細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)原理(編輯修改稿)
2025-08-10 01:51 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 行培養(yǎng)。 凍存過(guò)程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響。 五、常用儀器設(shè)備 無(wú)菌室,超凈工作臺(tái),三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恒溫培養(yǎng)箱,培養(yǎng)器具，CO2培養(yǎng)箱,恒溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機(jī),無(wú)菌過(guò)濾器,洗刷裝置,細(xì)胞計(jì)數(shù)板和電子細(xì)胞技術(shù)儀等等。 第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的無(wú)菌環(huán)境 一、無(wú)菌室 無(wú)菌室的結(jié)構(gòu)：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。 無(wú)菌室的消毒和防污染：為保持無(wú)菌狀態(tài)，經(jīng)常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2 小時(shí)） ，每周甲醛、乳酸、過(guò)氧乙酸熏蒸（2 小時(shí)）和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒。實(shí)際工作中，要根據(jù)無(wú)菌室建筑材料的差異來(lái)選擇合適的消毒方法。 此外， 還應(yīng)注意防止無(wú)菌室的污染。 造成無(wú)菌室污染的可能包括： 送入無(wú)菌室的風(fēng)沒(méi)有被過(guò)濾除菌； 進(jìn)出無(wú)菌室時(shí)，能使外界空氣直接對(duì)流進(jìn)無(wú)菌室的操作間；等。 二、超凈工作臺(tái) 工作原理：鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣通過(guò)高效過(guò)濾器得以凈化，凈化的空氣被徐徐吹過(guò)臺(tái)面空間而將其中的塵埃、細(xì)菌甚至病毒顆粒帶走，使工作區(qū)構(gòu)成無(wú)菌環(huán)境。根據(jù)氣流在超凈工作臺(tái)的流動(dòng)方向不同，可將超凈工作臺(tái)分為側(cè)流式、直 流式和外流式三種類型。 超凈臺(tái)的使用與保養(yǎng)： 米/秒為宜，過(guò)大、過(guò)小均不利于保持凈化度；使用前最好開(kāi)啟超凈臺(tái)內(nèi)紫外燈照射 10－30 分鐘， 然后讓超凈臺(tái)預(yù)工作10－15 分鐘， 以除去臭氧和使用工作臺(tái)面空間呈凈化狀態(tài)；使用完畢后，要用 70%酒精將臺(tái)面和臺(tái)內(nèi)四周擦拭干凈，以保證超凈臺(tái)無(wú)菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈臺(tái)。 第四節(jié) 常用培養(yǎng)器皿及清洗消毒 細(xì)胞培養(yǎng)需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠制品、布類、紙類等，因此掌握清洗、消毒知識(shí)，學(xué)會(huì)清洗、消毒方法是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作必須的。 一、清洗 離體條件下，有害物質(zhì)直接同細(xì)胞接觸，細(xì)胞對(duì)任何有害物質(zhì)十分敏感，極少殘留物都可以對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必須認(rèn)真清洗，達(dá)到不含任何殘留物的要求。 （一）玻璃器皿的清洗 一般經(jīng)過(guò)浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四個(gè)步驟。 1 浸泡 新的或用過(guò)的玻璃器皿都要先用清水浸泡， 軟化和溶解附著物。 新玻璃器皿使用前得先用自來(lái)水簡(jiǎn)單刷洗，然后用5％鹽酸浸泡過(guò)夜；用過(guò)的玻璃器皿往往附有大量蛋白質(zhì)和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后應(yīng)立即浸入清水中備刷洗。 2 刷洗 將浸泡后的玻
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