植物組織培養(yǎng)基本操作-文庫吧
2025-04-25 11:48 本頁面
【正文】 有效控制培養(yǎng)物的生長與分化。 常用 6BA、 ZT、 KT、 2iP。 植株的形態(tài)建成是 CTK和 IAA的比值調控的 CTK/IAA高，誘導愈傷組織形成芽 CTK/IAA低，誘導愈傷組織形成根 煙草在不同細胞分裂素與生長素濃度下的生理效應 ⑶赤霉素類 功能 促進細胞伸長生長、誘導花芽形成、打破種子休眠以及誘導單性結實等。 與生長素協(xié)調作用對形成層分化有影響，刺激體細胞胚進一步發(fā)育成植株。 有 20多種，目前主要是赤霉酸 GA3。 水 離體培養(yǎng)中，既是培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的溶劑，又是培養(yǎng)基的重要組成部分，占培養(yǎng)基成分的 95%。 原生質體培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)及分生組織培養(yǎng)一般應用雙蒸水或超純水 大批量快速繁殖培養(yǎng)，可用一般蒸餾水或純凈水。 其它附加成分 ⑴瓊脂 功能 來自海藻的多糖類物質，組織培養(yǎng)中最常用作凝固劑，是最方便、最好的凝固劑和支持物。 常用量 %%，不是培養(yǎng)基必需成分。 卡拉膠 海藻提取物，含雜質少純度更高，凝固后培養(yǎng)基透明，利于材料觀察。 ⑵活性炭 功能 常用的吸附劑，某些培養(yǎng)類型中，可以吸附培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的一些有毒物質（酚類物質），有利于培養(yǎng)物的生長。常用濃度 1～ 5mg/L左右 其吸附作用選擇性較差，使用應慎重。常受溫度影響，低溫吸附效果好，高溫吸附能力降低甚至解吸附。 ⑶抗生素 培養(yǎng)基中添加抗生素可防止菌類污染，常用的抗生素有青霉素、鏈霉素、慶大霉素等，用量一般為 5～ 20mg/L。大部分抗生素需要過濾除菌。 ⑷抗氧化物 抗酚類氧化常用的藥劑有半胱氨酸、聚乙烯吡咯烷酮（ PVP）及抗壞血酸（ Vc），可用 50～200mg／ L的濃度洗滌剛切割的外植體傷口表面，或過濾除菌后加入固體培養(yǎng)基的表層。 二 、 常用培養(yǎng)基的種類 、 配方及特點 （ 一 ） 培養(yǎng)基種類 根據(jù)態(tài)相分： 固體培養(yǎng)基 加凝固劑的培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑的培養(yǎng)基 。 根據(jù)培養(yǎng)過程分： 初代培養(yǎng)基 初次接種外植體的培養(yǎng)基 。 繼代培養(yǎng)基 接種初代培養(yǎng)之后培養(yǎng)物的 培養(yǎng)基 。 根據(jù)作用分： 誘導 培養(yǎng)基 誘導外植體啟動生長 增殖 培養(yǎng)基 誘導離體培養(yǎng)苗擴大繁殖。 生根 培養(yǎng)基 誘導離體培養(yǎng)苗生根 根據(jù)營養(yǎng)水平分： 基本 培養(yǎng)基 包含無機鹽等基本營養(yǎng)成分。 完全 培養(yǎng)基 包含使植物離體生長全面營養(yǎng)。 （ 二 ） 幾種常用培養(yǎng)基 細胞工程常用的基本培養(yǎng)基有： MS、 MT、 White、 Nitsch、 Blaydes、 N B NT、 SH、 Miller、 Heller等 。 （ 三 ） 幾種常見培養(yǎng)基的特點 富鹽平衡培養(yǎng)基 無機鹽濃度高 ， 元素比例適當 ， 離子平衡好 ， 具有較強的緩沖性 ， 培養(yǎng)中維持較好的穩(wěn)定性， 含高量氮 、 鉀 ， 營養(yǎng)豐富 ， 元素種類齊全 ， MS培養(yǎng)基使用最廣泛 。 低鹽培養(yǎng)基 無機鹽濃度低，有機成分含量低，多數(shù)作為生根培養(yǎng)基、胚胎培養(yǎng)使用，常用 White培養(yǎng)基。 高硝態(tài)鹽培養(yǎng)基 較低銨鹽，高硝酸鹽和鹽酸硫胺素 B5培養(yǎng)基適合雙子葉植物特別是木本植物的生長。 N6培養(yǎng)基為水稻等禾谷類花藥培養(yǎng)設計，KNO3和（ NH4） 2SO4含量高 ,不含鉬。 SH培養(yǎng)基 (NH4)H2PO4代替（ NH4） 2SO4,礦質濃度較高，多數(shù)單子葉和雙子葉植物上使用較好 。 中鹽培養(yǎng)基 大量元素無機鹽為 MS的 1/2，微量元素種類減少含量增高，無肌醇維生素種類多，增加生物素、葉酸，有 H、 Hitsch、 Miller、 Blaydes等培養(yǎng)基，適用于特殊細胞培養(yǎng)。 第二節(jié) 培養(yǎng)基的制備 制作一升培養(yǎng)基所需藥品 20多種 ， 為節(jié)省時間和配制的準確 ， 需將各種藥品濃縮成一定倍數(shù) ， 并且混合成一定母液 ， 進行保存 。 制作培養(yǎng)基時根據(jù)需求制培養(yǎng)基數(shù)量取用母液 。 一、培養(yǎng)基母液的配制 （ 一 ） 營養(yǎng)成分的配制 根據(jù)藥品性質將母液配制成以下四類： 大量元素 可以混在一起配制成 10— 20倍液 ， 硫酸鎂和氯化鈣 Ca２ +和 Mg2+會與磷酸鹽混合 ， 產(chǎn)生不溶性沉淀 ，要分別單獨配制 Ca２ +與 PO4一起混合易沉淀 ， 定容后消失 。 微量元素 可配成 100— 200倍混合母液 ， KI可單獨配 。 鐵鹽 硫酸亞鐵和 EDTA鈉鹽易沉淀 ， 需單獨配制 ， 配成100— 200倍鰲合劑不易沉淀 。 有機化合物 維生素 、 肌醇 、 氨基酸等一起配成 100或 200倍液 ，也可分別配制 。 （ 二 ） 植物生長調節(jié)物質的配制 植物生長調節(jié)物質分別配成母液儲于冰箱 ，濃度一般為 － 1mg/ml。 IAA、 NAA： 先用少量 95%酒精使之充分溶解 。 2,4－ D： 可用少量 ， 再緩緩加蒸餾水定容至需要的體積 。 KT和 BA等 細胞分裂素類： 先用少量 ， 再用蒸餾水定容至需要的體積 。
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