實驗項目：黃酮提取(ppt31頁)(編輯修改稿)
2025-03-16 15:53 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 mL和 mL置于 10mL比色管中，各加 80%乙醇至 5 mL，加 5% NaNO2溶液 mL，搖勻放置 6 min，再加 10 % A1(NO3)3。溶液 mL，搖勻，再放置 6 min，加 4 % NaOH溶液 4mL，搖勻放置15min，在 510 nm波長處，以同法配制空白對照，測定吸光度值，得回歸方程。 ? 樣品黃酮含量測定 ?精密吸取提取液 mL于 10 mL比色管中，按“各加 80 %乙醇至 5 mL”起依法進(jìn)行操作，同時精密吸取黃酮提取液 mL于 10 mL比色管中，加 80 %乙醇至 5 mL，再加 1mL水， 4 mL4 %NaOH溶液，作樣品空白測定吸光度值。按回歸方程計算樣品黃酮提取得率。 四、 實驗步驟 ? ? 福林酚（ FolinCiocalteu）試劑的配制 ?稱取 100 g鎢酸鈉和 25 g鉬酸鈉置于 2L的磨口圓底燒瓶中，用 700 mL蒸餾水溶解，再緩慢加入 50 mL 85 %的磷酸和 100 mL的濃鹽酸，充分混勻，放入數(shù)粒玻璃珠，連接回流冷凝裝置，文火回流10 h。用 50mL蒸餾水沖洗冷凝管上的附著物，拆開冷凝管后加入 150 g無水硫酸鋰和幾滴溴水（邊加邊搖晃），開口繼續(xù)加熱沸騰 15 min，使溴水完全揮發(fā)為止，終點顏色為黃綠色。冷卻后定容至 1000 mL，過濾，儲存于棕色瓶中，放入冰箱中保存?zhèn)溆谩? 四、 實驗步驟 ? 制作沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線 ?精確稱取 g的干燥沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品，用蒸餾水溶解，定容于 100 mL的容量瓶中，配成濃度為700 mg/L的沒食子酸溶液。然后分別精密吸取 0、 、 、 、 mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液定容于 50 mL容量瓶內(nèi)，配成濃度為 056 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。再從各系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取 1mL于 25 mL比色管內(nèi)，加 10 mL蒸餾水，搖勻，再加 mL Folin Ciocalteu試劑，充分搖勻，立即加入 6 mL 10 % Na2CO3溶液，混勻，加水定容，再混勻，然后在 30℃ 下避光放置反應(yīng) 2 h，以試劑樣為空白，在波長 760 nm處測定吸光值，以吸光度值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 四、 實驗步驟 ? 多酚含量的測定采用 FolinCiocalteu反應(yīng)比色法 ?取 1mL提取稀釋液（樣液稀釋 10倍）于 25mL比色管內(nèi)，加 10 mL蒸餾水，搖勻，再加 mL Folin Ciocalteu試劑，充分搖勻，立即加入 6 mL10 % Na2CO3溶液，混勻，加水定容，再混勻，然后在30℃ 下避光放置反應(yīng) 2 h，以試劑樣為空白，在波長 760 nm處測定吸光值，根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算提取液中多酚含量 (以沒食子酸計 )，經(jīng)進(jìn)一步計算即得多酚提取得率。 四、 實驗步驟 ? ? 總黃酮對亞硝酸鈉清除率的測定 ?分別吸取 50 mg/L的 NaNO2標(biāo)準(zhǔn)液 mL于 6支 25 mL比色管中，再分別加入提取液 、 、 、 、 、 mL，加入 的檸檬酸 磷酸氫二鈉緩沖液 10 mL， 37℃ 條件下反應(yīng) 1h。加入質(zhì)量分?jǐn)?shù) % 對氨基苯磺酸 mL，搖勻靜置 5 min，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù) % 鹽酸萘乙二胺 mL，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻靜置 15 min。在確定的最大吸收波長 λmax = 540 nm 處測定吸光度，并計算總黃酮對亞硝酸鈉清除率。 四、 實驗步驟 ? 總黃酮對亞硝胺合成阻斷率的測定 ?分別吸取總黃酮提取液 、 、 、 、 、 mL，于 6支 25 mL 比色管中。加入 pH 的檸檬酸 磷酸氫二鈉緩沖液 10 mL， 1 mmol/L 的 NaNO2 溶液 mL， 1 mmol/L 的二甲胺溶液 mL，用蒸餾水稀釋至刻度，在37℃ 條件下恒溫 1 h。用移液管吸取 上述溶液加到 7 cm2 培養(yǎng)皿中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù) % Na2CO3 溶液 mL，于紫外分析儀 (254nm 波長 )上輻照 15 min。取出后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù) 1% 對氨基苯磺酸 mL，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù) % 1萘胺 mL，蒸餾水 mL，搖勻靜置 15 min。用分光光度計在確定的最大吸收波長 λmax = 525 nm 處測吸光度，計算總黃酮對亞硝胺合成阻斷率。 四
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