酶的分子修飾backgrou(編輯修改稿)
2025-02-02 08:57 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ent + 40 kiloDaltons (2 x 20) ( ( n ( ( n IFN 19 kiloDaltons = potential reactive site PegIFN a2a blood levels do not fluctuate Time (hours) 0 2 4 6 8 10 12 14 0 24 48 72 96 120 144 Interferon (U/mL) Tues Wed Thur Fri Sat Sun Mon Periods of time when IFN is not in circulation 40 kDa branched peginterferon alfa2a (ng/mL) 0 5 10 15 20 25 30 0 24 48 72 96 120 144 168 Time (hours) after injection Tue Wed Thu Fri Sat Sun Mon ?粒細(xì)胞集落刺激因子（ GCSF） 用于治療中性粒細(xì)胞減少癥 美國 Amgen公司研制的 PEG修飾長效 GCSF，是在重組人GCSF的 N端 Met殘基上共價(jià)結(jié)合了 20kD的 PEG，于 2022年1月獲 FDA批準(zhǔn) 酶 半衰期 天然 SOD 6min 右旋糖苷－ SOD 7hr Ficoll（低分子量）－ SOD 14hr Ficoll（高分子量）－ SOD 24hr PEG－ SOD 35hr 天然 SOD與修飾 SOD在血漿中的半衰期 Characterization of the PEGylated proteins. (A) SDS – PAGE characterization of PEGylated human PAH, MOLECULAR THERAPY Vol. 9, No. 1, January 2022， 124－ 129 Lysozyme – Poly(PEGMA)NHS Conjugation + DMSO / NEt3 kDa Lysozyme (reference) Bioconjugate 57 polymeric chains attached Protein Markers 15% Crosslinked Gel SDS PAGE 16 17 18 19 20 21ti m e / m i n l yso zym e P o l y(PE G ) N H SLysozyme – Poly(PEGMA)NHS Conjugation Column: BioSep SECS3000 Flow rate: mL / min Mobile Phase : % TFA (v/v) solution in H20 / MeCN (69/31) UV detection @ 215 nm 主要用于側(cè)鏈基團(tuán)的修飾 ?羧基的修飾 碳二亞胺 o 三硝基苯磺酸（ TNBS） 與 Lys反應(yīng)在 420nm和 367nm能產(chǎn)生特定的光吸收 o 磷酸吡哆醛（ PLP） Lys的專一性修飾劑， 325nm有最大吸收，可用于定量 ?氨基的修飾 主要對(duì) Lys的 ε –氨基 chemical crosslinking of side chains ?Arg胍基的修飾 丁二酮 、 1,2環(huán)己二酮 、苯乙二醛等具有兩個(gè)臨位羰基的試劑 ?巰基的修飾 主要是烷基化試劑和還原劑 碘乙酸 馬來酰亞胺 對(duì)氯汞苯甲酸 DTT 巰基乙醇 Conjugation to cysteine residues ?His咪唑的修飾 焦碳酸二乙酯 ?Trp吲哚基的修飾 Trp一般位于分子內(nèi)部，反應(yīng)性差 N溴代琥珀酰亞胺 4硝基苯硫氯 ?胰凝乳蛋白酶上羧基經(jīng)碳二亞胺活化后 ， 可與一系列二胺作用 。 結(jié)果發(fā)現(xiàn) ， 用 1,4—二氨基丁烷交聯(lián)該酶 ， 可得到穩(wěn)定性有所改善的酶制劑 酶分子內(nèi)部兩個(gè)側(cè)鏈基團(tuán)反應(yīng)， 增加酶分子表面交聯(lián)鍵的數(shù)目是穩(wěn)定酶的方法之一。 ?Clain 和 Navia首次證實(shí)了利用交聯(lián)酶晶體 (Crosslinked enzyme crystal,CLEC)技
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