shí)急劇上升達(dá)到峰值，是處理前 樣品的 3倍，而后在 4 h時(shí)有所下降，但依然高于處理前樣品的表達(dá)水平，在 8 ~ 24 h之間維持較 高的水平，而后開始下降，在 48 h時(shí)為最低，在 72 h時(shí)又恢復(fù)到處理前類似的水平。莖中， 的表達(dá)水平從處理后 2 h就開始持續(xù)上升，在 24 h時(shí)達(dá)到峰值，是處理前的 ，在 48 h時(shí)下降， 在 72 h時(shí)又恢復(fù)到處理前類似的水平。 4 ℃ 低溫處理，葉片中，在處理后的 2 ~ 4 h和 24 ~ 72 h之間， 的表達(dá)水平高于處理 前，其表達(dá)最高峰出現(xiàn)在處理后的 72 h，是處理前樣品的 ，而在 8 ~ 12 h之間，表達(dá)水平與 處理前的表達(dá)水平類似。莖中，低溫處理后 的表達(dá)水平均高于處理前樣品，在處理后 2 h 時(shí)其表達(dá)水平就迅速上升，在 8 h時(shí)達(dá)到峰值，是處理前的 。 鹽處理，葉片中， 的表達(dá)水平在處理后 2 h時(shí)上升，是處理前的 ，在處理后的 4 ~ 24 h之間，維持與處理前相當(dāng)?shù)乃剑谔幚砗?48 h時(shí)，其表達(dá)水平又急劇上升達(dá)到峰值， 是處理前的 ，而后開始下降 ，在 72 h時(shí)恢復(fù)到處理前類似的水平。莖中， 在處理后 2 ~ 4 h時(shí)表達(dá)水平與處理前持平，而在 8 h時(shí)上升到處理前的 ，在 12 ~ 24 h之間， 其表達(dá)水平又恢復(fù)到處理前的水平，在 48 h時(shí)急速上升并達(dá)到峰值，是處理前的 ，而后下降， 在 72 h時(shí)恢復(fù)到處理前類似的水平。 干旱處理，葉片中， 的表達(dá)水平在處理后 4 h時(shí)開始下降，在 8 h時(shí)達(dá)到最低值，表 達(dá)水平只有處理前的一半，而在 12 h時(shí)表達(dá)水平開始上升，在 24 h時(shí)達(dá)到高峰，是處理前的 ， 而后開始下降，在 48 ~ 72 h之間維持與處理前類似的水平。莖中， 的表達(dá)水平在處理后 2 h時(shí)開始下降，在 8 h時(shí)最低，而后在 12 ~ 24 h之間開始逐漸上升，在 48 h時(shí)達(dá)到最高值，是處 理前的 ，在 72 h時(shí)又恢復(fù)到處理前類似的水平。 12期 CAN Van Toan等：杧果低分子量熱激蛋白基因 的克隆及表達(dá)分析 2389 圖 6 杧果 在不同逆境脅迫下的表達(dá)分析 Fig. 6 Expression of in leaves and stems of mango under different stress treatments 在脫落酸、雙氧水和水楊酸處理下的表達(dá)分析 脫落酸、雙氧水和水楊酸均誘導(dǎo) 表達(dá)（圖 7）。脫落酸處理后 h， 的 表達(dá)水平上調(diào)，在 2 h時(shí)達(dá)到峰值，是處理前的 ，而后其表達(dá)水平急速下降，在 8 h時(shí)，為 處理前的 90%，在 24 h時(shí)達(dá)到最 低值，而后又開始上升，在 48 h時(shí)達(dá)到第 2個(gè)表達(dá)高峰，是處理 前的 ，而后又有所下降，在 72 h時(shí)是處理前的 。 雙氧水處理 h， 的表達(dá)水平在處理后顯著上調(diào)而達(dá)到峰值，是處理前的 ， 在 1 ~ 2 h表達(dá)水平有所下降，但依然高于處理前的表達(dá)水平。在 2 h后，其表達(dá)水平迅速下降。在 8 ~ 48 h之間，維持較低的表達(dá)水平，最低值出現(xiàn)在處理后的 12 h，只有處理前的 ，而在 72 h 時(shí)表達(dá)水平又上升到處理前的 。 2390 園 藝 學(xué) 報(bào) 41卷 水楊酸處理， 的表達(dá)水平在處理后 h開始持續(xù)上升，在處理后 2 h時(shí)達(dá)到峰值， 是處理前的 ，而后開始逐漸下降，在 12 h時(shí)下降到最低值，而后在 24 h時(shí)表達(dá)水平開始有所 上升，在 72 h時(shí)恢復(fù)到處理前類似的水平。 圖 7 在脫落酸、雙氧水和水氧酸處理下的表達(dá)情況 Fig. 7 Expression of in leaves of mango under ABA， H2O2 and SA treatments 3 討論 研究表明低分子量熱激蛋白基因與植物的生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)，如種子發(fā)育、花粉發(fā)育以及果實(shí)發(fā)育 等（ Sun et al.， 2022； Reddy et al.， 2022）。擬南芥 在授粉后大量表達(dá)（ Sun et al.， 2022）。 Omar等（ 2022）研究發(fā)現(xiàn)， JcHSP1 的表達(dá)水平隨著麻風(fēng)樹種子的不斷發(fā)育而顯著上升。 Volkov 等（ 2022）對(duì) 12個(gè)煙草低分子量熱激蛋白基因表達(dá)分析顯示，這些基因在煙草花粉發(fā)育過(guò)程中均表 達(dá)。 Tao等（ 2022）在薺菜中發(fā)現(xiàn)了 8個(gè)分子量介于 ~ kD的熱激蛋白基因，表達(dá)特性分析 顯示，這些基因在營(yíng)養(yǎng)組織的根、葉和莖中不表達(dá)，而在生殖器官中特異表達(dá)。 Ye等（ 2022）研究 發(fā)現(xiàn)，水稻中的 和 在種子萌發(fā)、花器官以及胚乳中高表達(dá)。在本試驗(yàn)中， 在各個(gè)組織中均表達(dá)，其中在花和嫩葉中表達(dá)量較高。在果實(shí)發(fā)育過(guò)程 中，表現(xiàn)為早期 下降，中期持續(xù)上升，而后期下降的趨勢(shì)，在謝花后 60 d的果實(shí)中表達(dá)水平最高，這些數(shù)據(jù)說(shuō)明 可能參與調(diào)控杧果果實(shí)的發(fā)育。 低分子量熱激蛋白最典型的特點(diǎn)是受熱脅迫誘導(dǎo)。荷花在 42 ℃ 熱激后 1 h 表達(dá)水 平顯著上升（ Zhou et al.， 2022）。胡蘿卜在 40 ℃ 熱激 4 h后，熱激蛋白量開始積累，在處理后的 48 h內(nèi) 依然保持較高的表達(dá)水平（ Park et al.， 2022）。報(bào)春花在 42 ℃ 熱激處理 10 min 后 表達(dá)水平開始上升，在處理后的 ~ 2 h之間達(dá)到高峰（ Zhang et al.， 2022）。本研 究中， 44 ℃ 熱激 2 h后，在葉片和莖中 的表達(dá)水平均明顯上升，說(shuō)明 與杧 果抵御高溫脅迫有關(guān)。 低分子量熱激蛋白不僅受熱脅迫誘導(dǎo)，其他脅迫處理也誘導(dǎo)