【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 機(jī)體內(nèi)外存在著多種多樣的微生物，這些微生物整體看來(lái)就是一條復(fù)雜有序的食物鏈，它們彼此依賴、和睦共生，組成一個(gè)具有非常強(qiáng)的自我調(diào)節(jié)能力的微生態(tài)系統(tǒng) [22]。 適于微生態(tài)制劑菌種的特點(diǎn) 微生態(tài)制劑的菌種的選擇十分重要 ,理想的益生菌菌株應(yīng)具有以下幾個(gè)特點(diǎn) :(1)能與宿主共生且對(duì)宿主無(wú)害 ,無(wú)致病性、沒(méi)有毒副作用 ,不和病原菌雜合； (2)可以在 pH 值煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 6 較低的無(wú)機(jī)酸、有機(jī)酸及膽汁酸中生存 ,且可以黏附在腸粘膜上； (3)發(fā)酵過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生乳酸、過(guò)氧化氫等其他抗菌物質(zhì)； (4)在體內(nèi)易繁殖 , 能產(chǎn)生抗生素類的物質(zhì) ,有較高的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì) ,進(jìn)而阻止致病菌的定植與增殖 [23]； (5)源于正?；盍^高的動(dòng)物自身的菌株最佳 ,使其能夠較高程度地發(fā)揮有益功能等。能夠直接投放于養(yǎng)殖水域 ,來(lái)改進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)環(huán)境、從而促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)繁殖的菌種制劑選用的菌株可以不是來(lái)源于機(jī)體自身菌類 ,但必須是正常水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)水域中的固有菌株 ,優(yōu)勢(shì)菌群最佳 ,如光合細(xì)菌、硝 化細(xì)菌等 [24]； (6)易于與其他菌株聯(lián)合，增強(qiáng)促長(zhǎng)作用；（ 7）能夠工業(yè)化生產(chǎn) ,加工處理后能夠保持足夠的菌數(shù)與活力 ,且穩(wěn)定性好。 微生態(tài)制劑的常用施用方式及其注意事項(xiàng) 作為餌料添加劑 作為飼料添加劑，動(dòng)物在吸食過(guò)程中連同添加劑一起食入體內(nèi)而產(chǎn)生作用。目前應(yīng)用這類方法的較多，此法具有應(yīng)用簡(jiǎn)便、省時(shí)省力、效果明顯等特點(diǎn)。而此法對(duì)微生態(tài)制劑有效成分的耐受性和穩(wěn)定性要求較高，在餌料制粒和投喂過(guò)程中需保有一定的生理活性，才能產(chǎn)生一定的積極作用。也可將制劑與飼料分開(kāi)包裝，在投喂時(shí)將餌料和制劑混合，這 樣可防止制粒過(guò)程對(duì)菌種的破壞。但操作不便，對(duì)配比的控制不夠精確，而且所需劑量較大。 Rengpipat 等 [25]在試驗(yàn)中使用微生態(tài)制劑 (1012cfu/g)與飼料的比重達(dá) 3∶1。若能利用基因工程等技術(shù)得到耐受性較強(qiáng)的菌種，可降低在餌料制粒過(guò)程中益生菌的破壞問(wèn)題。應(yīng)注意的是，對(duì)于不同生長(zhǎng)階段的水產(chǎn)動(dòng)物，應(yīng)使用不同添加劑量的餌料。飼喂過(guò)程中，餌料要小心保存，以免變質(zhì)達(dá)不到應(yīng)有的效果。 注射或浸浴生物體 用微生態(tài)制劑直接接觸動(dòng)物，短期內(nèi)就可以刺激動(dòng)物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生作用。體型小的動(dòng)物常選用浸浴的方法，這種方 法應(yīng)注意使用濃度與劑量，適宜的劑量才能最大限度地提高動(dòng)物的免疫機(jī)制，而注射的方法則適合于體型較大的動(dòng)物。應(yīng)當(dāng)注意的是注射容易給動(dòng)物造成傷害，增大感染機(jī)會(huì)。 Austin 等用不同濃度的溶藻膠弧菌分別用注射和浸浴的方法來(lái)處理大西洋鮭，使得殺鮭氣單胞菌對(duì)鮭的感染率大幅度下降 [26]。 