植物組織培養(yǎng)基本操作-文庫吧在線文庫
【正文】 的天然提取物 ， 如椰乳 、 香蕉汁 、酵母提取液 、 番茄汁 、 麥芽糖等 。 與生長素協(xié)調(diào)作用對形成層分化有影響，刺激體細胞胚進一步發(fā)育成植株。常用濃度 1～ 5mg/L左右 其吸附作用選擇性較差，使用應(yīng)慎重。 根據(jù)作用分： 誘導(dǎo) 培養(yǎng)基 誘導(dǎo)外植體啟動生長 增殖 培養(yǎng)基 誘導(dǎo)離體培養(yǎng)苗擴大繁殖。 SH培養(yǎng)基 (NH4)H2PO4代替（ NH4） 2SO4,礦質(zhì)濃度較高，多數(shù)單子葉和雙子葉植物上使用較好 。 （ 二 ） 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的配制 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)分別配成母液儲于冰箱 ，濃度一般為 － 1mg/ml。 培養(yǎng)基制作程序圖 瓊脂熬化后 ， 稱取相應(yīng)量的 蔗糖 （ 23%）， 加入加熱容器中至溶解 。 固體培養(yǎng)基 三 、 培養(yǎng)基及培養(yǎng)器械的滅菌 制備好的培養(yǎng)基如果帶菌 ， 會導(dǎo)致植物離體培養(yǎng)失敗 ， 因而還要對培養(yǎng)基進行滅菌處理 。 （二）干熱滅菌 培養(yǎng)瓶 、 三角瓶 、 試管等玻璃器皿及接種器械 ， 可以進行干熱滅菌 。 外植體的來源 生長在自然環(huán)境下的植物 有目的地培育在溫室控制條件下生長的植物 無菌環(huán)境下已經(jīng)過離體培養(yǎng)的植物 自然環(huán)境中生長的植株 ， 一般帶有微生物 ，甚至與某些微生物具有寄生關(guān)系 ， 使植株具有 內(nèi)生菌 。 ⑵注意防病 尤其是真菌和細菌病害的侵染，取自感病植株的外植體，在培養(yǎng)中的污染率遠遠高于來自健康植株的外植體，必要時需使用化學(xué)藥劑防治病害。 最好采用莖尖 ， 后代性狀較穩(wěn)定 ， 攜帶細菌較少 。 （ 4）外植體放入超凈工作臺內(nèi)，置 7075%酒精中 560 秒， 610分鐘，或10%的漂白粉上清液中 1015分鐘，然后用無菌水沖洗 35次。 （ 4） 工具用后應(yīng)及時滅菌 ， 避免交叉污染。 溫度 離體培養(yǎng)中對溫度的控制比光照更為重要 ，大所數(shù)植物最適溫度在 2332℃ 之間 。 因此 ， 接種時要有部分組織合空氣接觸 。 可從以下幾種培養(yǎng)物中產(chǎn)生： 器官上發(fā)生 。 ⑴細菌污染特點 菌斑呈黏液狀，接種后12天發(fā)現(xiàn)。 ⑹ 嚴格按照操作程序。 ⑵連續(xù)轉(zhuǎn)移。 ⑸通風(fēng)條件 培養(yǎng)瓶容量小，氣體交換不良，玻璃化苗多。 第五節(jié) 試管苗的馴化移栽 一、試管苗的特點 試管苗的生態(tài)環(huán)境 組織培養(yǎng)出來的苗通稱試管苗或組培苗。 馴化原則 調(diào)節(jié)溫濕光和無菌等環(huán)境要素，開始和培養(yǎng)條件相似，后期與預(yù)計栽培條件相似。 植株生長發(fā)育較快。 嫁接移栽法 用試管苗做接穗嫁接在同一植物的實生苗上。 ⑵高濕 試管瓶內(nèi)水分移動途徑有兩條： 試管苗水分從氣孔蒸騰 培養(yǎng)基向外蒸發(fā)，凝結(jié)后又進入培養(yǎng)基 水分移動循環(huán)造成瓶內(nèi)相對濕度接近 100%，遠遠大于瓶外空氣濕度，故試管苗蒸騰小。 ⑷增加自然光照 10001800lx，控制光照時間 812h。主要原因是： ⑴激素濃度 BA濃度提高，導(dǎo)致玻璃化苗的產(chǎn)生。 ⑵外植體的生理狀態(tài) 幼年的材料培養(yǎng)含醌類物質(zhì)較少。 晴天取材，下午取材，經(jīng)日曬過可殺死部分細菌或真菌。 誘導(dǎo)胚狀體比誘導(dǎo)芽數(shù)量多 、 速度快 、 結(jié)構(gòu)完整 。 具體又可分為三種： 愈傷組織 同時長芽和根 植株 。 因此 ， 培養(yǎng)室應(yīng)安裝空調(diào)機或其他的控溫設(shè)備 。在培養(yǎng)基條件適宜的基礎(chǔ)上 ， 影響試管苗生長的主要因素有光照 、 溫度 、 濕度、 氧氣 。整個過程均需無菌操作。 進入接種室前雙手用洗滌劑清洗干凈， 操作前再用 70%酒精或消毒劑擦洗雙手 。 選取材料的大小一般在 。 某些多年生植物或特殊材料，必須取自自然生長的植物，就需要盡可能避免使用那些生長過于潮濕和不潔凈環(huán)境中的植物。 滅菌后的培養(yǎng)基一般應(yīng)在 2周內(nèi)使用 ， 時間過長易造成潛在的污染 。 接通電源 加壓 至 49kPa（ ） 打開排氣閥 ， 排冷氣 至壓力 0 kPa。 迅速 分裝 到培養(yǎng)瓶中 ， 備用 。 （ 三 ） 藥品用量 的計算： 配制母液時藥品用量 (mg)=配方用量 (mg) 濃縮倍數(shù)制備容量（ L） 二 、 培養(yǎng)基的制作 （ 一 ） 母液取用量的計算 制 備 培養(yǎng)基 時母液 取用 量 （ ml）=1000247。 一、培養(yǎng)基母液的配制 （ 一 ） 營養(yǎng)成分的配制 根據(jù)藥品性質(zhì)將母液配制成以下四類： 大量元素 可以混在一起配制成 10— 20倍液 ， 硫酸鎂和氯化鈣 Ca２ +和 Mg2+會與磷酸鹽混合 ， 產(chǎn)生不溶性沉淀 ，要分別單獨配制 Ca２ +與 PO4一起混合易沉淀 ， 定容后消失 。 （ 三 ） 幾種常見培養(yǎng)基的特點 富鹽平衡培養(yǎng)基 無機鹽濃度高 ， 元素比例適當(dāng) ， 離子平衡好 ， 具有較強的緩沖性 ， 培養(yǎng)中維持較好的穩(wěn)定性， 含高量氮 、 鉀 ， 營養(yǎng)豐富 ， 元素種類齊全 ， MS培養(yǎng)基使用最廣泛 。 ⑷抗氧化物 抗酚類氧化常用的藥劑有半胱氨酸、聚乙烯吡咯烷酮（ PVP）及抗壞血酸（ Vc），可用 50～200mg／ L的濃度洗滌剛切割的外植體傷口表面，或過濾除菌后加入固體培養(yǎng)基的表層。 其它附加成分 ⑴瓊脂
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