chapter蛋白質ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-02 13:28 本頁面
【文章內容簡介】 ?然后，假定蛋白質分子中該成分只有一個分子或原子，據(jù)其百分含量可計算出最低相對分子質量： ?最低相對分子質量 ＝（已知成分的相對分子、原子質量） /已知成分的百分含量 ?如果蛋白質分子中所含已知成分不是一個單位，則真實相對分子質量等于最小相對分子質量的倍數(shù) 。 （超離心法） ?在 60 000～ 80 000r/min的超速離心力作用下，蛋白質分子會沿旋轉中心向外周方向移動 ?用光學方法 （依折射率變化） 測定界面移動的速度即為蛋白質的離心沉降速度 ?蛋白質的沉降速度與分子大小和形狀有關 ?沉降系數(shù) 是溶質顆粒在單位離心場中的沉降 速度 ，用 s表示。 ?一個 s單位，為 1 1013秒 ,用 S表示 ?相對分子質量越大， s值越大 ?蛋白質的沉降系數(shù)： 1～ 200S 由沉降系數(shù) s可根據(jù) 斯維得貝格 〔 Svedberg〕 方程 (P296)計算蛋白質分子的相對分子質量。 (原理見 P303) ?凝膠過濾所用介質為凝膠珠，其內部為 多孔網(wǎng)狀結構 。如交聯(lián)葡聚糖，商品名： Sephadex ?一定型號的凝膠網(wǎng)孔大小一定，只允許相應大小的分子進入凝膠顆粒內部，大分子則被排阻在外 ?洗脫時大分子隨洗脫液從顆粒間隙流下來，洗脫液體積小；小分子在顆粒網(wǎng)狀結構中穿來穿去，歷程長，后洗脫下來，洗脫體積大 ?只能測定 球形 pro，不能測定線形的或與凝膠能發(fā)生吸附作用的 pro 測得幾種標準分子量蛋白質的洗脫體積 〔 Ve〕 以相對分子質量對數(shù)（ logMr）對 Ve作圖，得出標準直線 再測出未知樣品洗脫體積〔 Ve〕 從標準曲線上可查出樣品蛋白質的相對分子質量 ?SDS:十二烷基硫酸鈉，變性劑 ?普通蛋白質電泳的泳動速率取決于荷質比（凈電荷、形狀、大小） ?用 SDS和巰基乙醇（打開二硫鍵）處理 ?蛋白質變性（肽鏈伸展）并與 SDS結合，形成 SDS蛋白質復合物 ?不同蛋白質分子的均帶負電（ SDS帶負電）；且荷質比相同（ 每 2分子 AA殘基結合 1分子 SDS） ?不同蛋白質分子具有相似的構象 （雪茄煙狀） ?用幾種標準蛋白質相對分子質量的對數(shù)值對它們的相對遷移率 （樣品遷移距離 /前沿染料遷移距離 ,μR ） 作圖 (lgMr=abμR) ?測出待測樣品的遷移率 ?從標準曲線上查出樣品的相對分子質量 ★ 影響遷移率的主要因素 ?凝膠的分子篩效應對長短不同的棒形分子會 產(chǎn) 生不同的阻力 〔 主要因素 〕 ?凝膠的濃度和交聯(lián)度 ?同一電泳條件下，分子小，受阻小，游動快，遷移率大。相對分子質量大者，遷移率小 ★ 優(yōu)點： 快速
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