動物細胞培養(yǎng)技術小鼠脾臟細胞docxdocx(編輯修改稿)
2025-08-13 18:07 本頁面
【文章內容簡介】 腫瘤藥物的藥敏測定，具有靈敏度高，重現性好的特點。（2） 應用噬菌體篩選已確證多種病毒能引起動物腫瘤，噬菌體是細菌的病毒，與腫瘤病毒相似，噬菌體的DNA也可整合到細菌染色體上，隨細菌DNA復制分裂并遺傳至子代細菌，不引起細菌裂解但可引起細菌部分生物學性狀發(fā)生改變。有些物質可使前噬菌體DNA從溶原性細菌染色體上脫落，復制合成并釋放完整的噬菌體，可使敏感的細菌感染裂解——誘導作用。有些有誘導作用的物質常同時具有抗腫瘤的作用。（3） 細胞水平篩選抗腫瘤藥物細胞生物學、分子藥理學、分子生物學、生物化學等學科的發(fā)展為藥物篩選提供了新的方向。細胞水平的藥物篩選模型具有材料用量少、藥物作用機制比較明確和大規(guī)模篩選等優(yōu)點。目前,在細胞水平上對抗腫瘤天然藥物的篩選主要是采用選取幾種腫瘤細胞系,以培養(yǎng)細胞為實驗模型,用結晶紫染色測定法、四甲基噻唑藍(MTT)法、SRB法等檢測天然藥物及其提取物或單體的體外抗腫瘤作用。溫斌等在研究腹腔注射灰樹花提取成分對小鼠免疫功能的影響時,采用乳酸脫氫酶法、結晶紫染色法、MTT生物活性測定法等對小鼠脾自然殺傷(NK)細胞和腹腔巨噬細胞進行檢測,結果表明灰樹花乙醇沉淀物(ET2Pre)和RNA提取物顯著增高了小鼠脾NK細胞殺傷活性、巨噬細胞吞噬功能及腫瘤壞死因子(TNF)2α、白細胞介素(IL)21的產生水平。趙春玲等采用結晶紫染色法和MTT比色法測定了白眉蝮蛇去整合素(rAdinbitor)對人肝癌細胞系SMMC27721細胞向纖連蛋白(FN)黏附的影響,以及對已黏附于FN上的SMMC27721細胞的影響。實驗證明,rAdinbitor能夠劑量依賴性地抑制SMMC27721細胞在FN上的黏附,促使已黏附的SMMC27721細胞脫落。并且能夠劑量依賴性地抑制SMMC27721細胞的增殖并且誘導其調亡。（4）端粒酶活性為作用靶點篩選抗腫瘤的藥物端粒是染色體特殊結構，起著保護染色體的完整和穩(wěn)定性的作用，端粒酶是一種核糖核蛋白反轉錄酶，由RNA和蛋白質組成，可以以自身的RNA為模板合成端粒末端。已發(fā)現在正常的體細胞和良性腫瘤組織中端粒酶的活性是陰性，而在人體惡性腫瘤組織和人的腫瘤細胞株中都表達了很高的活性。因此，認為端粒酶與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的關系，有可能成為腫瘤治療的靶點（5）以DNA拓撲異構酶為靶點篩選天然抗腫瘤藥物DNA拓撲異構酶(DNAtopoisomerases)通過DNA鏈的切割、轉移和再連接來改變DNA的拓撲結構。DNA拓撲異構酶在細胞代謝過程中起著極其重要的作用,如DNA復制、基因轉錄、DNA重組和有絲分裂等?？拱┧幬锵矘鋲A(camptothecin)及其衍生物的作用靶點是真核生物DNA拓撲異構酶Ⅰ,吖啶類化合物、鬼臼毒素類化合物、異黃酮類化合物、多柔比星(doxorubicin)等則作用于真核生物DNA拓撲異構酶Ⅱ。這些藥物可通過DNA拓撲異構酶Ⅰ、Ⅱ引起DNA雙螺旋的一條或兩條鏈的斷裂從而導致腫瘤細胞的死亡。李運曼等通過DNA解螺旋實驗評價紫草素對拓撲異構酶Ⅰ催化活性的抑制作用。結果顯示,紫草素可顯著抑制拓撲異構酶Ⅰ的解螺旋活性,并且能夠抑制人白血病K562細胞的增殖。湯濤等通過實驗首次揭示了鴉膽子油乳能夠特異性地抑制拓撲異構酶Ⅱ的活力,而對拓撲異構酶Ⅰ沒有影響,對DNA也沒有直接作用。這些現象揭示拓撲異構酶Ⅱ是鴉膽子油乳細胞內作用靶點之一(6）作用微管蛋白的天然抗腫瘤藥物的篩選方法微管(microtubule)是由αβ微管蛋白異二聚體聚合而成的管狀聚合物,是真核細胞骨架的重要組成部分。微管參與許多細胞功能,包括維持細胞形態(tài)、細胞內運輸、鞭毛和纖毛的運動、染色體運動和細胞分裂等。無論是促進微管蛋白聚合、穩(wěn)定已形成的微管類藥物,還是以抑制微管蛋白聚合類藥物都通過影響腫瘤細胞的有絲分裂過程,使其生長受到抑制。因此,微管已成為腫瘤的臨床治療的有效靶點。KLEIN等用紫杉醇和discodermolide(1990年從海綿動物Discodermiadissoluta中分離得到的多羥基內酯化合物)分別作用A549肺癌細胞,結果顯示它們均能迅速導致有絲分裂的異常。進一步的研究發(fā)現discodermolide和紫杉醇聯合作用具有明顯的協同作用。1999年MOOBERRY等從海綿Cacospongiamycofijiensis,Fasciospongiarimosa和Hyattellasp.中均發(fā)現了新型促進微管穩(wěn)定化合物laulimalide和isolaulimalide。Laulimalide可以有效促進微管蛋白的聚合,并且與紫杉醇誘導形成的微管蛋白聚合體相似,但促聚合作用低于紫杉醇。用laulimatide處理A210細胞可導致劑量依賴性細胞微管網的重組和異常紡錘體的形成,并能誘導染色體的卷繞和多核仁的形成。（7）應用調節(jié)細胞信號傳導通路篩選方法近年來,部分抗腫瘤藥物的研發(fā)已從傳統的細胞毒藥物轉移到針對腫瘤細胞內信號傳導通路的新型抗腫瘤藥物。正常細胞和腫瘤細胞在多種信號傳導通路的關鍵組分間存在巨大差異,因此靶向這些組分的抗腫瘤藥物具有高選擇性、高效、低毒的特征。目前,藥物干預腫瘤細胞信號通路主要是通過環(huán)腺嘌呤核苷酸2蛋白激酶A通路、酶聯受體信號通路、磷脂酰肌醇信號通路、鈣和鈣調蛋白通路等幾個通路實現。S
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