植物組織培養(yǎng)基本操作(完整版)
【正文】 功能 來(lái)自海藻的多糖類物質(zhì)，組織培養(yǎng)中最常用作凝固劑，是最方便、最好的凝固劑和支持物。 IBA促進(jìn)生根 細(xì)胞分裂素的生理效應(yīng) ⑵細(xì)胞分裂素類 功能 促進(jìn)細(xì)胞分裂和擴(kuò)大，調(diào)節(jié)器官分化，延緩組織衰老，增強(qiáng)蛋白質(zhì)合成。 ⑶ 肌醇 功能 促進(jìn)糖的轉(zhuǎn)化、維生素和激素的利用，對(duì)胚狀體和芽的形成有良好影響。 無(wú)機(jī)鹽類 功能 離體組織生長(zhǎng)發(fā)育的基本成分 根據(jù)植物對(duì)必需元素需要的量，可以分為以下兩類： 大量元素 — 植物所需元素的使用量一般在每升幾十幾千毫克，有 C、 H、 O、 N、 P、 K、 Ca、 Mg、 S。進(jìn)行脫毒苗培養(yǎng)的還要進(jìn)行病毒檢測(cè)。 第一節(jié) 培 養(yǎng) 基成分、種類及特點(diǎn) 第二節(jié) 培養(yǎng)基的制備 第三節(jié) 外植體無(wú)菌接種 第四節(jié) 外植體培養(yǎng) 第五節(jié) 試管苗的馴化與移栽 組織培養(yǎng)步驟圖 （ 1）準(zhǔn)備階段 查閱相關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù)已成功培養(yǎng)的相近植物資料，結(jié)合實(shí)際制定出切實(shí)可行的培養(yǎng)方案。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案配制適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)消毒劑以及不同培養(yǎng)階段所需的培養(yǎng)基，并經(jīng)高壓滅菌或過(guò)濾除菌后備用。 （ 5）生根培養(yǎng) 剛形成的芽苗往往比較弱小，多數(shù)無(wú)根，此時(shí)可降低或不加細(xì)胞分裂素濃度，提高生長(zhǎng)素濃度，促進(jìn)芽苗生根，提高其健壯度。 微量元素 — 植物所需元素的濃度小于 105～ 107mol/L， Fe、 Cu、 Zn、 Mn、 Mo、 B、 Cl。 用量一般 50100mg/L。離體培養(yǎng)中，促進(jìn)不定芽的發(fā)生，與生長(zhǎng)素協(xié)調(diào)作用可有效控制培養(yǎng)物的生長(zhǎng)與分化。 常用量 %%，不是培養(yǎng)基必需成分。 二 、 常用培養(yǎng)基的種類 、 配方及特點(diǎn) （ 一 ） 培養(yǎng)基種類 根據(jù)態(tài)相分： 固體培養(yǎng)基 加凝固劑的培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑的培養(yǎng)基 。 低鹽培養(yǎng)基 無(wú)機(jī)鹽濃度低，有機(jī)成分含量低，多數(shù)作為生根培養(yǎng)基、胚胎培養(yǎng)使用，常用 White培養(yǎng)基。 微量元素 可配成 100— 200倍混合母液 ， KI可單獨(dú)配 。 濃縮倍數(shù) 制備培養(yǎng)基數(shù)量 （ L） （ 二 ） 培養(yǎng)基制作程序 按大量元素 、 微量元素 、 鐵鹽 、 有機(jī)成分順序?qū)?母液 取出 ， 混合 。 培養(yǎng)基是離體培養(yǎng)物賴以生存和生長(zhǎng)的人工環(huán)境的重要組成部分 ， 常用的培養(yǎng)基依據(jù)其物理狀態(tài)的不同分為固態(tài)培養(yǎng)基和液態(tài)培養(yǎng)基 。 繼續(xù)加壓至 108kPa（ ， 即 121℃） 壓力至 108kPa（ ， 即 121℃ ） 時(shí)， 穩(wěn)壓 在此壓力 1520min。 