【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 在薄層板上獲取一個(gè)或多個(gè)斑點(diǎn)，根據(jù)在薄層上的位置、斑點(diǎn)的顏色來(lái)對(duì)對(duì)樣品進(jìn)行定性分析，不僅對(duì)斑點(diǎn)能進(jìn)行半定量分析，而且還能對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行定量分析。 薄層色譜檢測(cè)方法及應(yīng)用 薄層色譜檢測(cè)法 [12]： （ 1） 薄層色譜 傅立葉變換紅外光譜聯(lián)用檢測(cè)法：該法利用化合 物的紅外光譜特性對(duì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜物質(zhì)可提供豐富信息，還能應(yīng)用其進(jìn)行定量測(cè)定。 （ 2）薄層色譜 拉曼光譜聯(lián)用檢測(cè)法：該法利用分子振動(dòng)、分子偶極矩增大、紅外吸收強(qiáng)度也隨之增大，拉曼散射隨之增強(qiáng)的原理進(jìn)行檢測(cè)。 （ 3）薄層色譜 核磁共振聯(lián)用法：用刮刀將展開后的薄層板上樣品刮下，然后用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵摌悠泛螅捎煤舜殴舱襁M(jìn)行檢測(cè)。與紅外光譜、質(zhì)譜相比較，有較低靈敏性，然而此法能提供有效結(jié)構(gòu)信息，這是無(wú)法其他方法相比之處。這樣的分析方法需要較大的樣量。 （ 4）薄層色譜 電化學(xué)方法聯(lián)用法：此法將分離出的樣品斑點(diǎn)刮 下后加入到電化學(xué)反應(yīng)的溶液中而得到電化學(xué)檢測(cè)與分析結(jié)果。 （ 5）薄層色譜 質(zhì)譜聯(lián)用法：與其他聯(lián)用技術(shù)不同 , 質(zhì)譜是有效定性的現(xiàn)代分析手段。因?yàn)槠溆休^高的靈敏性、良好的選擇性、又可提供大量的組合和結(jié)構(gòu)信息、根據(jù)薄層色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用，達(dá)成了互惠互利，更根據(jù)樣品復(fù)雜性來(lái)定性。 薄層色譜方法主要應(yīng)用 [13]有生物樣品、環(huán)境有害物質(zhì)分析，以及無(wú)機(jī)、有機(jī)化合物分析等。 課題的目的和意義 課題的目的 由文獻(xiàn)報(bào)道可知，四苯基卟啉 [14]及其金屬絡(luò)合物的合成反應(yīng)中，對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行相應(yīng)的表征、鑒定時(shí)，需要的 分析儀器不僅成本較高，而且價(jià)格不菲，同時(shí)在卟啉類化合物合成過(guò)程中不利于跟蹤、監(jiān)測(cè)分析。薄層色譜在中草藥品種區(qū)分和組分分析、藥物合成的定性鑒別、研究質(zhì)量執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)與中草藥含量定性、純度測(cè)定、藥物代謝及其工藝監(jiān)控分析的合成等方面有著豐富的應(yīng)用。不沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)工程學(xué)院本科生畢業(yè)論文 4 久的將來(lái)，薄層色譜法將是便于選擇的、經(jīng)濟(jì)、安全、快速的分析方法，并且會(huì)有更加廣泛的應(yīng)用范圍。 為了滿足 TPPCo[15]合成研究的需要，研究薄層色譜法測(cè)定 TPPCo的分析條件，確定了薄層色譜分離測(cè)定 TPPCo純度的條件和方法，可為 TPPCo合成研究提供方便實(shí)用的檢測(cè)手段。 課題的意義 參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，薄層色譜法 [16]特別適用于微量成分的檢出與定量。根據(jù)儀器分析發(fā)展的方法，鋪板技術(shù)和點(diǎn)樣技術(shù)的自動(dòng)化，薄層色譜與分光光度計(jì)，熒光、紫外、紅外等光譜儀的相互協(xié)作，在各種物質(zhì)的分離鑒定、含量測(cè)定中薄層色譜都起到了至關(guān)重要的作用。