植物組織培養(yǎng)基本操作-wenkub
2023-05-26 11:48:44 本頁面
【正文】 胚進(jìn)一步發(fā)育成植株。 IBA促進(jìn)生根 細(xì)胞分裂素的生理效應(yīng) ⑵細(xì)胞分裂素類 功能 促進(jìn)細(xì)胞分裂和擴(kuò)大，調(diào)節(jié)器官分化，延緩組織衰老，增強(qiáng)蛋白質(zhì)合成。 ⑹ 其它復(fù)合成分 成分尚不清楚的天然提取物 ， 如椰乳 、 香蕉汁 、酵母提取液 、 番茄汁 、 麥芽糖等 。 ⑶ 肌醇 功能 促進(jìn)糖的轉(zhuǎn)化、維生素和激素的利用，對胚狀體和芽的形成有良好影響。 多使用蔗糖，試管苗生長與繁殖濃度 23%，幼胚培養(yǎng) 46%，某些特殊培養(yǎng)中用 810%。 無機(jī)鹽類 功能 離體組織生長發(fā)育的基本成分 根據(jù)植物對必需元素需要的量，可以分為以下兩類： 大量元素 — 植物所需元素的使用量一般在每升幾十幾千毫克，有 C、 H、 O、 N、 P、 K、 Ca、 Mg、 S。 擬定培養(yǎng)方案 外植體預(yù)處理 外植體無菌接種 啟動(dòng)培養(yǎng) 分化出芽、胚狀體或原球莖 繼代增殖培養(yǎng) 生根培養(yǎng) 煉苗移栽 成活供生產(chǎn)使用 植物組織培養(yǎng)的一般程序 培養(yǎng)基配制滅菌 第一節(jié) 培養(yǎng)基成分、種類及特點(diǎn) 植物生長必需 16種基本元素： N、 P、 K、 Ca、 Mg、 S、 Fe、 Mn、 B、 Cu、 Zn、 Mo、Cl、 C、 H、 O。進(jìn)行脫毒苗培養(yǎng)的還要進(jìn)行病毒檢測。 （ 3）啟動(dòng)培養(yǎng) 接種后的材料置于培養(yǎng)室或光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，促使外植體中已分化的細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，或頂芽、腋芽直接萌發(fā)形成芽。 第一節(jié) 培 養(yǎng) 基成分、種類及特點(diǎn) 第二節(jié) 培養(yǎng)基的制備 第三節(jié) 外植體無菌接種 第四節(jié) 外植體培養(yǎng) 第五節(jié) 試管苗的馴化與移栽 組織培養(yǎng)步驟圖 （ 1）準(zhǔn)備階段 查閱相關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù)已成功培養(yǎng)的相近植物資料，結(jié)合實(shí)際制定出切實(shí)可行的培養(yǎng)方案。2植物組織培養(yǎng)基本操作 目的與要求 了解植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基種類、成分及其特點(diǎn)，學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)基本操作，了解離體培養(yǎng)環(huán)境條件，以及煉苗移栽基本方法。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案配制適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)消毒劑以及不同培養(yǎng)階段所需的培養(yǎng)基，并經(jīng)高壓滅菌或過濾除菌后備用。 將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基分化成不同的器官原基或形成胚狀體，最后發(fā)育形成再生植株。 （ 5）生根培養(yǎng) 剛形成的芽苗往往比較弱小，多數(shù)無根，此時(shí)可降低或不加細(xì)胞分裂素濃度，提高生長素濃度，促進(jìn)芽苗生根，提高其健壯度。 離體培養(yǎng)條件下 ， 各元素主要從培養(yǎng)基中獲得： H和 O來源于水 ， C來源于添加的糖類 ， 其它礦質(zhì)元素來源于組成培養(yǎng)基的無機(jī)鹽 。 微量元素 — 植物所需元素的濃度小于 105～ 107mol/L， Fe、 Cu、 Zn、 Mn、 Mo、 B、 Cl。 細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)還用麥芽糖、葡萄糖、果糖。 用量一般 50100mg/L。 生長調(diào)節(jié)物質(zhì) ⑴生長素類 功能 促進(jìn)細(xì)胞脫分化和細(xì)胞伸長，誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生 生長素與細(xì)胞分裂素協(xié)調(diào)作用，在離體培養(yǎng)中，生長素促進(jìn)根的形成，抑制芽的形成。離體培養(yǎng)中，促進(jìn)不定芽的發(fā)生，與生長素協(xié)調(diào)作用可有效控制培養(yǎng)物的生長與分化。 有 20多種，目前主要是赤霉酸 GA3。 常用量 %%，不是培養(yǎng)基必需成分。常受溫度影響，低溫吸附效果好，高溫吸附能力降低甚至解吸附。 二 、 常用培養(yǎng)基的種類 、 配方及特點(diǎn) （ 一 ） 培養(yǎng)基種類 根據(jù)態(tài)相分： 固體培養(yǎng)基 加凝固劑的培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑的培養(yǎng)基 。 生根 培養(yǎng)基 誘導(dǎo)離體培養(yǎng)苗生根 根據(jù)營養(yǎng)水平分： 基本 培養(yǎng)基 包含無機(jī)鹽等基本營養(yǎng)成分。 低鹽培養(yǎng)基 無機(jī)鹽濃度低，有機(jī)成分含量低，多數(shù)作為生根培養(yǎng)基、胚胎培養(yǎng)使用，常用 White培養(yǎng)基。 中鹽培養(yǎng)基 大量元素?zé)o機(jī)鹽為 MS的 1/2，微量元素種類減少含量增高，無肌醇維生素種類多，增加生物素、葉酸，有 H、 Hitsch、 Miller、 Blaydes等培養(yǎng)基，適用于特殊細(xì)胞培養(yǎng)。 微量元素 可配成 100— 200倍混合母液 ， KI可單獨(dú)配 。 IAA、 NAA： 先用少量 95%酒精使之充分溶解 。 濃縮倍數(shù) 制備培養(yǎng)基數(shù)量 （ L） （ 二 ） 培養(yǎng)基制作程序 按大量元素 、 微量元素 、 鐵鹽 、 有機(jī)成分順序?qū)?母液 取出 ， 混合 。 將母液混合液加入到加熱容器中 ， 攪拌混勻 。 培養(yǎng)基是離體培養(yǎng)物賴以生存和生長的人工環(huán)境的重要組成部分 ， 常用的培養(yǎng)基依據(jù)其物理狀態(tài)的不同分為固態(tài)培養(yǎng)基和液態(tài)培養(yǎng)基 。 （ 一 ） 高壓蒸汽滅菌 培養(yǎng)基的滅菌一般采用濕熱滅菌法： 培養(yǎng)瓶及培養(yǎng)器械放入高壓滅菌鍋 。 繼續(xù)加壓至 108kPa（ ， 即 121℃） 壓力至 108kPa（ ， 即 121℃ ） 時(shí)， 穩(wěn)壓 在此壓力 1520min。 即將洗滌干凈的玻璃器皿放到烘箱中 ， 在150℃ 溫度下 ， 干熱滅菌 1小時(shí) ， 或 120℃ 下滅菌 2小時(shí) 。 培養(yǎng)基滅菌后如果出現(xiàn)過多沉淀或瓊脂不凝固等現(xiàn)象 ， 該培養(yǎng)基不能繼續(xù)使用 ， 應(yīng)查明原因重新配制 。 取自這些植物的外植體 ， 在培養(yǎng)過程中會(huì)
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