培養(yǎng)基滅菌后如果出現(xiàn)過(guò)多沉淀或瓊脂不凝固等現(xiàn)象 ， 該培養(yǎng)基不能繼續(xù)使用 ， 應(yīng)查明原因重新配制 。對(duì)于培養(yǎng)過(guò)程中可能出現(xiàn)內(nèi)生菌污染的材料，應(yīng)盡量取生長(zhǎng)旺盛期的生長(zhǎng)點(diǎn)部位作為起始培養(yǎng)的材料。 胚胎培養(yǎng)或脫毒在 。 （ 2） 操作期間雙手和臺(tái)面常用 70%酒精或消毒劑擦拭 。 （ 1）借助接種用工具將材料切割分離。 一 、 外植體的培養(yǎng)條件 光照 光照對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育有重要作用 ， 是離體培養(yǎng)中非常重要的環(huán)境因素 。 濕度 培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)相對(duì)濕度通常是 100%，而環(huán)境中的相對(duì)濕度會(huì)直接影響培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)。 愈傷組織 莖 根 植株 。 （ 三 ） 外植體 直接形成根與芽 植株 。 接種時(shí)除去外部韌皮組織，只接內(nèi)部的分生組織。 ⑶培養(yǎng)基的成分 過(guò)高的無(wú)機(jī)鹽濃度 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)使用不當(dāng)， BA過(guò)多 分生能力強(qiáng)的材料，氧化受抑制，褐變也被抑制 培養(yǎng)條件不適宜，溫度過(guò)高或光照過(guò)強(qiáng)，褐變加速。 ⑵瓊脂濃度 瓊脂濃度低，玻璃化苗增加。⑸適溫生長(zhǎng)，熱擊處理防止玻璃化發(fā)生。 ⑶弱光 試管瓶?jī)?nèi)光照一般比太陽(yáng)光弱，幼苗生長(zhǎng)也較弱，不能受太陽(yáng)光直接照射。 嫁接移栽優(yōu)點(diǎn)： 移栽成活率高。 需時(shí)間短， 20天成活，緩苗期 1015天。 試管苗特點(diǎn) ⑴試管苗生長(zhǎng)細(xì)弱、莖葉表面角質(zhì)層不發(fā)達(dá) ⑵葉綠體的光合作用較差 ⑶葉片氣孔數(shù)目少，活性差 ⑷根的吸收功能差 ⑸對(duì)逆境的適應(yīng)性和抵抗能力較差 二、試管苗的馴化 馴化的目的 提高試管苗對(duì)外界環(huán)境條件的適應(yīng)性，提高光合能力，使試管苗健壯，提高試管苗移栽成活率。 ⑺培養(yǎng)基中加入間苯三酚、根皮苷或多效唑、矮壯素。 ⑷光照時(shí)間 一般要求 1012h，大于 15h玻璃苗增加。 褐變的防止措施 ⑴選擇適宜的外植體及最佳培養(yǎng)基。 ⑶器皿與金屬器械的滅菌 玻璃器皿可采用濕熱滅菌或干熱滅菌 金屬器皿一般火焰滅菌，也可干熱滅菌 ⑷布質(zhì)制品的滅菌 濕熱滅菌 ⑸無(wú)菌操作室的滅菌 2%新捷爾滅或 70%酒精擦拭（噴霧），紫外燈照射，定期甲醛和高錳酸鉀熏蒸。 病原菌：細(xì)菌及真菌兩大類。 （ 二 ） 外植體 胚狀體 植株 。 氧氣 離體培養(yǎng)的試管苗是需要氧氣的 ， 在固體培養(yǎng)或液體靜置培養(yǎng)時(shí) ， 如果組織完全浸入培養(yǎng)基中 ， 與氧氣隔絕 ， 就會(huì)停止生長(zhǎng) 。除特殊要求外 ， 一般都采用日光燈作光源 ， 光照強(qiáng)度 10005000Lx， 根據(jù)不同植物或器官需要 ， 可以每天連續(xù)光照 1216小
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