直接加入水域 將微生態(tài)制劑直接投入養(yǎng)殖水域，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)環(huán)境產(chǎn)生作用，從而間接提高水產(chǎn)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)健康狀態(tài)。但在使用過(guò)程中，需注意水體環(huán)境能否滿足益生菌生存和繁殖的條件，投喂菌種應(yīng)根據(jù)水體的酸堿性以及其他理化性質(zhì)而確定?？?生素及其他合成藥煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 7 物可以妨礙細(xì)胞壁及細(xì)胞蛋白的生成 ,具有破壞外膜的功能。因此需特別注意不能與消毒劑、抗生素等化學(xué)物質(zhì)同時(shí)使用，否則菌種將難以存活或發(fā)揮作用。同時(shí)應(yīng)注意施用的周期和菌體活力及菌體數(shù)量。投入水體的菌種一定周期后會(huì)逐漸死亡減少 ,故需在飼養(yǎng)過(guò)程當(dāng)中按照一定周期定量投入 ,使益生菌在水環(huán)境中形成優(yōu)勢(shì)菌群 ,發(fā)揮最大效果；換水也會(huì)減少菌體數(shù)量，因此應(yīng)減少換水次數(shù)，換水后需補(bǔ)充菌量的不足 [27]。 煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 8 2 不同類型微生態(tài)制劑在水產(chǎn)動(dòng)物中的應(yīng)用 主要益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用 光合細(xì)菌 光合細(xì)菌 （ Photosynthetic bacteria， PSB）是水域環(huán)境中廣泛生存、具備原始光合系統(tǒng)、用于微生態(tài)制劑生產(chǎn)最多的一類細(xì)菌。光合細(xì)菌為革蘭氏陰性菌，有硫顆粒，具有光合色素，是一種用光作為能量來(lái)源、在厭氧光照或好氧黑暗條件下吸收生長(zhǎng)環(huán)境中的有機(jī)物、含硫物、含氮物等作為物質(zhì)來(lái)源進(jìn)行光合生長(zhǎng)代謝的菌類。光合細(xì)菌在自然界中普遍存在，主要生存在水體環(huán)境中光線范圍內(nèi)的缺氧區(qū)。其特殊的生長(zhǎng)性能及其生理功能使光合細(xì)菌具有作為水產(chǎn)動(dòng)物飼料、水質(zhì)改良、疾病預(yù)防等功能。它的許多生理特性，使其在生態(tài)系統(tǒng)中占據(jù)非常重要的地位 。 光合細(xì)菌分為 3 個(gè)科：紅螺菌科（ Rhodospirillaceae）和綠菌科（ Chlorobacteriaceae）、著色菌科（ Chromatiaceae），共 18 個(gè)屬 [28]。光合細(xì)菌生長(zhǎng)性能極強(qiáng)，生長(zhǎng)繁殖速度較快，還可以忍受條件惡劣的生長(zhǎng)環(huán)境，對(duì)氰、酚等有害物有一定的分解轉(zhuǎn)化能力，可以分解吸收水環(huán)境的亞硝酸鹽、含硫物、重金屬離子等有毒成分，從而減少固體有機(jī)物及有毒成分的積累，實(shí)現(xiàn)水質(zhì)的凈化，水體環(huán)境的改善；同時(shí)光合細(xì)菌細(xì)胞自身含有大量的營(yíng)養(yǎng)成分，其菌體脫水后竟含有 60%以上的氨基酸及蛋白，還有豐富的 B 族維生素、類胡蘿卜素、輔酶 Q、泛酸、葉酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及活性成分，這些營(yíng)養(yǎng)成分及活性成分可以促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的免疫應(yīng)答能力，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)，因而被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖。 1998年光合細(xì)菌被農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)為新型微生物飼料添加劑。