酶的化學(xué)修飾前理論后例子(編輯修改稿)
2025-02-02 15:53 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 了一定的要求 。 ?（三）修飾劑反應(yīng)性的決定因素 ? 化學(xué)修飾前 ， 修飾劑是根據(jù)各自的特點 ， 選擇性地吸附在蛋白質(zhì)低或高極性區(qū)的 。 ? 如： D氨基酸氧化酶的 巰基 宜與 N烷基馬來酰亞胺的反應(yīng) ，因為巰基的 辛基化速度 比 乙基化速度 高 15倍 。 說明巰基處在非極性環(huán)境中 。 修飾劑先與蛋白質(zhì)的巰基疏水鍵合 ， 然后烷基化 。 ? 二硝基氟苯修飾牛血清白蛋白時 ， 二硝基氟苯先與其疏水鍵合 。 選擇吸附性； ? 靜電相互作用 ： ? 帶電的修飾劑能被選擇性地吸引到蛋白質(zhì)表面帶相反電荷的部位 。 ? 靜電相互作用可使修飾劑向多功能部位中的一個殘基定位 ， 或向雙功能基的一側(cè)定位 。 ? 位阻因素 ； ? 蛋白質(zhì)表面的位阻因素或者底物、輔因子、抑制劑所產(chǎn)生的位阻因素都可能阻止修飾劑與功能基的正常反應(yīng)。 ? 催化因素； ? 修飾部位附近的其他功能基，如果起一般的酸堿催化作用，也能影響修飾反應(yīng)。不同的修飾劑，其反應(yīng)速度和反應(yīng)部位有明顯差異。 ? 如對硝基苯乙酸鹽和苯乙酸鹽對胰凝乳蛋白酶的絲氨酸乙?；瘷C理相同，但后者反應(yīng)性差。 ? 局部環(huán)境的極性： ? 許多有機反應(yīng)的速度與 溶劑 的極性有關(guān)，而有些反應(yīng)則與極性無關(guān)。情況比較復(fù)雜。 了解酶的性質(zhì) 對酶的活性部位 、 酶的穩(wěn)定條件 、 酶反應(yīng)最適條件及酶的側(cè)鏈基團等到的了解 。 ?三、設(shè)計酶化學(xué)修飾的要點 ? 選擇修飾劑的類型 ? 修飾劑的分子量 、 鏈的長度 、 對蛋白質(zhì)的吸附性；修飾劑上反應(yīng)基團的數(shù)量和位置；修飾劑上反應(yīng)基團的活化方法與條件 。 ? 一般要求修飾劑具有較大分子量 、 良好的生物相容性和水溶性 、 修飾劑分子表面有較多的反應(yīng)活性基團及修飾后酶活的半衰期較長 。 ? 選擇修飾反應(yīng)的條件 ? 盡量少破壞酶活性功能的必需基團 。 反應(yīng)體系中酶與修飾劑的分子比例；反應(yīng)體系的溶劑性質(zhì) 、 鹽濃度和pH條件；反應(yīng)溫度及時間 。 四、常用的化學(xué)修飾劑 ① 糖及糖的衍生物 ： ? 主要有右旋糖酐、右旋糖酐硫酸酯、糖肽、葡聚糖凝膠、聚乳糖等。 ② 高分子多聚物 ： ? 聚乙二醇 (polyethylene glycol， PEG) ? 聚乙烯 (polyvinyl alcohol， PVA) ? 聚 N乙烯吡咯烷酮 (poly（ Nvinylpyrrolidone， PVP) ? 聚順丁烯二酸酐、聚丙烯酸 (polyacrylicacid， PAA) 。 ? ③ 生物大分子 ： 常用的有肝素、血漿蛋白質(zhì)、聚氨基酸類等。 ? ④ 雙功能試劑 ： 主要有戊二醛、二異硫氰酸、二胺類等。 ? ⑤ 其他 ： 常用的修飾劑還有某些固定化酶載體、糖基化試劑、甲基化試劑、乙基化試劑及某些小分子有機物等。 ? 酶的化學(xué)修飾基本原則 ： ? 充分利用修飾劑所具有的各類化學(xué)基團的特性， 直接 或經(jīng)過一定的活化 過程與酶分子中的某些 基團 或 輔因子 產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，對酶分子結(jié)構(gòu)進行改造。 五、化學(xué)修飾的措施 ? 酶分子中的可解離基團如氨基、羧基、羥基、巰基、咪唑基等，都是可以被修飾的基團。 修飾酶蛋白側(cè)鏈基團 ? （
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