酶的分子修飾backgrou(完整版)
【正文】 開(kāi)始伸展的部位或被蛋白酶水解的部位起作用 ， 因而起到穩(wěn)定作用 。 C DENATURATION 93176。 ?日本學(xué)者將聚乙二醇連到脂肪酶 、 胰凝乳蛋白酶上所得產(chǎn)物溶于有機(jī)溶劑 ， 在有機(jī)溶劑存在下能夠有效地起作用 。 這種雜化酶的優(yōu)點(diǎn)是 ， 胰凝乳蛋白 酶的自溶作用降低 。n t (hours) 100 20 40 powder W/O O C O ( C H 2 ) 2 C O P E G NH P r tETwophases transgalactosilation ROH Gal OR Organic phase EE: ?galactosidase Glu Aqueous phase EGal?1,4Glu (lactose) conversi243。如 Ala取代，穩(wěn)定性增加 (增加蛋白質(zhì)內(nèi)部疏水性 ) ThreeDimensional Structure of T4 Lysozyme Location of new disulfide bonds in T4 lysozyme Introduction of disulfide bonds must be formed in the context of a structure. Only a limited number of locations in a protein can accept two cysteine residues in an orientation that can accept the SS bond without generating conformational strain (software now exists which can help in this choice). In principle, the larger the loop the greater the reduction in the entropy of the unfolded state. ?Lys取代葡萄糖脫氫酶的 Ser231，突變體在 55℃ 的半衰期比天然酶高 8倍，活力相當(dāng) (酶表面親水化 ) ?枯草桿菌蛋白酶的 Cys取代 Met222催化速度增加 2倍；用 Ala、 Ser 或Leu取代 Met222，酶可以抵抗高達(dá) 1mol/L H2O2的氧化失活 (抗氧化失活 ) ?三糖磷酸異構(gòu)酶的 Asn144用 Thr取代， Asn78用 Ile取代，突變酶在100℃ 的穩(wěn)定性比天然酶高 2倍；枯草桿菌 α 淀粉酶 Asn190用 Ala取代，在 80℃ 的半衰期增加 6倍 (Asn脫酰胺失活 ) PCR定點(diǎn)突變 (PCR mutagenesis) ? Introduces sequence changes into (cloned) DNA fragments。 PEG: HOCH2CH2(OCH2CH2)nCH2CH2OH OC O(C H 2 ) 2 C OO NOOPEGNH2Prt O C O ( C H 2 ) 2 C O P E G NH P r t[NH + ] R 2R 1R 1OC OOC OH O H2C( C H O H )4C ON H+EPEG binds 23 water molecules per repeat unit PEG/water ‘shield’ can reduce activity of protein, but generally the increased circulation time makes up for this ?重組白介素（ rIL2）用大分子 PEG修飾后，半衰期延長(zhǎng) 10倍 ?腺苷脫氨酶（ ADA） 用于治療聯(lián)合免疫缺陷 PEG修飾的 ADA在體內(nèi)的半衰期從數(shù)分鐘延長(zhǎng)到 24小 時(shí)，免疫原性降低 1990年美國(guó)食品和藥品管理局（ FDA）批準(zhǔn)用于聯(lián)合免疫缺陷的治療 ?天冬酰胺酶（ ASP） 用于白血病的治療 PEG修飾后半衰期從 24小時(shí)增加到 357小時(shí) FDA1994年批準(zhǔn)用于急性淋巴細(xì)胞性白血病治療 ?IFNα –2a PEG修飾后療效增加 FDA已批準(zhǔn)正式生產(chǎn)，如 Roche公司的 PEGASYSTM PegInterferon2a Pegasys174。 C 優(yōu)點(diǎn)： ?抗體制備簡(jiǎn)單
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