酶的分子修飾backgrou(更新版)
【正文】 任何一種酶都有它相對(duì)應(yīng)的抗體 ， 制備亦較簡(jiǎn)單 、 迅速 。 ?抗體保護(hù)的酶還有抗氧化酶 、 抗有機(jī)溶劑 、 抗低pH、 抗自溶 、 抗蛋白酶等作用 。 ② 增強(qiáng)在不良環(huán)境 (非生理?xiàng)l件 )中的穩(wěn)定性 。 . 酶分子修飾的目的 基礎(chǔ)酶學(xué)的研究和疾病治療 醫(yī)療用酶的要求 穩(wěn)定性高 純度高 無(wú)免疫原性 基礎(chǔ)酶學(xué)研究上 (1)探測(cè)酶活性必需氨基酸的性質(zhì)和數(shù)目。 磷酸化 /去磷酸化是是高等動(dòng)植物酶化學(xué)修飾的主要形式 細(xì)菌主要是核苷?；问健? ① 提高酶活性 。 ?蛋白質(zhì)類修飾物 ?α 淀粉酶與其抗體的復(fù)合物在 70℃ 半衰期為 16h，而天然酶僅為 5min。 C 95176。 ?嗜熱菌蛋白酶在水介質(zhì)中通常催化肽鏈斷裂 ， 但用聚乙二醇共價(jià)修飾后 ， 其催化活性顯著改變 ， 在有機(jī)溶劑中催化肽鍵合成 ， 已用于制造合成甜味劑 。 ?化學(xué)方法 難度大，很少有使用 Mutagenesis:Why Mutate? Native proteins are not well suited for industrial application Native proteins are not optimized for medicinal purposes ?Increase the efficiency of enzymecatalyzed reactions ?Eliminate the need for cofactor in enzymatic reaction ?Change substrate binding site to increase specificity ?Change the thermal tolerance ?Change the pH stability ?Increase proteins resistance to proteases (purification) ?Signal sequences – secretion ?rare codon changes 工程二硫鍵 增加蛋白質(zhì)內(nèi)部疏水性 酶表面親水化 抗氧化失活 Asn脫酰胺失活 定點(diǎn)突變技術(shù)（ sitedirected mutagenesis) ?1990年 Goodson將干擾素的 Thr3替換為 Cys3，并通過(guò)PEG修飾，水溶性增加，半衰期延長(zhǎng) (工程二硫鍵 ) ?噬菌體 T4溶菌酶 Ile3突變?yōu)?Cys3，使與 Cys97形成二硫鍵，催化活性不變，但熱穩(wěn)定性顯著提高 (工程二硫鍵 ) ?xylanase(工程二硫鍵 ) used to treat wood pulp in paper production needs to function at high temp ?Glu49位于色氨酸合成酶的疏水核心部分。nt ( dias )2 4 6 8Gal ORROHER OHGal ORETwophases transgalactosilation ? Chemical modifications (in vitro engineering) ? One of the first way and a reemerged method for altering protein properties. ? Polyethylene glycol (PEG) modification of protein surface amino groups reduces immunoreactivity, prolongs clearance times, improve biostability, increase the solubility and activity of enzymes in anic solvents. ? (DeSantis, G. and Jones, . (1999) “Chemical modification of enzymes for enhanced functionality”, Current Opinion in Biotechnology, 10(4):324330) Some chemical modifications that may stabilize proteins Polyethylene glycol (PEG) modification of proteins Cyanuric chloride pnitrophenyl chloroformate
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