用于水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖的光合細(xì)菌主要有光能異養(yǎng)型紅螺菌科 (Rhodospirillaceae)中的部分菌種，如沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudanonas palustris)。 孫艦軍等 [29]將光合細(xì)菌加入餌料中投喂中國(guó)對(duì)蝦 22 天后發(fā)現(xiàn) ,細(xì)胞數(shù)目、 PO、抑菌能力和抗菌活力分別比對(duì)照組提高 %、 %、 %、 %和 %。薛德林等 [30]選取光合細(xì)菌 N9281 在水池養(yǎng)魚(yú)中進(jìn)行研究 ,用對(duì)照的方法在東北的兩個(gè)養(yǎng)殖基地采用兩組情況相近的魚(yú)塘進(jìn)行試驗(yàn) ,放養(yǎng)鰱鳙魚(yú)和鯉魚(yú) ,兩組放養(yǎng)的魚(yú)苗種類、密度、規(guī)格、配比和時(shí)間相同 ,相同條件下養(yǎng)殖一個(gè)月后 ,在試驗(yàn)池施灑光合細(xì)菌菌液 ,一個(gè)月后再施灑一次 ,對(duì)照池不施灑 ,其他條件相同。結(jié)果顯示，培育繁殖的輪蟲(chóng)數(shù)目提高 218 到 1911倍 ,浮游植物數(shù)目提高 512 倍 ,幼苗成活率及產(chǎn)量各提升 314%到 2516%和 817%。表明細(xì)菌N9281 有利于隱藻類浮游生 物的生長(zhǎng) ,直接或間接促進(jìn)了魚(yú)苗的生長(zhǎng)發(fā)育。趙亮等 [31]試驗(yàn) ,將光合細(xì)菌制劑投入人造半海水河蟹獨(dú)立養(yǎng)殖繁育體系中 ,氣單胞菌數(shù)目降低 %,弧煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 9 菌數(shù)目下降 %,硝化細(xì)菌數(shù)目提升了 5 倍。 芽孢桿菌 芽孢桿菌（ Bacillus）是一類可以形成對(duì)不利條件有非凡抵御能力的內(nèi)生孢子的革蘭氏陽(yáng)性菌，其中有幾個(gè)種可以分泌肽類抗生素 [32]在動(dòng)物腸道中這類菌屬只占微生物群落極少部分。微生態(tài)制劑中芽孢桿菌常以芽孢的形式穩(wěn)定存在，其對(duì)外界化學(xué)消毒劑、高溫、高壓、干燥、輻射等有害因素有很強(qiáng)的耐受性，在休眠狀態(tài)下， 不消耗營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，被食入宿主機(jī)體后，可在腸道壁快速萌發(fā)，成長(zhǎng)為具備生長(zhǎng)繁殖活力的營(yíng)養(yǎng)型細(xì)胞，且再生率接近 100%，同時(shí)其產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等具有很強(qiáng)的生物活性 ,可以降解植物餌料中部分難以被利用的物質(zhì) [33]芽孢桿菌的這些特殊性的利用對(duì)人類將是一筆寶貴的財(cái)富。目前應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物最多的有枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌等 [34]。 羅輝等 [35]在鯉魚(yú)的餌料中分別加入枯草芽孢桿菌與混合芽孢桿菌，試驗(yàn)表明兩種微生態(tài)制劑都能對(duì)鯉魚(yú)的增重率有所提高。劉小剛等 [36]將芽孢桿菌加入到異育銀鯽的餌料中，結(jié)果表明，加入 %芽孢桿菌，異育銀鯽肝、腸、胰臟淀粉酶活性分別比空白組提升 %和 %，加入 %芽孢桿菌，異育銀鯽肝、腸、胰臟蛋白酶活性分別比空白組提升 %和 %。林亮等 [37]將芽孢桿菌制劑投入水池后對(duì)池底底部沉積物微生物群落展開(kāi)了分析 ,結(jié)果顯示 ,水池底部沉積物微生物群落的組成發(fā)生了變化 ,芽孢桿菌制劑能夠使底泥好氧細(xì)菌的數(shù)量增多。 Rengpipat 等 [38]用芽孢桿菌 S11 投喂斑節(jié)對(duì)蝦進(jìn)行了對(duì)照實(shí)驗(yàn)，測(cè)量了對(duì)蝦淋巴細(xì)胞的吞噬活力，實(shí)驗(yàn)表明，芽孢桿菌 S11 能在相當(dāng)程度上促進(jìn)吞噬作用，增強(qiáng)吞噬 活力； 90 天試驗(yàn)后，用哈氏弧菌侵染兩組蝦， 10 天后未處理組的存活率明顯低于處理組，處理組的免疫應(yīng)答及吞噬活力明顯提高。