植物組織培養(yǎng)基本操作-免費閱讀
【正文】 適用范圍廣，嫁接移栽也適用于弱苗或污染苗。 ⑷無菌 試管苗所在環(huán)境無菌，與外界有菌環(huán)境不同，試管苗也無菌，同時，培養(yǎng)瓶內氣體環(huán)境較為特殊，與外界環(huán)境有很大差異。 ⑥使用透氣性好的封口膜。 ⑶溫度 低溫易形成玻璃化苗。 ⑷材料轉移時間 時間過長引起材料褐變。 （ 2）外植體的滅菌 多次滅菌法，次氯酸鈉 無菌水 次氯酸鈉 多種藥液交替浸泡法，肥皂水 酒精 次氯酸鈉 無菌水。 如莖尖培養(yǎng) 三、培養(yǎng)中常見問題 （一） 污染 的原因及其預防措施 污染原因 污染是指在組織培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。 愈傷組織 根 芽 植株 。因此，培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)室一般要求相對濕度保持在 7080%，相對濕度過低影響培養(yǎng)物生長和分化，應向室內噴灑水，以提高濕度；過高雜菌滋生，大量污染，應及時地通風除濕。 光照強度 、 光質以及光照時間 ， 對細胞的增殖 、 器官的分化都有很大影響 。 （ 2） 將培養(yǎng)基放入超凈工作臺內 ， 火焰灼燒培養(yǎng)基瓶口 ， 然后打開培養(yǎng)瓶口 ， 置培養(yǎng)瓶為斜角 ， 避免灰塵落入平中 。 超凈工作臺使用前必須用紫外燈照射殺菌 ， 然后開啟風機 。 材料太大易污染 ， 材料太小難于成活 。 供體植株的管理 取自室外的外植體材料 ， 供體植株的管理十分重要 ， 這與外植體培養(yǎng)時的污染率密切相關 。 第三節(jié) 外植體無菌接種 一般來說，無論何種類型的細胞工程技術，起始階段均涉及外植體取材、滅菌、接種與培養(yǎng)等基本過程。 關閉電源自然冷卻至壓力為 0 kPa。 固態(tài)培養(yǎng)基一般使用瓊脂為凝固劑，也有使用卡拉膠或魔芋粉為凝固劑的。 適量蒸餾水放入加熱容器 ， 蒸餾水應少于所制培養(yǎng)基數(shù)量 ， 約終體積的 2/33/4， 接通電源加熱 。 鐵鹽 硫酸亞鐵和 EDTA鈉鹽易沉淀 ， 需單獨配制 ， 配成100— 200倍鰲合劑不易沉淀 。 高硝態(tài)鹽培養(yǎng)基 較低銨鹽，高硝酸鹽和鹽酸硫胺素 B5培養(yǎng)基適合雙子葉植物特別是木本植物的生長。 根據(jù)培養(yǎng)過程分： 初代培養(yǎng)基 初次接種外植體的培養(yǎng)基 。 卡拉膠 海藻提取物，含雜質少純度更高，凝固后培養(yǎng)基透明，利于材料觀察。 常用 6BA、 ZT、 KT、 2iP。 ⑷ 腺嘌呤 合成各種細胞分裂素的前體物質之一 ， 利于細胞分裂 ， 促進芽的形成和生長 。 除 C、 H、 O外，其它礦質元素通常以離子態(tài)吸收 N硝態(tài)氮和銨態(tài)氮 有機化合物 培養(yǎng)基中只有無機鹽叫做 基本培養(yǎng)基 ， 為使培養(yǎng)物更好的生長 ， 還需添加有機成分 ， 常用有糖類 、 維生素 、 醇類 、 嘌呤 、 氨基酸等 。 （ 6）煉苗移栽 選擇生長健壯，有 3～ 5條根的生根苗進行煉苗，移栽到疏松透氣的基質中，注意保溫、保濕、遮蔭。 （ 2）外植體的選擇與消毒 選擇合適的部位作為外植體，采回后經(jīng)過處理，然后進行消毒處理。能夠識別各類培養(yǎng)基特點，熟悉 MS培養(yǎng)基成分；具有制作培養(yǎng)基能力，具有選擇外植體、表面滅菌、無菌接種等基本能力；具有植物組織培養(yǎng)條件控制基本能力；有進行組培苗馴化練苗的基本能力。 當芽苗繁殖到一定數(shù)量后，再將一部分用于壯苗生根，另一部分保存或繼續(xù)擴繁。 一 、 培養(yǎng)基的成分 培養(yǎng)基一般包括無機鹽 、 有機化合物和生長調節(jié)劑三大基本組成成分 。 鹽酸硫胺素 VB 鹽酸吡哆醇 VB 煙酸 Vpp、生物素 VH、 維生素 CVc。 常用 IAA、 IBA、 NAA、 2,4D。 原生質體培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)及分生組織培養(yǎng)一般應用雙蒸水或超純水 大批量快速繁殖培養(yǎng)，可用一般蒸餾水或純凈水。大部分抗生素需要過濾除菌。 （ 二 ） 幾種常用培養(yǎng)基 細胞工程常用的基本培養(yǎng)基有： MS、 MT、 White、 Nitsch、 Blaydes、 N B NT、 SH、 Miller、 Heller等 。 制作培養(yǎng)基時根據(jù)需求制培養(yǎng)基數(shù)量取用母液 。 KT和 BA等 細胞分裂素類： 先用少量 ， 再用蒸餾水定容至需要的體積 。 測試培養(yǎng)基溶液的 PH值 ()， 過高滴加 ， 過低滴加 NaOH調整 。 封閉高壓滅菌鍋各出氣口 。 貯存室要保持無菌 、 干燥 、 以免造成培養(yǎng)基的二次污染 。同時，生長在控制條件下的植物可以保持培養(yǎng)料間的一致性，提高實驗的可重復性，也便于培養(yǎng)技術的規(guī)范。 快速繁殖時應在植株生長的最適時期取材 ， 花藥培養(yǎng)應在花粉發(fā)育到單核期取材 。 表面滅菌 （ 1） 操作人員穿戴滅菌過的工作服 、 口罩 。 常用滅菌劑使用濃度及效果比較表 滅菌劑 使用濃度 持續(xù)時間 去除的難易 效果 次氯酸鈣 910％ 530分鐘 易 很好 次氯酸鈉 2％ 530分鐘 易 很好 氯化汞 ％ 510分鐘 較難 最好 抗菌素 450mg／ L 3060分鐘 中 較好
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