酶的分子修飾backgrou(已改無錯字)
2023-02-06 08:57:28 本頁面
【正文】 術(shù)提高了嗜熱菌蛋白酶的生物活性 ,增加了其熱穩(wěn)定性。 ?枯草桿菌蛋白酶經(jīng)預(yù)處理 ,凍干形成交聯(lián)酶晶體 ,在有機溶劑和水溶液中的穩(wěn)定性大大增加 ,活力可提高 13倍 ?利用葡聚糖二乙醛將青霉素Ｇ?；高M行交聯(lián) ,使其在55℃ 下的半衰期提高 9倍 ,而Ｖｍａｘ保持不變 用雙功能或多功能試劑使不同的酶交聯(lián)起來產(chǎn)生雜化酶 。 例如用戊二醛將胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶交聯(lián)在一起 。 這種雜化酶的優(yōu)點是 ， 胰凝乳蛋白 酶的自溶作用降低 。 ?化學(xué)方法 難度大，很少有使用 Mutagenesis:Why Mutate? Native proteins are not well suited for industrial application Native proteins are not optimized for medicinal purposes ?Increase the efficiency of enzymecatalyzed reactions ?Eliminate the need for cofactor in enzymatic reaction ?Change substrate binding site to increase specificity ?Change the thermal tolerance ?Change the pH stability ?Increase proteins resistance to proteases (purification) ?Signal sequences – secretion ?rare codon changes 工程二硫鍵 增加蛋白質(zhì)內(nèi)部疏水性 酶表面親水化 抗氧化失活 Asn脫酰胺失活 定點突變技術(shù)（ sitedirected mutagenesis) ?1990年 Goodson將干擾素的 Thr3替換為 Cys3，并通過PEG修飾，水溶性增加，半衰期延長 (工程二硫鍵 ) ?噬菌體 T4溶菌酶 Ile3突變?yōu)?Cys3，使與 Cys97形成二硫鍵，催化活性不變，但熱穩(wěn)定性顯著提高 (工程二硫鍵 ) ?xylanase(工程二硫鍵 ) used to treat wood pulp in paper production needs to function at high temp ?Glu49位于色氨酸合成酶的疏水核心部分。如 Ala取代，穩(wěn)定性增加 (增加蛋白質(zhì)內(nèi)部疏水性 ) ThreeDimensional Structure of T4 Lysozyme Location of new disulfide bonds in T4 lysozyme Introduction of disulfide bonds must be formed in the context of a structure. Only a limited number of locations in a protein can accept two cysteine residues in an orientation that can accept the SS bond without generating conformational strain (software now exists which can help in this choice). In principle, the larger the loop the greater the reduction in the entropy of the unfolded state. ?Lys取代葡萄糖脫氫酶的 Ser231，突變體在 55℃ 的半衰期比天然酶高 8倍，活力相當(dāng) (酶表面親水化 ) ?枯草桿菌蛋白酶的 Cys取代 Met222催化速度增加 2倍；用 Ala、 Ser 或Leu取代 Met222，酶可以抵抗高達(dá) 1mol/L H2O2的氧化失活 (抗氧化失活 ) ?三糖磷酸異構(gòu)酶的 Asn144用 Thr取代， Asn78用 Ile取代，突變酶在100℃ 的穩(wěn)定性比天然酶高 2倍；枯草桿菌 α 淀粉酶 Asn190用 Ala取代，在 80℃ 的半衰期增加 6倍 (Asn脫酰胺失活 ) PCR定點突變 (PCR mutagenesis) ? Introduces sequence changes into (cloned) DNA fragments。 ? Overlap extension method requir
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