證明芽孢桿菌S11 能通過(guò)提高蝦的細(xì)胞免疫和體液免疫的應(yīng)答能力以及腸道菌群的競(jìng)爭(zhēng)抑制，從而達(dá)到抵抗疾病、促進(jìn)生長(zhǎng)的效果。 乳酸菌 乳酸菌，是指在發(fā)酵糖類過(guò)程當(dāng)中能夠分泌乳酸的細(xì)菌的總稱，是一種類不產(chǎn)生芽孢、異養(yǎng)厭氧或兼性厭氧型、革蘭氏陽(yáng)性菌。乳酸菌包含種類非常多，包含 18 個(gè)屬以上，有 200 多種，廣泛存在于動(dòng)物腸道內(nèi)。在水產(chǎn)養(yǎng)殖微生態(tài)制劑中常用的益生菌主要有乳桿菌屬和雙歧桿菌屬兩種， 能夠通過(guò)分解糖類產(chǎn)生乳酸和其它有機(jī)酸物質(zhì)，能夠降低養(yǎng)殖機(jī)體腸道內(nèi)的 pH 值，從而阻止其它有害菌群的入侵和定植，提高水產(chǎn)動(dòng)物體液免疫及細(xì)胞免疫能力和抗病能力 [39]。其缺點(diǎn)是環(huán)境抗逆性差，不耐氧和高溫， 7580℃約 5min，損失超過(guò) 70%。 Gildberg 等 [40](1995)用具有較強(qiáng)致病性的弧菌菌種感染分泌乳酸的廣不肉桿菌投喂大西洋鱈幼苗 ,幼體的抵御病菌的能力顯著提高 ,而且生存至三個(gè)星期的幼苗腸道內(nèi)菌群里分泌乳酸的菌株微生物群中占明顯優(yōu)勢(shì)。王麗娟 [41]在對(duì)魚(yú)的試驗(yàn)表明 :用乳酸菌投喂養(yǎng)殖動(dòng)物，使其黏附于 宿主腸道 ,能夠抵御革蘭氏陰性感染菌的侵染。鄒向陽(yáng)等 [42]用煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 10 雙歧桿菌在中國(guó)對(duì)蝦幼苗養(yǎng)殖過(guò)程當(dāng)中進(jìn)行試驗(yàn) ,結(jié)果顯示，使用制劑的中國(guó)對(duì)蝦蝦苗的成活率提高了 55%60%,并且加快了對(duì)蝦幼苗的生長(zhǎng)發(fā)育速度、促進(jìn)了對(duì)蝦對(duì)餌料的攝入量和抗病免疫能力。 硝化細(xì)菌和反硝化細(xì)菌 硝化細(xì)菌 (Nitrobacteria)是一類能利用氨及亞硝酸鹽作為氮源， CO2 作為碳源，從氨氧化過(guò)程中獲得能量的化能自養(yǎng)型細(xì)菌，為革蘭氏陰性，包括硝酸菌屬和硝酸菌屬。硝化細(xì)菌在氮的轉(zhuǎn)化過(guò)程中可將對(duì)水體及水產(chǎn)動(dòng)物有害的亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為無(wú)害的 可被吸收的硝酸鹽 ,另外硝化細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中可同化和異化硫化氫 ,進(jìn)而凈化水體環(huán)境、改善魚(yú)蝦池底底泥、保持水產(chǎn)動(dòng)物良好的生長(zhǎng)環(huán)境 [43]。 反硝化細(xì)菌 (Denitrify Bacteria)是一種可以使用硝酸鹽和亞硝酸鹽作為氮源，水體含碳物質(zhì)作為碳源的兼性厭氧型細(xì)菌。主要生存于池塘底泥 ,可以把底泥中的硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為無(wú)毒的氮?dú)舛皇卿@態(tài)氮排出池塘，其制劑多用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中池塘低質(zhì)亞硝酸鹽偏高和藻類過(guò)度繁殖的處理。 酵母菌 酵母菌（ Yeast）是一種可以在有氧或缺氧條件下分解糖類的單細(xì)胞真菌，可快速減少水生 動(dòng)物耗氧量。酵母菌屬存在于動(dòng)物腸道內(nèi)的量也是非常之少，但卻能夠影響腸道內(nèi)環(huán)境和微生物群落的結(jié)構(gòu) ,促進(jìn)乳酸菌等益生菌的生長(zhǎng)及活力 ,提高整個(gè)腸道對(duì)餌料中營(yíng)養(yǎng)成分的消化、吸收和利用能力 ,進(jìn)而增加養(yǎng)殖動(dòng)物的食入量 ,提高養(yǎng)殖效益。酵母菌還能與有害菌形成競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制 ,抑制有害菌的占位定植和生長(zhǎng)繁殖。而且酵母菌菌體富含氨基酸、維生素、核酸和各種活性酶類，為水產(chǎn)動(dòng)物所利用。