這對(duì)研制和開發(fā)高新材料、分析痕量金屬均具有重要的指導(dǎo)意義。 本課題對(duì)薄層色譜法測(cè)定 TPPCo 純度的分析條件進(jìn)行研究，薄層色譜法為TPPCo 及其金屬配合物 [17]的物理結(jié)構(gòu)、化學(xué)特性、溶解性、光譜特征、分離、提純等多種方面的系統(tǒng)研究開發(fā)提供快 捷、高效的檢測(cè)手段，對(duì)卟啉及金屬卟啉化合物的連續(xù)的合成、鑒定、性質(zhì)研究方面有著出色表現(xiàn)，呈現(xiàn)了薄層色譜法和 TPPCo 在實(shí)際應(yīng)用中的巨大作用。 沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)工程學(xué)院本科生畢業(yè)論文 5 第 2 章 實(shí)驗(yàn)部分 實(shí)驗(yàn)所需藥品、試劑 實(shí)驗(yàn)所用主要試劑、藥品見表 21。 表 21 實(shí)驗(yàn)藥品和試劑 名稱 分子式 分子量 規(guī)格 生產(chǎn)單位 環(huán)己烷 C6H12 分析純 沈陽(yáng)市華東試劑廠 甲苯 C6H5CH3 分析純 沈陽(yáng)市新化試劑廠 TPPCo C44H28N4Co 95% 實(shí)驗(yàn)室自制 TPP C44H28N4 97% 實(shí)驗(yàn)室自制 苯 C6H6 分析純 沈陽(yáng)市華東試劑廠 乙酸乙酯 CH3COOC2H5 分析純 天津市永大化學(xué)試劑 有限公司 甲醇 CH3OH 分析純 沈陽(yáng)市新化試劑廠 羧甲基纖維素鈉 (C8H11NaO7)n 食品添加 劑 沈陽(yáng)市試劑一廠 薄層層析硅膠 化學(xué)純 青島海洋化工有限公 司 丙酮 CH3COCH3 化學(xué)純 天津市富宇精細(xì)化工 有限公司 二氯甲烷 CH12Cl2 分析純 沈陽(yáng)市華東試劑廠 沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)工程學(xué)院本科生畢業(yè)論文 6 主要儀器、設(shè)備 實(shí)驗(yàn)用的主要儀器和設(shè)備見表 22。 表 22 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備 名稱 型號(hào) 生產(chǎn)廠家 干燥箱 1013 上海實(shí)驗(yàn)儀器總廠 薄層色譜掃描儀 KH3000 上?？破丈邢薰? 調(diào)溫電熱套 DRTTW 鄭州長(zhǎng)城公司 微量進(jìn)樣器 10μL 浙江實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠 玻璃毛細(xì)管 華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠 全自動(dòng)薄層鋪板機(jī) TDII 上?？普苌萍加邢薰? 托盤天平 500g 北京儀器儀表廠 分析天平 BT323S （ ） 北京中儀 友信科技有限公司 玻璃板 20cm10cm 移液管 1ml/2ml 量筒 50ml/100ml 玻璃棒 20cm 燒杯 50ml/500ml 容量瓶 50ml/10ml 展開槽 雙層 200100 實(shí)驗(yàn)原理 主要原理是依據(jù)被分離物的極性不同，在一定吸附活性的吸附劑和展開劑沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)工程學(xué)院本科生畢業(yè)論文 7 極性之間進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)吸附而達(dá)到分離的目的。由于在溶劑中各個(gè)組分的溶解度、吸附劑對(duì)其有不同的吸附本領(lǐng)，最終將混合物分離形成一系列的斑點(diǎn)。標(biāo)準(zhǔn)化合物在薄層板上展開，再通過(guò)這些已知化合物的 Rf值，鑒定各個(gè) 斑點(diǎn)的組分，進(jìn)一步采用薄層色譜掃描法定量。 