腫瘤細胞培養(yǎng)技術(shù)林星石-文庫吧資料
2025-05-22 01:25本頁面
【正文】 巴細胞與骨髓瘤細胞，融合。 免 疫 方 法 3 . 弱免疫原免疫方案； 0 天：基礎(chǔ)免疫 30 天：基礎(chǔ)免疫 45 天：基礎(chǔ)免疫 60 天：基礎(chǔ)免疫 75 天：基礎(chǔ)免疫 6個月內(nèi)，至鼠血清測出抗體產(chǎn)生。 免 疫 方 法 脾內(nèi)免疫方法： BALB/C小鼠乙醚麻醉，右臥位，消 毒，無菌操作剪開皮膚，透過腹膜，用 4 號針頭注射器注入脾臟，盡量刺深，勿刺 透，縱軸方向，邊退邊注射或多點注射。 本研究室經(jīng)驗： 免 疫 方 法 2. 脾內(nèi)免疫： 0 天：基礎(chǔ)免疫 15 天：脾內(nèi)免疫 18 天：細胞融合 0 天：脾內(nèi)免疫 4 天：細胞融合 免 疫 方 法 脾內(nèi)免疫 優(yōu)點： 時間短，使用抗原量少。 1. 細胞 1~2?107 2. 可溶性蛋白質(zhì)抗原 10 ~100 μg 動物： BALB/C鼠，周齡： 6~8周，雌性 佐劑： 福氏完全佐劑、福氏不完全佐劑、脂質(zhì)體 免 疫 方 法 ： 腹腔或頸部多點皮下 0 天： 基礎(chǔ)免疫 — 抗原 +完全佐劑 15天： 基礎(chǔ)免疫 — 抗原 +不完全佐劑 30天： 基礎(chǔ)免疫 — 抗原 +不完全佐劑 45天： 追加免疫 — 同量抗原 48天： 進行細胞融合 免 疫 方 法 備注： 1. 細胞、細菌、病毒等顆粒性抗原有較強抗原性，可不加佐劑，直接腹腔注射。 骨髓瘤 脾細胞： HGPRT+無限增殖能力 — 存活。 ?HAT培基： H— 次黃嘌呤、 A— 氨基蝶呤 T— 胸腺嘧啶核苷 單克隆抗體的制備 腫瘤細胞 DNA合成途徑： 葉酸衍生物 氨基酸、小分子化合物合成 DNA HGPRT TK 次黃鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶 胸腺嘧啶核苷激酶 核苷酸前體 單克隆抗體的制備 HAT特點：“ A”— 葉酸拮抗物 骨髓瘤 骨髓瘤： DNA合成途徑阻斷；缺 HGPRT， 不能利用 “ H”— 死亡。 ? 1975年 Kohler 和 Milstein 首先利用細胞融合技術(shù)制備了永久分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株。 單克隆抗體的制備 ? 單克隆抗體定義：來自克隆系的細胞基因完全相同，產(chǎn)生的抗體完全相同。 技術(shù) 鑒定與建株 ? 鑒定： 組織來源 、形態(tài)特征、核型染色體分析、生長特性、對細胞因子的反應(yīng)（ TNF)、集落形成、致瘤實驗（裸小鼠） ? 建株： 生長半年以上，病理診斷、光鏡及電鏡觀察、生長特征、染色體分析、腫瘤標(biāo)志、致瘤及轉(zhuǎn)移情況 ? 注意： 不是每一腫瘤組織都能建株 應(yīng)用 腫瘤治療的研究 ? 治療藥物敏感性的鑒定與篩選 ? 腫瘤的多藥耐藥性的鑒定 ? 各種新藥治療的實驗研究 體外
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