植物組織培養(yǎng)基本操作(編輯修改稿)
2025-06-20 11:48 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 （ 三 ） 藥品用量 的計算： 配制母液時藥品用量 (mg)=配方用量 (mg) 濃縮倍數(shù)制備容量（ L） 二 、 培養(yǎng)基的制作 （ 一 ） 母液取用量的計算 制 備 培養(yǎng)基 時母液 取用 量 （ ml）=1000247。 濃縮倍數(shù) 制備培養(yǎng)基數(shù)量 （ L） （ 二 ） 培養(yǎng)基制作程序 按大量元素 、 微量元素 、 鐵鹽 、 有機(jī)成分順序?qū)?母液 取出 ， 混合 。 適量蒸餾水放入加熱容器 ， 蒸餾水應(yīng)少于所制培養(yǎng)基數(shù)量 ， 約終體積的 2/33/4， 接通電源加熱 。 向加熱容器中加入稱量好的 瓊脂 （%） ， 攪拌加熱 ， 至完全溶化 。 培養(yǎng)基制作程序圖 瓊脂熬化后 ， 稱取相應(yīng)量的 蔗糖 （ 23%）， 加入加熱容器中至溶解 。 將母液混合液加入到加熱容器中 ， 攪拌混勻 。 蒸餾水 定容 至所需體積 。 測試培養(yǎng)基溶液的 PH值 ()， 過高滴加 ， 過低滴加 NaOH調(diào)整 。 迅速 分裝 到培養(yǎng)瓶中 ， 備用 。 培養(yǎng)基是離體培養(yǎng)物賴以生存和生長的人工環(huán)境的重要組成部分 ， 常用的培養(yǎng)基依據(jù)其物理狀態(tài)的不同分為固態(tài)培養(yǎng)基和液態(tài)培養(yǎng)基 。 固態(tài)培養(yǎng)基一般使用瓊脂為凝固劑，也有使用卡拉膠或魔芋粉為凝固劑的。 液態(tài)培養(yǎng)基不使用凝固劑，但需要在容器中置入適當(dāng)?shù)闹挝铮嚬転榕囵B(yǎng)容器的支撐物可用濾紙橋，底面積較大的培養(yǎng)容器，支撐物可選用脫脂棉等。 固體培養(yǎng)基 三 、 培養(yǎng)基及培養(yǎng)器械的滅菌 制備好的培養(yǎng)基如果帶菌 ， 會導(dǎo)致植物離體培養(yǎng)失敗 ， 因而還要對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理 。 （ 一 ） 高壓蒸汽滅菌 培養(yǎng)基的滅菌一般采用濕熱滅菌法： 培養(yǎng)瓶及培養(yǎng)器械放入高壓滅菌鍋 。 滅菌鍋加水至淹沒電熱絲 。 封閉高壓滅菌鍋各出氣口 。 接通電源 加壓 至 49kPa（ ） 打開排氣閥 ， 排冷氣 至壓力 0 kPa。 繼續(xù)加壓至 108kPa（ ， 即 121℃） 壓力至 108kPa（ ， 即 121℃ ） 時， 穩(wěn)壓 在此壓力 1520min。 關(guān)閉電源自然冷卻至壓力為 0 kPa。 取出培養(yǎng)基和器械冷卻 ， 貯存于 30℃ 以下室內(nèi) 。 （二）干熱滅菌 培養(yǎng)瓶 、 三角瓶 、 試管等玻璃器皿及接種器械 ， 可以進(jìn)行干熱滅菌 。 即將洗滌干凈的玻璃器皿放到烘箱中 ， 在150℃ 溫度下 ， 干熱滅菌 1小時 ， 或 120℃ 下滅菌 2小時 。 滅菌完畢冷卻后取出器械貯存 。 貯存室要保持無菌 、 干燥 、 以免造成培養(yǎng)基的二次污染 。 滅菌后的培養(yǎng)基一般應(yīng)在 2周內(nèi)使用 ， 時間過長易造成潛在的污染 。 培養(yǎng)基滅菌后如果出現(xiàn)過多沉淀或瓊脂不凝固等現(xiàn)象 ， 該培養(yǎng)基不能繼續(xù)使用 ， 應(yīng)查明原因重新配制 。 第三節(jié) 外植體無菌接種 一般來說，無論何種類型的細(xì)胞工程技術(shù)，起始階段均涉及外植體取材、滅菌、接種與培養(yǎng)等基本過程。 一 、 植物材料的培養(yǎng)與取材 外植體 — 是指用于離體培養(yǎng)的活的植物組織、器官等材料，是植物離體培養(yǎng)的基礎(chǔ)材料。 外植體的來源 生長在自然環(huán)境下的植物 有目的地培育在溫室控制條件下生長的植物 無菌環(huán)境下已經(jīng)過離體培養(yǎng)的植物 自然環(huán)境中生長的植株 ， 一般帶有微生物 ，甚至與某些微生物具有寄生關(guān)系 ， 使植株具有 內(nèi)生菌 。 取自這些植物的外植體 ， 在培養(yǎng)過程中會有微生物滋生 ， 從而影響培養(yǎng)效果 。 已離體培養(yǎng)植株 多數(shù)情況下，應(yīng)盡量使用溫室或人工氣候室控制培養(yǎng)的植物材料作為外植體來源，減少培養(yǎng)過程中的微生物感染概率。同時，生長在控制條件下的植物可以保持培養(yǎng)料間的一致性，提高實驗的可重復(fù)性，也便于培養(yǎng)技術(shù)的規(guī)范。 某些多年生植物或特殊材料，必須取自自然生長的植物，就需要盡可能避免使用那些生長過于潮濕和不潔凈環(huán)境中的植物。對于培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)內(nèi)生菌污染的材料，應(yīng)盡量取生長旺盛期的生長點(diǎn)部位作為起始培養(yǎng)的材料。 供體植株的管理 取自室外的外植體材料 ， 供體植株的管理十分重要 ， 這與外植體培養(yǎng)時的污染率密切相關(guān) 。 植株管理中應(yīng)注意： ⑴ 避免昆蟲危害 許多昆蟲如蚜蟲 、 螨類和飛虱是許多植物病蟲害的傳播媒介 ， 會引起植物組織的潛在感染 。 ⑵注意防病 尤其是真菌和細(xì)菌病害的侵染，取自感病植株的外植體，在培養(yǎng)中的污染率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于來自健康植株的外植體，必要時需使用化學(xué)藥劑防治病害。 ⑶控制濕度 給供體植株澆水時應(yīng)從根部給水，避免從上部澆水，以免上部形成易于病原侵染的濕度環(huán)境；盡可能降低溫室濕度；取材前盡可能保持植株干爽。 材料取材 ⑴ 材料選擇 培養(yǎng)材料應(yīng)選擇有代表性的主要植物 、 選擇性狀優(yōu)良的種質(zhì)或特殊的基因型 。 快速繁殖時應(yīng)在植株生長的最適時期取材 ， 花藥培養(yǎng)應(yīng)在花粉發(fā)育到單核期取材 。 選取材料的大小一般在 。 胚胎培養(yǎng)或脫毒在 。 材料太大易污染 ， 材料太小難于成活 。 ⑵ 采收 從生長健壯的無病蟲害的植株上選取發(fā)育正常的器官和組織 。 最好采用莖尖 ， 后
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