實(shí)驗(yàn)操作程序 薄層色譜分離 TPPCo 的操作程序 圖 21薄層色譜分離操作流程 圖 22薄層色譜掃描操作流程 沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)工程學(xué)院本科生畢業(yè)論文 8 實(shí)驗(yàn)裝置圖 （ 1）展開裝置圖 圖 23展開槽及展開過(guò)程 （ 2） 制板裝置圖 圖 24TDⅡ 全自動(dòng)鋪板機(jī) 實(shí)驗(yàn)步驟 沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)工程學(xué)院本科生畢業(yè)論文 9 100ml沸騰的去離子水中，攪拌使之完全溶解。等冷卻到室溫裝入試劑瓶準(zhǔn)備使用。 [18]溶液的配制 用分析天平取 40ml二氯甲烷溶液中，再轉(zhuǎn)移到 50ml容量瓶中定容，搖勻。配得的 濃度是 ， 放在避光處準(zhǔn)備使用。 TPP母核 [19]溶液的配制：用分析天平取 40ml二氯甲烷溶液中，再 轉(zhuǎn)移到 50ml容量瓶中定容，搖勻。配得的 濃度是 ，放在避光處準(zhǔn)備使用。 薄層板的制備 硅膠吸附劑是最常用的，使用 5g硅膠 G 和 15~18m質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 %的羧甲基纖維素鈉溶液， 轉(zhuǎn)移到一個(gè)統(tǒng)一的糊，備用。 使用時(shí)只需將 5g 硅膠 G 加 15~18ml 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 %的羧甲基纖維素鈉溶液，調(diào)成均勻的糊狀，備用。 一般選用大小為 10cm20cm，表面光滑平整的玻璃板。 制備薄層的厚度要求約 ~。 薄層板制好后水平自然干燥后使用。 薄層板的活化 在適當(dāng)溫度下把薄層板烘干 ~1 小時(shí)，使吸附劑具有一定含水量，出現(xiàn)一定吸附活性，具有適當(dāng)吸附活度的操作過(guò)程。 開始時(shí) 用 玻璃毛細(xì)管點(diǎn)樣，定量時(shí)需要 微量進(jìn)樣器來(lái)點(diǎn)樣。樣點(diǎn)的直徑大概在 3mm左右，底線到基線的距離為 10mm，樣點(diǎn)間距大概在 20mm左右，樣點(diǎn)到玻璃邊緣距離至少 10mm，再進(jìn)行點(diǎn)樣。 展開劑選取兩種以上互溶的有機(jī)溶劑，在薄層板點(diǎn)樣之后，待溶劑揮發(fā)完全，再放入展開槽中展開，展開溶劑一定不能超過(guò)樣點(diǎn)。展開過(guò)程應(yīng)該在密閉的展開槽中進(jìn)行，展開時(shí)間大概是在 15分鐘左右。每次展開后，不能反復(fù)使用，需要更 換。展開溶劑揮發(fā)完全后，進(jìn)行檢視， 得到斑點(diǎn)清晰、無(wú)拖尾。 沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)工程學(xué)院本科生畢業(yè)論文 10 定性 以金屬母核 TPP 為對(duì)照品，金屬卟啉鈷 TPPCo 為試樣同時(shí)在同一厚度的薄層板上進(jìn)行點(diǎn)樣展開。觀察展開效果，計(jì)算比移值，考察金屬卟啉鈷 TPPCo 的分離效果。 定量分析 因?yàn)?TPPCo 本身帶有顏色，可以直接使用薄層色譜掃描儀對(duì)其進(jìn)行定量分析 ,待薄層板上的有機(jī)物全部會(huì)揮發(fā)后，在 KH3000 型薄層色譜掃描儀上進(jìn)行光譜掃描掃描、樣品掃描，測(cè)量斑點(diǎn)的掃描波長(zhǎng)、吸光度，根據(jù)其與金屬鈷卟啉樣品溶液濃度的關(guān)系進(jìn)行定量分析。 沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)工程學(xué)院本科生畢業(yè)論文 11 第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié) 果與討論 展開劑的初選 展開劑的選擇條件： ① 對(duì)所需成分有良好的溶解性 ② 可使成分間分開 ③ 待測(cè)組分 Rf 值在 之間，定量測(cè)定在 之間 ④ 不與待測(cè)組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng) ⑤ 沸點(diǎn)適中，粘度較小 ⑥ 展開后組分斑點(diǎn)圓且集中 ⑦ 混合溶劑最好用新鮮配制的。 加入少量拖尾抑制劑到展開劑中，如乙酸、乙二酸、甲酸等，類似這些溶劑可以抑制一些堿性物質(zhì)產(chǎn)生斑尾現(xiàn)象。為了得到分離效果較好的展開劑，需要不停的變換展開劑的組成和比例，直到找到分離