酶的分子修飾backgrou-免費閱讀
【正文】 fragment and a 3180。 ?Clain 和 Navia首次證實了利用交聯(lián)酶晶體 (Crosslinked enzyme crystal,CLEC)技術提高了嗜熱菌蛋白酶的生物活性 ,增加了其熱穩(wěn)定性。最近報告表明，已經(jīng)成功地由大腸桿菌生產(chǎn)具有完整功能的重組抗體片段，而且用同一種微生物既能生產(chǎn)目的蛋白又生產(chǎn)其抗體的可能性。 C EXTENSION 72176。 有些來自嗜熱菌的酶具有較高穩(wěn)定性 ， 其原因正是由于保護性大分子 (如肽和聚胺 )發(fā)揮作用的結果 。 (4)探索酶的作用機理和催化反應歷程。酶的分子修飾 Enzyme modification 通過主鏈的 “ 切割 ” 、 “ 剪接 ” 和側鏈基團的 “ 化學修飾 ” ,以改變其結構、性質(zhì)及生物活性等 .這種應用化學方法對酶分子施行種種 “ 手術 ” 的技術 或在體外將酶分子通過人工的方法與一些化學基團 (物質(zhì) )，特別是具有生物相容性的 物質(zhì) ， 進行共價連接 ， 從而改變酶的結構和性質(zhì) 。 (5)探索酶分子的拓撲學及寡聚酶的亞基結合狀態(tài)。 酶的多聚體或酶聚合體的活力和穩(wěn)定性比單體高就是這個原因 。 C 2535 CYCLES DENATURATION 93176。 ?在醫(yī)學上要解決酶 —抗體復合物在體內(nèi)的抗原性。 ?枯草桿菌蛋白酶經(jīng)預處理 ,凍干形成交聯(lián)酶晶體 ,在有機溶劑和水溶液中的穩(wěn)定性大大增加 ,活力可提高 13倍 ?利用葡聚糖二乙醛將青霉素Ｇ酰化酶進行交聯(lián) ,使其在55℃ 下的半衰期提高 9倍 ,而Ｖｍａｘ保持不變 用雙功能或多功能試劑使不同的酶交聯(lián)起來產(chǎn)生雜化酶 。 fragment that overlap and each have the mutation。 ? Amplify a 5180。 結果發(fā)現(xiàn) ， 用 1,4—二氨基丁烷交聯(lián)該酶 ， 可得到穩(wěn)定性有所改善的酶制劑 酶分子內(nèi)部兩個側鏈基團反應， 增加酶分子表面交聯(lián)鍵的數(shù)目是穩(wěn)定酶的方法之一。 缺點： ?制備抗體花費較多，解決的辦法是用微生物來生產(chǎn)。 C 65176。 主要是二價離子的置換修飾 置換修飾過程 酶液中加入 EDTA 透析或超濾 加入金屬離子 置換修飾酶 等價同荷置換 置換修飾的要點 舉例 ?蛋白酶（ Zn2＋ ） 蛋白酶（ Ca2＋ ），活力提高 ? α 淀粉酶 （雜離子型） Ca2＋ 型，活力增加，穩(wěn)定性增加 ?大分子的非共價修飾 ?大分子的共價修飾 ?大分子的非共價修飾 ?非蛋白質(zhì)修飾物 多元醇、多糖、多聚氨基酸、多胺 如聚乙二醇、右旋糖苷等 能與酶非共價地相互作用而有效地保護酶 ， 既能通過氫鍵固定在酶分子表面 ， 也能通氫鍵有效地與外部水相連 ， 通過調(diào)節(jié)酶的微環(huán)境 ， 保護酶的活力 。 (3)測定酶蛋白部分區(qū)域的構象狀態(tài)。 酶分子修飾的概念 生物體中存在的酶分子修飾 ?酶原激活 ?共價修飾 Proteolytic Zymogen Activation. 酶原激活 酶分子中的某些基團在其他酶的催化下 ， 可共價結合或脫去 ，引起酶分子構象改變而調(diào)節(jié)其活性 ， 此類酶稱為共價修飾調(diào)節(jié)酶 。 (6)研究酶的固定化技術。 用抗體來穩(wěn)定酶 。 C 95176。目前采用降低抗體分子的大小制造嵌合抗體 ?大分子的共價修飾 用可溶性大分子，如聚乙二醇、右旋糖苷、肝素等，通過共價鍵連接于酶分子的表面，形成一層覆蓋層 ?聚乙二醇修飾超氧物歧化酶 (SOD)， 不僅可以降低或消除酶的抗原性 ， 而且提高了抗蛋白酶的能力 ， 延長了酶在體內(nèi)的半衰期 ， 從而提高了酶藥效 。 例如用戊二醛將胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶交聯(lián)在一起 。 ? Use these products in another reaction to produce the fulllength mutated DNA. PCR mutagenesis overlap extension SP6 primer forward mutagenic primer reverse mutagenic primer T7 primer X x x x Two separate 1st PCRs remove primers, denature and reanneal 2nd PCR “If a bio
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1