實驗一：質(zhì)粒提取實驗(編輯修改稿)
2025-06-20 01:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 GAATTC 和 AAGCTT CTTAAG TTCGAA DNA在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。 在堿性環(huán)境下，核酸分子之糖 磷酸骨架中的磷酸基團，是呈離子化狀態(tài)的，把這些核酸分子放置在電場當中，它們就會向正電極的方向遷移。由于糖 磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈 DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速度向正電極方向遷移。在一定的電場強度下， DNA分子的這種遷移速度，亦即電泳的遷移率，取決于核酸分子本身的大小和構(gòu)型。 DNA分子的遷移速度與相對分子質(zhì)量的對數(shù)值成反比關(guān)系，可以近似用于估算分子的大小。 可以分離相對分子質(zhì)量相同，但構(gòu)型不同的 DNA分子。共價閉環(huán)超螺旋 DNA＞直線 DNA＞開環(huán)的雙鏈環(huán)狀 DNA。 DNA分子的大小、瓊脂糖凝膠的濃度、 DNA的構(gòu)象、所加電壓、電場方向、嵌入染料的存在、電泳緩沖液的組成。 瓊脂糖凝膠分辨 DNA片段的范圍為 ~50kb之間 接含質(zhì)粒的單菌落于 2ml LB Amp+液體培養(yǎng)基中 ? 370C， 190rpm振蕩培養(yǎng)過夜 ? 取 dorf管中 5000rpm、離心 5min，棄上清，收集菌體 ? 200uL溶液 I+5uLRNA酶懸浮菌體
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