細胞培養(yǎng)的基本技術原理-文庫吧資料
2025-07-20 01:51本頁面
【正文】 的干凈，直接影響到細胞培養(yǎng)的成敗。浸酸不應少于六小時，一般過夜或更長。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾干，備浸酸。 2 刷洗 將浸泡后的玻璃器皿放到洗滌劑水中，用軟毛刷反復刷洗。 1 浸泡 新的或用過的玻璃器皿都要先用清水浸泡， 軟化和溶解附著物。因此，新的或重新使用的器皿都必須認真清洗，達到不含任何殘留物的要求。 第四節(jié) 常用培養(yǎng)器皿及清洗消毒 細胞培養(yǎng)需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠制品、布類、紙類等，因此掌握清洗、消毒知識，學會清洗、消毒方法是從事細胞培養(yǎng)工作必須的。 超凈臺的使用與保養(yǎng)： 米/秒為宜，過大、過小均不利于保持凈化度；使用前最好開啟超凈臺內紫外燈照射 10－30 分鐘， 然后讓超凈臺預工作10－15 分鐘， 以除去臭氧和使用工作臺面空間呈凈化狀態(tài)；使用完畢后，要用 70%酒精將臺面和臺內四周擦拭干凈，以保證超凈臺無菌。 二、超凈工作臺 工作原理：鼓風機驅動空氣通過高效過濾器得以凈化，凈化的空氣被徐徐吹過臺面空間而將其中的塵埃、細菌甚至病毒顆粒帶走，使工作區(qū)構成無菌環(huán)境。 此外， 還應注意防止無菌室的污染。 無菌室的消毒和防污染：為保持無菌狀態(tài)，經常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2 小時） ，每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2 小時）和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進行消毒。 五、常用儀器設備 無菌室,超凈工作臺,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恒溫培養(yǎng)箱,培養(yǎng)器具，CO2培養(yǎng)箱,恒溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機,無菌過濾器,洗刷裝置,細胞計數(shù)板和電子細胞技術儀等等。然后將細胞轉入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。 四、凍存及復蘇（可參閱后面有關章節(jié)）為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。 細胞長滿瓶底后要進行傳代培養(yǎng)， 將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。 原代培養(yǎng)一般有一段潛伏期（數(shù)小時到數(shù)十天不等） ，在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和游走。細胞進入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細胞盡早進入生長狀態(tài)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個小時后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。取材后應立即處理，盡快培養(yǎng)， 因故不能馬上培養(yǎng)時，可將組
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