chapter蛋白質(zhì)ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-02 13:28 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ?然后，假定蛋白質(zhì)分子中該成分只有一個(gè)分子或原子，據(jù)其百分含量可計(jì)算出最低相對(duì)分子質(zhì)量： ?最低相對(duì)分子質(zhì)量 ＝（已知成分的相對(duì)分子、原子質(zhì)量） /已知成分的百分含量 ?如果蛋白質(zhì)分子中所含已知成分不是一個(gè)單位，則真實(shí)相對(duì)分子質(zhì)量等于最小相對(duì)分子質(zhì)量的倍數(shù) 。 （超離心法） ?在 60 000～ 80 000r/min的超速離心力作用下，蛋白質(zhì)分子會(huì)沿旋轉(zhuǎn)中心向外周方向移動(dòng) ?用光學(xué)方法 （依折射率變化） 測(cè)定界面移動(dòng)的速度即為蛋白質(zhì)的離心沉降速度 ?蛋白質(zhì)的沉降速度與分子大小和形狀有關(guān) ?沉降系數(shù) 是溶質(zhì)顆粒在單位離心場(chǎng)中的沉降 速度 ，用 s表示。 ?一個(gè) s單位，為 1 1013秒 ,用 S表示 ?相對(duì)分子質(zhì)量越大， s值越大 ?蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)： 1～ 200S 由沉降系數(shù) s可根據(jù) 斯維得貝格 〔 Svedberg〕 方程 (P296)計(jì)算蛋白質(zhì)分子的相對(duì)分子質(zhì)量。 (原理見 P303) ?凝膠過(guò)濾所用介質(zhì)為凝膠珠，其內(nèi)部為 多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 。如交聯(lián)葡聚糖，商品名： Sephadex ?一定型號(hào)的凝膠網(wǎng)孔大小一定，只允許相應(yīng)大小的分子進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，大分子則被排阻在外 ?洗脫時(shí)大分子隨洗脫液從顆粒間隙流下來(lái)，洗脫液體積??；小分子在顆粒網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中穿來(lái)穿去，歷程長(zhǎng)，后洗脫下來(lái)，洗脫體積大 ?只能測(cè)定 球形 pro，不能測(cè)定線形的或與凝膠能發(fā)生吸附作用的 pro 測(cè)得幾種標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白質(zhì)的洗脫體積 〔 Ve〕 以相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)數(shù)（ logMr）對(duì) Ve作圖，得出標(biāo)準(zhǔn)直線 再測(cè)出未知樣品洗脫體積〔 Ve〕 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可查出樣品蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量 ?SDS:十二烷基硫酸鈉，變性劑 ?普通蛋白質(zhì)電泳的泳動(dòng)速率取決于荷質(zhì)比（凈電荷、形狀、大小） ?用 SDS和巰基乙醇（打開二硫鍵）處理 ?蛋白質(zhì)變性（肽鏈伸展）并與 SDS結(jié)合，形成 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物 ?不同蛋白質(zhì)分子的均帶負(fù)電（ SDS帶負(fù)電）；且荷質(zhì)比相同（ 每 2分子 AA殘基結(jié)合 1分子 SDS） ?不同蛋白質(zhì)分子具有相似的構(gòu)象 （雪茄煙狀） ?用幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)值對(duì)它們的相對(duì)遷移率 （樣品遷移距離 /前沿染料遷移距離 ,μR ） 作圖 (lgMr=abμR) ?測(cè)出待測(cè)樣品的遷移率 ?從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品的相對(duì)分子質(zhì)量 ★ 影響遷移率的主要因素 ?凝膠的分子篩效應(yīng)對(duì)長(zhǎng)短不同的棒形分子會(huì) 產(chǎn) 生不同的阻力 〔 主要因素 〕 ?凝膠的濃度和交聯(lián)度 ?同一電泳條件下，分子小，受阻小，游動(dòng)快，遷移率大。相對(duì)分子質(zhì)量大者，遷移率小 ★ 優(yōu)點(diǎn)： 快速
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1