腫瘤細胞培養(yǎng)技術(shù)林星石(編輯修改稿)
2025-06-19 01:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 單克隆抗體的制備 特點： ?腫瘤細胞易體外培養(yǎng)和長期生長； ?B淋巴細胞 分泌特異性抗體； ?二者雜交融合雜交瘤，繼承二者性質(zhì)。 ?HAT培基： H— 次黃嘌呤、 A— 氨基蝶呤 T— 胸腺嘧啶核苷 單克隆抗體的制備 腫瘤細胞 DNA合成途徑： 葉酸衍生物 氨基酸、小分子化合物合成 DNA HGPRT TK 次黃鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 胸腺嘧啶核苷激酶 核苷酸前體 單克隆抗體的制備 HAT特點：“ A”— 葉酸拮抗物 骨髓瘤 骨髓瘤： DNA合成途徑阻斷；缺 HGPRT， 不能利用 “ H”— 死亡。 脾細胞 脾細胞： 有 HGPRT，缺增殖能力 — 死亡。 骨髓瘤 脾細胞： HGPRT+無限增殖能力 — 存活。 單克隆抗體的制備方法 抗原： 純度、分子量。 1. 細胞 1~2?107 2. 可溶性蛋白質(zhì)抗原 10 ~100 μg 動物： BALB/C鼠，周齡： 6~8周，雌性 佐劑： 福氏完全佐劑、福氏不完全佐劑、脂質(zhì)體 免 疫 方 法 ： 腹腔或頸部多點皮下 0 天： 基礎(chǔ)免疫 — 抗原 +完全佐劑 15天： 基礎(chǔ)免疫 — 抗原 +不完全佐劑 30天： 基礎(chǔ)免疫 — 抗原 +不完全佐劑 45天： 追加免疫 — 同量抗原 48天： 進行細胞融合 免 疫 方 法 備注： 1. 細胞、細菌、病毒等顆粒性抗原有較強抗原性，可不加佐劑，直接腹腔注射。 2. 可溶性蛋白質(zhì)抗原需加佐劑。 本研究室經(jīng)驗： 免 疫 方 法 2. 脾內(nèi)免疫： 0 天：基礎(chǔ)免疫 15 天：脾內(nèi)免疫 18 天：細胞融合 0 天：脾內(nèi)免疫 4 天：細胞融合 免 疫 方 法 脾內(nèi)免疫 優(yōu)點： 時間短，使用抗原量少。 可溶性抗原： 2~10?g 細胞抗原： 1 ?105 缺點： 效果差于常規(guī)免疫，尤其無基礎(chǔ)免 疫的脾內(nèi)免疫。 免 疫 方 法 脾內(nèi)免疫方法： BALB/C小鼠乙醚麻醉，右臥位，消 毒，無菌操作剪開皮膚，透過腹膜，用 4 號針頭注射器注入脾臟，盡量刺深，勿刺 透，縱軸方向，邊退邊注射或多點注射。 注意事項： 抗原體積 ? ml，脾內(nèi)逐步注射后， 針頭拔出口時要停留片刻， 縫合切口或用 醫(yī)用黏合劑涂抹切口。 免 疫 方 法 3 . 弱免疫原免疫方案； 0 天：基礎(chǔ)免疫 30 天：基礎(chǔ)免疫 45 天：基礎(chǔ)免疫 60 天：基礎(chǔ)免疫 75 天：基礎(chǔ)免疫 6
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