自學內(nèi)容2分子雜交技術(shù)(編輯修改稿)
2025-06-18 08:00 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 hern雜交 ? 雜交結(jié)果的檢測 Northern 印跡雜交 (Northern bloting) ? 檢測 RNA（主要是 mRNA）的方法 ? 與 Southern雜交的不同 –靶核酸： RNA – RNA電泳 –轉(zhuǎn)膜：不需變性 Western 雜交印跡法 (Western bloting) ? 檢測蛋白質(zhì)，即將電泳分離的非標記蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體上，用特異的抗血清對蛋白質(zhì)進行鑒定及定量的方法 ? 主要步驟： –蛋白質(zhì)樣品的制備 –聚丙烯酰胺凝膠 –蛋白質(zhì)的電轉(zhuǎn)移：尼龍膜 –靶蛋白的免疫學檢測 ? 靶蛋白于第一抗體（一抗）反應 ? 與標記的第二抗體（酶標二抗）反應 ? 顯色反應：酶促反應 斑點印跡 Dot blotting ? 斑點雜交法是 不經(jīng)過電泳 ，而將被檢標本直接點到膜上，烘烤固定，用于雜交。這種方法耗時短，可做 半定量分析 ，一張膜上可同時檢測多個樣品。 原位雜交 in situ hybridization ? 即組織原位雜交，指組織切片或細胞涂片直接用于雜交分析。先經(jīng)適當處理，使 細胞通透性增加 ，讓探針進入細胞內(nèi)與 DNA或 RNA雜交。 ? 因此原位雜交可以確定探針的互補序列在 胞內(nèi)的空間位置 ，這一點具有重要生物學和病理學意義。 原位雜交 (in situ hybridization) ? 將標記的核酸探針與 細胞或組織中的 核酸進行雜交，稱為原位雜交。 ? 特點 –能在成分復雜的組織中進行單一細胞的研究 –不需從組織或細胞中提取核酸，對含量極低的靶序列靈敏度高 –能準確反映組織細胞的相互關系及功能狀態(tài) 核酸原位雜交的基本步驟 ? 細胞或組織的固定：載玻片 ? 組織細胞雜交前的預處理 –用去垢劑或蛋白酶除去核酸表面蛋白質(zhì) ? 探針的選擇和標記 ? 雜交 ? 雜交結(jié)果檢測 FISH（ fluorescence in situ hybridization）技術(shù)是一種重要的非放射性原位
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