植物組織培養(yǎng)基本操作(已修改)
2025-05-31 11:48 本頁面
【正文】 2植物組織培養(yǎng)基本操作 目的與要求 了解植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基種類、成分及其特點，學習植物組織培養(yǎng)基本操作，了解離體培養(yǎng)環(huán)境條件，以及煉苗移栽基本方法。 具有植物組織培養(yǎng)基本操作程序的認知。能夠識別各類培養(yǎng)基特點，熟悉 MS培養(yǎng)基成分；具有制作培養(yǎng)基能力，具有選擇外植體、表面滅菌、無菌接種等基本能力；具有植物組織培養(yǎng)條件控制基本能力；有進行組培苗馴化練苗的基本能力。 第一節(jié) 培 養(yǎng) 基成分、種類及特點 第二節(jié) 培養(yǎng)基的制備 第三節(jié) 外植體無菌接種 第四節(jié) 外植體培養(yǎng) 第五節(jié) 試管苗的馴化與移栽 組織培養(yǎng)步驟圖 （ 1）準備階段 查閱相關文獻，根據(jù)已成功培養(yǎng)的相近植物資料，結合實際制定出切實可行的培養(yǎng)方案。 根據(jù)實驗方案配制適當?shù)幕瘜W消毒劑以及不同培養(yǎng)階段所需的培養(yǎng)基，并經高壓滅菌或過濾除菌后備用。 （ 2）外植體的選擇與消毒 選擇合適的部位作為外植體，采回后經過處理，然后進行消毒處理。 將消毒后的外植體在無菌條件下切割成一定大小的小塊，或剝離出莖尖、挑出花藥，接種到啟動培養(yǎng)基上。 （ 3）啟動培養(yǎng) 接種后的材料置于培養(yǎng)室或光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，促使外植體中已分化的細胞脫分化形成愈傷組織，或頂芽、腋芽直接萌發(fā)形成芽。 將愈傷組織轉移到分化培養(yǎng)基分化成不同的器官原基或形成胚狀體，最后發(fā)育形成再生植株。 （ 4）增殖培養(yǎng) 分化形成的芽、原球莖數(shù)量有限，采用適當?shù)脑鲋撑囵B(yǎng)基經反復多次切割轉接。 當芽苗繁殖到一定數(shù)量后，再將一部分用于壯苗生根，另一部分保存或繼續(xù)擴繁。進行脫毒苗培養(yǎng)的還要進行病毒檢測。 （ 5）生根培養(yǎng) 剛形成的芽苗往往比較弱小，多數(shù)無根，此時可降低或不加細胞分裂素濃度，提高生長素濃度，促進芽苗生根，提高其健壯度。 （ 6）煉苗移栽 選擇生長健壯，有 3～ 5條根的生根苗進行煉苗，移栽到疏松透氣的基質中，注意保溫、保濕、遮蔭。當苗完全成活后，再移向大田。 擬定培養(yǎng)方案 外植體預處理 外植體無菌接種 啟動培養(yǎng) 分化出芽、胚狀體或原球莖 繼代增殖培養(yǎng) 生根培養(yǎng) 煉苗移栽 成活供生產使用 植物組織培養(yǎng)的一般程序 培養(yǎng)基配制滅菌 第一節(jié) 培養(yǎng)基成分、種類及特點 植物生長必需 16種基本元素： N、 P、 K、 Ca、 Mg、 S、 Fe、 Mn、 B、 Cu、 Zn、 Mo、Cl、 C、 H、 O。 離體培養(yǎng)條件下 ， 各元素主要從培養(yǎng)基中獲得： H和 O來源于水 ， C來源于添加的糖類 ， 其它礦質元素來源于組成培養(yǎng)基的無機鹽 。 培養(yǎng)基是根據(jù)植物生長所需營養(yǎng)成分 ， 配制成的供植物生長的人工制作的營養(yǎng)物質 。 一 、 培養(yǎng)基的成分 培養(yǎng)基一般包括無機鹽 、 有機化合物和生長調節(jié)劑三大基本組成成分 。 無機鹽類 功能 離體組織生長發(fā)育的基本成分 根據(jù)植物對必需元素需要的量，可以分為以下兩類： 大量元素 — 植物所需元素的使用量一般在每升幾十幾千毫克，有 C、 H、 O、 N、 P、 K、 Ca、 Mg、 S。 微量元素 — 植物所需元素的濃度小于 105～ 107mol/L， Fe、 Cu、 Zn、 Mn、 Mo、 B、 Cl。 除 C、 H、 O外，其它礦質元素通常以離子態(tài)吸收 N硝態(tài)氮和銨態(tài)氮 有機化合物 培養(yǎng)基中只有無機鹽叫做 基本培養(yǎng)基 ， 為使培養(yǎng)物更好的生長 ， 還需添加有機成分 ， 常用有糖類 、 維生素 、 醇類 、 嘌呤 、 氨基酸等 。 ⑴糖類 功能 離體培養(yǎng)物生長與發(fā)育不可缺少的有機成分，即作為碳源，又維持培養(yǎng)基的滲透壓在 。 多使用蔗糖，試管苗生長與繁殖濃度 23%，幼胚培養(yǎng) 46%，某些特殊培養(yǎng)中用 810%。 細胞和原生質體培養(yǎng)還用麥芽糖、葡萄糖、果糖。 ⑵ 維生素類 功能 參與酶的形成 、 蛋白質 、 脂肪代謝 ， 明顯的促進離體培養(yǎng)物的生長 。 鹽酸硫胺素 VB 鹽酸吡哆醇 VB 煙酸 Vpp、生物素 VH、 維生素 CVc。 ⑶ 肌醇 功能 促進糖的轉化、維生素和激素的利用，對胚狀體和芽的形成有良好影響。 用量一般 50100mg/L。 ⑷ 腺嘌呤 合成各種細胞分裂素的前體物質之一 ， 利于細胞分裂 ， 促進芽的形成和生長 。 ⑸ 氨基酸 蛋白質的成分 ， 是有機氮化合物 ， 常用甘氨酸和多種氨基酸混合物如水解酪蛋白 、 水解乳蛋白 。 ⑹ 其它復合成分 成分尚不清楚的天然提取物 ， 如椰乳 、 香蕉汁 、酵母提取液 、 番茄汁 、 麥芽糖等 。 生長調節(jié)物質 ⑴生長素類 功能 促進細胞脫分化和細胞伸長，誘導愈傷組織產生 生長素與細胞分裂素協(xié)調作用，在離體培養(yǎng)中，生長素促進根的形成，抑制芽的形成。 液體培養(yǎng)中利于體細胞胚胎發(fā)生。 常用 IAA、 IBA、 NAA、 2,4D。 IBA促進生根 細胞分裂素的生理效應 ⑵細胞分裂素類 功能 促進細胞分裂和擴大，調節(jié)器官分化，延緩組織衰老，增強蛋白質合成。離體培養(yǎng)中，促進不定芽的發(fā)生，與生長素協(xié)調作用可
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