自學(xué)內(nèi)容2分子雜交技術(shù)(編輯修改稿)
2025-06-18 08:00 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 hern雜交 ? 雜交結(jié)果的檢測(cè) Northern 印跡雜交 (Northern bloting) ? 檢測(cè) RNA（主要是 mRNA）的方法 ? 與 Southern雜交的不同 –靶核酸： RNA – RNA電泳 –轉(zhuǎn)膜：不需變性 Western 雜交印跡法 (Western bloting) ? 檢測(cè)蛋白質(zhì)，即將電泳分離的非標(biāo)記蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體上，用特異的抗血清對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定及定量的方法 ? 主要步驟： –蛋白質(zhì)樣品的制備 –聚丙烯酰胺凝膠 –蛋白質(zhì)的電轉(zhuǎn)移：尼龍膜 –靶蛋白的免疫學(xué)檢測(cè) ? 靶蛋白于第一抗體（一抗）反應(yīng) ? 與標(biāo)記的第二抗體（酶標(biāo)二抗）反應(yīng) ? 顯色反應(yīng)：酶促反應(yīng) 斑點(diǎn)印跡 Dot blotting ? 斑點(diǎn)雜交法是 不經(jīng)過電泳 ，而將被檢標(biāo)本直接點(diǎn)到膜上，烘烤固定，用于雜交。這種方法耗時(shí)短，可做 半定量分析 ，一張膜上可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品。 原位雜交 in situ hybridization ? 即組織原位雜交，指組織切片或細(xì)胞涂片直接用于雜交分析。先經(jīng)適當(dāng)處理，使 細(xì)胞通透性增加 ，讓探針進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與 DNA或 RNA雜交。 ? 因此原位雜交可以確定探針的互補(bǔ)序列在 胞內(nèi)的空間位置 ，這一點(diǎn)具有重要生物學(xué)和病理學(xué)意義。 原位雜交 (in situ hybridization) ? 將標(biāo)記的核酸探針與 細(xì)胞或組織中的 核酸進(jìn)行雜交，稱為原位雜交。 ? 特點(diǎn) –能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究 –不需從組織或細(xì)胞中提取核酸，對(duì)含量極低的靶序列靈敏度高 –能準(zhǔn)確反映組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài) 核酸原位雜交的基本步驟 ? 細(xì)胞或組織的固定：載玻片 ? 組織細(xì)胞雜交前的預(yù)處理 –用去垢劑或蛋白酶除去核酸表面蛋白質(zhì) ? 探針的選擇和標(biāo)記 ? 雜交 ? 雜交結(jié)果檢測(cè) FISH（ fluorescence in situ hybridization）技術(shù)是一種重要的非放射性原位
范文總結(jié)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1