另外，酵母菌細(xì)胞壁能夠激發(fā)、增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物免疫功能，維持有益菌群的生態(tài)平衡，從而預(yù)防疾病的發(fā)生 [44]。目前常用的菌株多分離自魚(yú)體表面。其不足之處是耐熱性較差， 6070℃ /h 即死亡。 Macey等從鮑魚(yú)機(jī)體中培育得到了兩株酵母菌和一株細(xì)菌（分別為 SS AY1和 SY9），把含有這三種菌的益生菌制劑添加到飼料中，養(yǎng)殖 8 個(gè)月之后，原本 20mm 的小鮑魚(yú)的生長(zhǎng)速率提高了 8%， 67mm 的大鮑魚(yú)的生長(zhǎng)速率提高了 34%；致病弧菌的侵染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，加入 EM 菌的鮑魚(yú)存活率達(dá)到 62%，未加入的空白組鮑魚(yú)存活率則為 25%[45]。 EM 菌 EM 菌是由多種益生菌復(fù)合而成的微生物群體 ,不同的益生菌相互影響相互作用，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物腸道內(nèi)微生態(tài)系統(tǒng)的平衡。 EM 中的益生菌通過(guò)固氮、光合等作用 ,可將水中的有機(jī)質(zhì)轉(zhuǎn)化為能被水產(chǎn)動(dòng)物吸收利用的營(yíng)養(yǎng)元素 ,促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)繁殖 ,還能提高水中的溶氧量 ,降解氨、硫化氫等有害物質(zhì) ,促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物水體環(huán)境的微生態(tài)平衡。同時(shí) EM 菌在腸道內(nèi)通過(guò)黏附及位點(diǎn)的占據(jù)，達(dá)到抑制大腸桿菌等致病菌的生長(zhǎng)繁殖的作煙臺(tái)大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 11 用 ,提高腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收率 ,降低排泄物中的氨氮含量 ,從而凈化水域、提高養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，增加養(yǎng)殖效益 [46]。 閻斌倫 [47]在中華絨螯蟹育苗中選擇 EM微生態(tài)制劑 ,在實(shí)驗(yàn)組中分別添加不同劑量的EM 制 劑，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組水中亞硝酸鹽含量下降 %,氨氮含量比空白組降低%,換水量降低 85%,用藥量降低 50%以上。王平等 [48]用 EM 菌制劑對(duì) 3 種常見(jiàn)藻類進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果顯示 EM 菌可顯著妨礙盤(pán)星藻、衣藻及四尾柵裂藻的發(fā)育和繁殖，其數(shù)目平均下降率分別為 46． 80%， 97． 17%和 99． 07%。吳桂玲等 [49]利用微生態(tài)制劑對(duì)花鱸的實(shí)驗(yàn)顯示，實(shí)驗(yàn)組花鱸的頭腎巨噬細(xì)胞數(shù)目明顯高于空白組，攻毒試驗(yàn)中，空白組花鱸最先開(kāi)始消亡，結(jié)果表明試驗(yàn)組免疫和抵抗能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組。張玲華等 [50]用由芽孢桿菌 、硝化細(xì)菌和假單胞菌混合而成的 EM 菌處理池塘 ,發(fā)現(xiàn)其可明顯分解池塘水中殘余飼料 ,還對(duì)藻類的生長(zhǎng)繁殖產(chǎn)生積極的影響 ,從而提高水中的溶氧量，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)。 主要益生元在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用 低聚糖 低聚糖是指含多個(gè)糖苷鍵聚合而成的化合物，又稱寡糖，包含功能性和普通型低聚糖兩種。其中，功能性低聚糖難以直接被宿主吸收，但能夠特異性地增殖優(yōu)勢(shì)