植物組織培養(yǎng)基本操作(存儲版)
【正文】 酒精 7075% 易 好 過氧化氫 1012% 515分鐘 最易 好 三、外植體的接種 — 無菌接種 外植體的接種是把經(jīng)過表面滅菌后的植物材料切碎或分離出器官、組織、細胞、轉(zhuǎn)放到無菌培養(yǎng)基上的全部操作過程。培養(yǎng)條件是離體培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵 。 低于 15℃ 時 ， 培養(yǎng)的組織生長停頓 ，高于 35℃ 對生長也不利 。 二 、 外植體的成苗途徑 外植體的成苗途徑有三種： （ 一 ） 外植體 愈傷組織 完整植株 。 小孢子發(fā)生 。無糖營養(yǎng)液或自來水使枝條抽枝，以新抽嫩枝作外植體。 ⑴基因型 某些植物酚類物質(zhì)含量較多。 %活性炭 （三） 玻璃化 現(xiàn)象及其預(yù)防措施 玻璃化現(xiàn)象及其產(chǎn)生原因 玻璃化是在細胞生長過程中的環(huán)境產(chǎn)生變化，試管苗為了適應(yīng)變化了的環(huán)境而呈玻璃狀。 ⑵提高蔗糖和瓊脂濃度 ⑶降低細胞分裂素和赤霉素濃度，增加生長素比例。 外界環(huán)境條件溫度不斷變化，其調(diào)節(jié)由太陽輻射決定，溫差很大，而且一般不會達到 25+2℃ 。 直接移栽法 直接將試管苗移栽到盆缽的方法。 四、提高試管苗移栽成活率的途徑 壯苗移栽比弱苗移栽成活率高 生長素（ NAA）利于生根 低無機鹽濃度生根效果好 活性炭利于嫩莖生根 避免太陽直射，溫度 2530℃ ，濕度在85%以上 使試管苗逐漸從無菌向有菌過渡 。 馴化方法 將長有完整試管苗的培養(yǎng)瓶由培養(yǎng)室轉(zhuǎn)到伴遮蔭的自然光下鍛煉，并打開瓶蓋注入少量自來水使幼苗逐漸降低溫度，轉(zhuǎn)向有菌，一般進行 12周。 試管苗長期生活在密閉容器中，形成其獨特生態(tài)系統(tǒng)，與外界環(huán)境相比，有四大差異 ⑴高恒溫 試管苗整個生長過程中采用的是恒溫培養(yǎng)，溫差很小。 ⑥離子水平 植物種類不同，離子形態(tài)比例量要求不同。 ⑶加抗氧化物。 （二）外植體的 褐變 及其防止措施。 污染途徑： 外植體帶菌 培養(yǎng)基及器皿滅菌不徹底 操作人員未遵守操作規(guī)程 ⑵真菌污染的特點 污染部分長有不同顏色的霉菌，接種后 310天發(fā)現(xiàn)。 愈傷組織上發(fā)生 。 振蕩培養(yǎng)是解決通氣的良好辦法 。 培養(yǎng)室溫度是 25177。 （ 5）工作人員操作時禁止不必要的談話。滅菌時需進行攪動。 二、預(yù)處理與表面滅菌 預(yù)處理 先對植物材料進行修剪整理，去掉不需要部分，將準備使用的植物材料（外植體）在流水中沖洗 2060分鐘，備用。 ⑶控制濕度 給供體植株澆水時應(yīng)從根部給水，避免從上部澆水，以免上部形成易于病原侵染的濕度環(huán)境；盡可能降低溫室濕度；取材前盡可能保持植株干爽。 取自這些植物的外植體 ， 在培養(yǎng)過程中會有微生物滋生 ， 從而影響培養(yǎng)效果 。 即將洗滌干凈的玻璃器皿放到烘箱中 ， 在150℃ 溫度下 ， 干熱滅菌 1小時 ， 或 120℃ 下滅菌 2小時 。 （ 一 ） 高壓蒸汽滅菌 培養(yǎng)基的滅菌一般采用濕熱滅菌法： 培養(yǎng)瓶及培養(yǎng)器械放入高壓滅菌鍋 。 將母液混合液加入到加熱容器中 ， 攪拌混勻 。 IAA、 NAA： 先用少量 95%酒精使之充分溶解 。 中鹽培養(yǎng)基 大量元素?zé)o機鹽為 MS的 1/2，微量元素種類減少含量增高，無肌醇維生素種類多，增加生物素、葉酸，有 H、 Hitsch、 Miller、 Blaydes等培養(yǎng)基，適用于特殊細胞培養(yǎng)。 生根 培養(yǎng)基 誘導(dǎo)離體培養(yǎng)苗生根 根據(jù)營養(yǎng)水平分： 基本 培養(yǎng)基 包含無機鹽等基本營養(yǎng)成分。常受溫度影響，低溫吸附效果好，高溫吸附能力降低甚至解吸附。 有 20多種，目前主要是赤霉酸 GA3。 生長調(diào)節(jié)物質(zhì) ⑴生長素類 功能 促進細胞脫分化和細胞伸長，誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生 生長素與細胞分裂素協(xié)調(diào)作用，在離體培養(yǎng)中，生長素促進根的形成，抑制芽的形成。 細胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)還用麥芽糖、葡萄糖、果糖。 離體培養(yǎng)條件下 ， 各元素主要從培養(yǎng)基中獲得： H和 O來源于水 ， C來源于添加的糖類 ， 其它礦質(zhì)元素來源于組成培養(yǎng)基的無機鹽 。 將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基分化成不同的器官原基或形成胚狀體，最后發(fā)育形成再生植株。2植物組織培養(yǎng)基本操作 目的與要求 了解植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基種類、成分及其特點，學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)基本操作，了解離體培養(yǎng)環(huán)境條件，以及煉苗移栽基本方法。 （ 3）啟動培養(yǎng) 接種后的材料置于培養(yǎng)室或光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，促使外植體中已分化的細胞脫分化形成愈傷組織，或頂芽、腋芽直接萌發(fā)形成芽。 擬定培養(yǎng)方案 外植體預(yù)處理 外植體無菌接種 啟動培養(yǎng) 分化出芽、胚狀體或原球莖 繼代增殖培養(yǎng) 生根培養(yǎng) 煉苗移栽 成活供生產(chǎn)使用 植物組織培養(yǎng)的一般程序 培養(yǎng)基配制滅菌 第一節(jié) 培養(yǎng)基成分、種類及特點 植物生長必需 16種基本元素： N、 P、 K、 Ca、 Mg、 S、 Fe、 Mn、 B、 Cu、 Zn、 Mo、Cl、 C、 H、 O。 多使用蔗糖，試管苗生長與繁殖濃度 23%，幼胚培養(yǎng) 46%，某些特殊培養(yǎng)中用 810%。 ⑹ 其它復(fù)合成分 成分尚不清楚
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